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文档简介

Westernblot实验技术

张蓓精选课件WesternBlot基本原理

在电场的作用下将电泳分离的多肽从凝胶转移至一种固相支持体,然后用这种多肽的特异抗体来检测。精选课件一、实验原理WesternBlot法又称免疫印迹法(IBT),分三个阶段进行。第一阶段:SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS)。第二阶段:电转移。第三阶段:固相酶免疫测定。精选课件精选课件三、固相酶免疫测定检测ENA自身抗体精选课件(一)原理精选课件精选课件(二)材料1、洗涤液:含0.05%吐温-20的pH7.4的PBS2、酶标抗人IgG3、阴性对照血清、阳性对照血清4、底物溶液5、终止液6、恒温摇床、微量加样器、反应槽、塑料袋、滴管、吸管等。

精选课件精选课件(三)方法

1.次日取出已封闭的NC膜,用洗涤液漂洗5次,每次1min。2.将剪下条带放入反应槽中,加入1ml洗涤液,再已加入20μl血清混匀,37℃恒温摇动40min。3.取出洗涤液漂洗5次,每次1min。4.加入1ml酶标羊抗人IgG,37℃恒温摇动30min。5.取出洗涤液漂洗5次,每次1min。6.加入底物液1ml,显色10min。7.加入终止液终止反应。精选课件精选课件结果判断用肉眼观察。出现染色条带为阳性,不出现染色条带为阴性,不同的疾病可以出现不同的条带。跟据条带位置判断结果。判断标准:1.抗Sm抗体:同时出现29KD、28KD、13.5KD条带。2.抗SSA抗体:60KD、52KD任意出现一条带。3.抗SSB抗体:47KD、45KD应用时出现条带。4.抗Jo-1抗体:5

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