修改后流式细胞仪

FC500流式细胞仪介绍

美国贝克曼库尔特公司吴良伟

1947年WallaceCoulter发明了库尔特细胞计数原理1953年推出了世界上第一台流式细胞分析仪CoulterCounterModelA1972年推出世界上第一台单激光细胞分析仪1975年研制出世界上第一台带计算机的流式细胞仪1984年和1986年相继推出临床型流式细胞仪EPICSII、PROFILEII1989年世界上第一台空冷激光带石英流动室的流式细胞仪EPICSELITE1993年世界上第一台单激光三色流式细胞仪1999年世界上第一台四色流式细胞仪EPICSXL2002年BeckmanCoulter公司首先开始应用先进的高精度的数字化颜色补偿技术（ADC）2003年世界上第一台单激光五色的流式细胞仪EPICSFC500流式细胞仪的原理流式细胞术的基本概念流式细胞术（FlowCytometry,简称FCM）是一种可以快速、准确、客观，并且同时检测单个微粒（通常是细胞）的多项特性，并加以定量的技术.研究对象为生物颗粒，如各种细胞、微生物及人工合成微球等研究的微粒特性包括多种物理及生物学特征，并加以定量流式细胞术的特点极短时间内可分析大量细胞，只要标本中的细胞数量足够，流式细胞仪（Flowcytometer）可以每秒钟数十、数百、数千个细胞的速率进行测量，测量的细胞总数可达数千、数万乃至数百万个。高可同时分析单个细胞的多种特征，当同时用多种分子探针，如用不同荧光素标记的不同单克隆抗体进行多色荧光染色，通过流式细胞分析，即可获得单细胞的多种信息，使细胞亚群的识别、计数更为准确。准定性或定量分析细胞：通过荧光染色对单细胞的某些成分如DNA含量、抗原或受体表达量、Ca2+浓度、酶活性以及细胞的功能等均可进行单细胞水平的定性与定量分析。精流式细胞仪的检测范围细胞结构细胞大小细胞粒度细胞表面面积核浆比例DNA含量与细胞周期RNA含量蛋白质含量细胞功能细胞表面/胞浆/核的特异性抗原细胞活性细胞内细胞因子酶活性激素结合位点细胞受体基本原理流路流动室 鞘液SHEATH样本流SAMPLE单细胞悬液5*105~1*106个/ml光路光源滤片光电倍增管PMTHV电路放大电路HV及GAIN增益A/D转换统计：计算机

（一）流路单细胞悬液这一过程,称为流体动力学聚焦FLOWCELLInjectorTipFluorescencesignalsFocusedlaserbeamSheathfluid（二）光路光源: （与通过的细胞聚焦在同一点上） 激光：单激光或多激光激发多色荧光

（二）光路

检测信号

散射光信号 FS:前向角散射光 SS:侧向角散射光(90度散射光)荧光信号 荧光染料 光学滤片散射光信号RightAngleLightDetector

CellComplexitySSCForwardLightDetector

CellSurfaceArea

FSCIncidentLightSource前向角散射光（FSC,ForwardScatter） 细胞相对大小及其表面积侧向角散射光（SSC,SideScatter） 细胞粒度及细胞内相对复杂性LaserFALSSensor外周全血细胞散射光双参数点图

（红细胞溶解后）SideScatterForwardScatter流式细胞仪的检测的荧光信号荧光信号使用荧光标记的单克隆抗体染色，做多色分析荧光信号的强弱，反映了细胞抗原的表达含量FITCPE-Cy5PE常用荧光染料的特性荧光染料激发波长(nm)发射波长(nm)用途颜色FITC488525免疫荧光绿色PE(RD1)488575免疫荧光橙色ECD488620免疫荧光橙红PeCy5488675免疫荧光红PI488620DNA染色橙红PECy7 488 755 免疫荧光 深红PerCP 488 670APC633 67002004006008001000PIFluorescence（DNA含量）数据分析直方图分析数据分析双参数点图分析数据分析

三维图分析Cytomics™FC500临床科研型流式细胞仪CytomicsFC500－最新的包含多种高新技术的多色分析机：第一台单激光5色机型，高灵敏度，全自动化设置Cytomics™C500各种革新化的设计合理的光路设计488nm单激光激发五色荧光标准模式确保在同一个细胞上获得最多的信息。可选633nm氦氖红色激光20mW－－激光束共线性重叠（双激光束共线性重叠避免时间延迟和校准问题）增加了染料的选择范围。灵活的光源选择单激光就能激发5色荧光20mW@488nmBlueair-cooledargon(氩离子激光)世界上第一台,贝克曼库尔特公司独家开发单激光同时激发5色荧光，确保信号来源于同一个细胞，结果准确可靠其它公司机器单激光只能激发4色，第5色需要安装第二根激光激发。由于有两个检测点，在鞘液压力变化、样品浓度、样品大小不均、转换采样速度时不能确保信号来源于同一个细胞，信号收集容易发生错误更准确地找到细胞

高分辨率的『多角度前向角散射光』检测功能前向散射光检测器2个角度选择

(1-8°,1-19°)（能够针对不同的细胞类型进行精确调整，特别是样本中细胞或颗粒大小非常不均一时更容易将细胞集中成群，应用范围更加广泛。）FC500是唯一一台提供两种检测角度的散射光的流式细胞仪前向散射光检测器-2个角度选择(1-8°,1-19°)各种革新设计增加仪器灵敏度采用最先进的光纤通讯，光纤速度：10MB/sec。采用20比特的数字信号转换和传输：反应迅速，信号稳定，高度保真，减少量子化产生的误差一、数字化流式细胞仪FC500的20比特信息量在目前所有流式细胞仪中含量最高二、5个新型的红光敏感PMTs,检测范围185-900nm（量子效率大大提高）各种革新设计增加仪器灵敏度全程光路创新的光学设计高精度的一体化聚焦棱镜信躁比完全得到优化光路收集的角度变大(64°vs.48°)精准的光学聚焦无限远设计–荧光收集镜片&光学小孔组合64°500pinhole各种革新设计增加仪器灵敏度三、更大的光路收集角度收集更多的荧光信号FC500应用最精确的全矩阵软件进行自动全矩阵颜色正向补偿（任何两个荧光检测通道之间都可以进行补偿）,时时补偿和脱机补偿FC500所有荧光检测通道还可以进行自动全矩阵颜色反向补偿，避免由于补偿造成的荧光信号的丢失四、最先进的正反全矩阵补偿方法各种革新设计增加仪器灵敏度最全面最高级的数字化补偿系统自动设置功能－实时自动补偿每个通道电压自动调整2-5色全自动补偿以细胞而不是微球进行自动荧光交叉和重叠的计算可以根据不同的应用而分别设置利用20比特的数据进行数字化补偿－实时手工补偿全矩阵正反补偿20比特未补偿的原始数据能提供LMD结果直接补偿获取后通过滑调调节迅速重新补偿特别适用于三色以上补偿，准确方便适用于三色以下补偿和提供多色人工修正补偿的机会对于分群明显但补偿不好的文件可以在结果中直接补偿Quickset直接通过拖拽方式调节电压，简单方便。QuickComp直接通过拖拽方式进行实时或文件的颜色补偿，简单方便。listComp对保存的文件进行颜色补偿及脱机补偿Autosetup可以进行快速，自动化的应用设置，包括电压和颜色补偿，最大限度减少人为误差。基于Windows2000系统平台高度自动化人性化的CXP软件特点将数据直接输出至EXCEL表格中强大的兼容性

将图形以点击及拖曳方式输出至WORD及PPT文件中强大的兼容性该PRISM浓缩柱形图可在一张图上显示32个以上的数据结果，可以将实验所分析的所有细胞数据结果简单地浓缩在一张直方图上，能直接读出各种阴性或阳性组合的结果，清晰直观而且便于数据的保存。软件(报告单)软件(QC数据库)自动QC监测和LeveyJennings图更新.QC结果可输出到MSExcel.创建IQAP报告.MCL32支试管自动上样盘MCL自动模式.MCL直接(或手动)模式.单管固定位置进样.可以暂停/旋转以方便随时添加刺激剂等条码识别Walkaway独立获取样本，减轻操作劳动每支试管检测前单独震动混匀，有利于均匀获取细胞一、标准配置的高通量自动化上样系统丰富灵活的上样系统可选MPL(无需任何硬件更换)24孔96孔40管(12x75mm)固定样本体积样本混匀功能二、独家的可升级多平台上样系统可以减少高通量工作需要的烦杂的取样过程适合于零成本绝对计数将您的注意力从操作中解放出来，而集中于思路的创新丰富灵活的上样系统FC500特点1根激光同时激发5色荧光

2个检测角度

3种全自动进样方式

4种自动的软件分析，中文报告模式

5X5全矩阵正反荧光信号补偿6可实现多人在各人的电脑上独立使用数据分析软件，无操作系统限制FC500流式细胞仪的应用流式细胞仪的临床应用HIV免疫分型，CD4绝对计数淋巴细胞亚群分析白血病和淋巴瘤的免疫分型肿瘤的细胞周期和倍体分析网织红细胞计数细胞移植的免疫状态监测干细胞计数阵发性血红蛋白尿HLA-B27检查血小板功能及相关疾病流式细胞仪的科研应用免疫功能研究抗原特异性T细胞的表达血小板分析（心脑血管疾病）细胞周期和倍体分析细胞凋亡干细胞研究树突细胞研究肿瘤相关基因表达的研究抗肿瘤药物作用机制以及多药耐药性的研究放疗/化疗疗效的研究流式细胞仪的应用（免疫）各种免疫细胞数量的检测：T细胞、B细胞、NK细胞……):淋巴细胞亚群的检测通过各种免疫活化指标及细胞因子的检测评估动物模型、人体的免疫状态。一些功能性细胞（DC细胞、调节性T细胞）在机体免疫过程中发挥特殊的作用。如何找到真正的疾病相关的特异性T细胞是“对症下药”和制备高效率和高敏感性疫苗的关键－－Tetramer四聚体技术细胞信号传导途径（磷酸化蛋白检测）在药物筛选中的作用淋巴细胞亚群分析使用经荧光素标记的特异单克隆抗体，进行多色染色，同时分析淋巴细胞膜上多种白细胞分化抗原（CD分子）的表达，可以将淋巴细胞亚群区分开，进行定性分析各淋巴细胞亚群的百分含量淋巴细胞亚群的绝对计数，进行定量分析淋巴细胞亚群T淋巴细胞(CD3+)名称功能CD3+CD4+辅助性/诱导性T细胞(Th/Ti)辅助和诱导细胞免疫和体液免疫CD3+CD4+CD29+CD3+CD4+CD29-辅助性T细胞(Th)诱导性T细胞(Ti)辅助细胞免疫和体液免疫诱导细胞免疫和体液免疫CD3+CD8+抑制性/杀伤性T细胞(Ts/Tc)抑制免疫反应/杀伤异源细胞CD3+CD8+CD28-CD3+CD8+CD28+-抑制性T细胞(Ts)杀伤性T细胞(Tc)抑制细胞和体液免疫细胞毒性T细胞CD3+CD4+CD8+活化的T细胞在T细胞恶性增生时升高

CD3+CD4-CD8-有调节功能的T细胞,其表达

/T细胞受体(TCR/)CD4+/CD8+比值比值升高免疫亢进，比值降低见于艾滋病、病毒感染CD3+CD45RA+CD45RO-初始的T淋巴细胞

当免疫系统没有能力更新辅助性或抑制性/细胞毒性淋巴细胞的祖细胞时此细胞亚群较低

CD3+CD45RA-CD45RO+记忆性T淋巴细胞

病菌感染时升高,但在慢性病毒感染,如HIV患者中降低CD3+CD45RA+CD45RO+活化的T细胞,感染时升高

感染时升高淋巴细胞亚群活化T淋巴细胞名称功能CD3+HLA-DR+活化T细胞CD4+HLA-DR+活化的辅助性/诱导性T细胞CD8+HLA-DR+活化的抑制性/杀伤性T细胞CD4+CD25+活化的辅助性/诱导性T细胞CD8+CD25+CD8+CD38+HLA-DR+活化的抑制性/杀伤性T细胞在病毒感染的患者中增加;其增加意味着HIV患者的预后较差B淋巴细胞(19+)CD19+CD23+活化的B细胞过敏患者中升高

CD19+CD5+在自身免疫性疾病中升高

CD19+CD5+CD23+慢性B细胞白血病及单克隆B淋巴细胞

NK细胞CD3+CD(16+56)+自身免疫性疾病时降低,而病毒感染时升高

CD3+CD57+CMV(巨细胞病毒)感染的强烈征兆

三色淋巴细胞亚群分析淋巴细胞经CD4-FITC,CD8-PEandCD3-PC5标记

CD3+CD4+Th细胞CD3+CD8+Ts细胞淋巴细胞

活化功能研究T淋巴细胞活化细胞数目增殖细胞表面表达活化标记分泌细胞因子T细胞激活抗原表达的动力学曲线应用实例：HIV病例T细胞活化检测活化的淋巴细胞分泌细胞因子T细胞的细胞因子分型Ⅰ型介导细胞免疫反应引起迟发过敏反应、巨噬细胞活化、2型反应下调刺激来源：病毒、某些细菌Ⅱ型介导体液免疫反应引起B细胞增殖、分泌多克隆免疫球蛋白、1型反应下调刺激来源：多细胞寄生虫、过敏源细胞因子相关的主要研究领域肿瘤肾炎感染（SARS/禽流感）自身免疫病超敏反应移植排斥反应免疫缺陷病血液疾病

IFNg TNFaIL-4CD69-PC5CD69-PC5IFNg-PETNFa-PE10.6%8.2%2.4%16.6%IFNg-PETNFa-PEAnalysisofcytokineproductioninactivatedTcellsCD3+CD8+TCellsCD3-PC7SSCD3-PC7CD8-FITCCD3-PC7CD4-ECD

CD3+CD4+TCellsIL-4IL-4CD69-PC50.18%0.55%细胞内细胞因子分析

（SEB/CD28ActivatedTcells）BeadsBasedAssay(BBA)胞外细胞因子检测系统简介BBA是一系列荧光强度不同、大小不等的包被有捕获抗体的微球，类似于ELISA的捕获孔板，可以捕获相应的抗原，再结合第二种荧光检测抗体，形成一种双抗体夹心结构，能结合上，就能发出荧光来，从而检测到相应的抗原。简而言之，将包被有不同抗体的微球混合在一个样本中即可进行多参数检测。应用领域：主要用于血清、血浆、培养细胞上清、眼泪或房水等各种液相中可溶性细胞因子的浓度检测细胞凋亡等信号传导研究，磷酸化蛋白定量分析什么是BBA?ELISABeadsBasedAssay(BBA)单个样本，同时定量液相中多种蛋白浓度抗原抗体反应原理基于流式细胞仪平台=微球给我们提供了多样的平台MultiplesizesBeadsprovideanexpandableassayplatformforusewithaflowcytometerDifferentintensitiesDifferentcolorswithdifferentintensities贝克曼库尔特公司BBA试剂

能同时检测10种细胞因子*HumanTh1/Th2CytokineIKitFL2

(ReporterParameter)FL4

(DifferentiatorParameter)一份样本（25－50ul）一次操作，自动分析高灵敏度，宽线性CellsBeads

细胞表面标记和样本可溶性蛋白同时检测（一）FL1FL4FL2FL4FL1SSFL4EVENTSBeadsCells

细胞表面标记和样本可溶性蛋白同时检测（二）BBA的应用领域血清、血浆或培养液上清等各种液相中细胞因子的浓度检测细胞凋亡等信号传导研究，磷酸化蛋白定量分析免疫细胞功能性研究免疫疾病的监控疫苗研发，药效评价，总体免疫功能分析传染性疾病肿瘤研究树突状细胞分析

（DendriticCells,DC)DC是主要的抗原递呈细胞，同时又是重要的先天免疫细胞，还是具有免疫调控功能的一个细胞群，没有发现特异性的抗原标记DC研究的主要内容包括直接分析计数、体外诱导检测,一般分为两群－PDC,MDC当前DC检测的方法：1）Lin-,CD11c,CD123,同时可能表达CD80,CD86,CD83,DR等2）CD14+16/CD85/CD33,CD14+16/CD85/CD123DC亚群髓样DC在外围截取入侵的病原体迁移至二级淋巴组织向特异的T幼稚细胞呈递抗原浆细胞样DC直接从血迁移至二级淋巴组织产生大量的IFN-alpha:控制病毒感染间接活化T细胞，巨噬细胞,NK细胞,NKT细胞两群树突状细胞－MDC/PDC

髓样CD(14+16)-FITC/ILT3-PE/CD33-PC5:SSFSDCsCD33-PC5SSCD33-PC5ILT3CD(14+16)-FITCILT3EOS浆细胞样CD(14+16)-FITC/ILT3-PE/

CD123-PC5SSFSSSCD123-PC5CD(14+16)-FITCILT3EOSILT3CD123-PC5DC(树突状细胞)临床应用自身免疫性疾病过敏和超敏反应移植肿瘤调节性T细胞（Treg)的研究调节性T细胞的主要功能是抑制机体免疫功能，太强则免疫耐受，太弱会引起自身免疫反应调控性T细胞调节抗原递呈细胞对抗原的递呈调控性T细胞的表型是CD4+CD25bright，逐渐发现越来越多的其它分子可能能够更精确限定.FoxP3+CD127loCD25hi-intCD127和FoxP3联合应用于Treg细胞的功能性研究（体内体外）抗原特异性T细胞的表达

－TETRAMER(iTAG™MHC四聚体)

抗原递呈细胞（APC）携带抗原片段通过与TCR复合物结合，在APC和T细胞的MHC相容和其它共刺激分子的相互作用下激活T细胞并产生细胞免疫效应。MHC-四聚体染色技术用于抗原特异性T细胞分析的原理在于体外模仿上述抗原递呈的过程来实现对特异性T细胞的鉴定，通过流式细胞仪这种高通量分析仪器对标本中这群细胞进行分析。

抗原特异性T细胞的检测

iTAG™MHC四聚体单体MHCI类复合物Ag-SpecificCD8+TcellTCRAg-SpecificCD8+Tcellb2microglobulinpeptideMHCBiotintail通过亲合素-PE进行四聚体化识别并连接到CD8T细胞效应亚群上多肽特异性TCR上流式分析SSFSSSCD8-PC5Tetramer-PECD8-PC5抗原特异性T细胞的表达－Tetramer

抗原特异性T细胞分析

在疫苗研制和药物筛选中的作用

Tetramer成为评价病毒特异性T细胞数量和功能的重要手段对免疫优势区域和免疫优势表位的快速扫描功能，已被广泛地用于疫苗地设计和质量控制检测不同病程中特异性T细胞的反应及各种抗病毒治疗后的免疫水平评估1996年在Science上发表的第一篇用TETRAMER对抗原特异性T细胞进行分析的文章BeckmanCoulter已经有的产品传染性疾病相关：HIVgag–SLYNTVATL[HLA-A*0201]HIVpol–ILKEPVHGV[HLA-A*0201]CMVPP65–NLVPMVATV[HLA-A*0201]EBV–GLCTLVAML[HLA-A*0201]EBV–GLCTLVAML[HLA-A*0201]InfluenzaM1–GILGFVFTL[HLA-A*0201]HBVcore–FLPSDFFPSV[HLA-A*0201]肿瘤性疾病相关：Mart1–ELAGIGILTV[HLA-A*0201]Gp100–IMDQVPFSV[HLA-A*0201]Gp100–ITDQVPFSV[HLA-A*0201]Her-2/neu–KIFGSLAFL[HLA-A*0201]Her-2/neu–RLLQETELV[HLA-A*0201]PR-1–VLQELNVTV[HLA-A*0201]Tyrosinase–YMDGTMSQV[HLA-A*0201]PhosFlow

---Phospho-proteinsbyFlowCytometry（流式细胞仪进行磷酸化蛋白的检测）磷酸化检测人体每一个小小细胞中，都有成千的酶分子在交互作用，它们是生物调控身体反应的工具，例如维持身体新陈代谢、支配生长与细胞分裂、调节激素的分泌等。然而，在所有严格调控的酶分子的反应中，最最重要的莫过于可逆转的蛋白质磷酸化反应（reversibleproteinphosphorylation），也就是蛋白质的磷酸化与去磷酸化反应。因此，率先找出並纯化出这类蛋白激酶的费希尔（EdmondH.Fischer,1920-）与克利伯斯（EdwinG.Krebs,1918-），便因此而荣获1992年诺贝尔生理医学奖。磷酸化蛋白的检测Immunohistochemistry（免疫组化）WesternblotFlowcytometryCells:IntracellularstainingofphosphorylatedproteinsIncombinationwithsurfacemarkersCelllysates:CytometricBeadArray(BBA)PhosFlow

和Westernblot的比较AtheoreticalexperimentcomparingWesternblotandflowcytometrywiththreesamplesandaproteinofinterestat1,10,or50copiespercell.Sample2and3lookthesameviaWesternblot,butwhenstainedwithfluorescentlylabeledantibodies,thedifferencesbetweenthesamplesbecomemorerelevant.(Source:P.O.Krutziketal./ClinicalImmunology110(2004)206–221)在AML病人中

p-Stat3andp-Stat5的表达水平NotenoughinformationtodifferentiateAMLclinicalresponses.JonathanIrish©2004|NolanLab,StanfordJonathanIrish©2004|NolanLab,StanfordClusteringofBiosignature,ClinicalSignificance总结免疫系统不同细胞群间的相互作用包括调节性和效应性细胞亚群自然免疫和获得性免疫对抗外来病原体流式细胞仪为细胞间相互作用和功能的进一步研究提供了强大的工具用于研究疾病的机制监测疾病的进展和治疗的疗效干细胞移植应用血液系统病症:L&L,再生障碍性贫血恶性肿瘤:乳腺癌、儿童神经母细胞瘤、卵巢癌遗传性异常病变免疫缺陷:血红蛋白病FCM在干细胞移植中的应用CD34+细胞计数T淋巴细胞亚群分析和活化功能检测移植后造血重建的监测移植后免疫重建的监测造血干细胞移植后免疫重建（6个月NK；9个月T、B）移植后微小残存病灶检测移植后巨细胞病毒感染的诊断造血干细胞计数•

造血干细胞是一群有一定增生能力，可以多向分化的造血细胞。•造血干细胞的特征是：•大小（FSC）和颗粒度（SSC）介于成熟淋巴细胞和单核细胞之间，和大淋巴细胞相似•细胞内含有较多核酸物质•CD34表达弱阳性或强阳性•CD45表达弱阳性•在干细胞移植时需要做造血干细胞绝对计数CD34+细胞计数的标准化方案：米兰方案CD34+细胞计数的标准化方案：

ISHAGE方案干细胞研究－间充质干细胞非造血系统细胞的主要来源共同的祖先在不同的培养诱导条件下能分化为不同的系列细胞或组织无特异性标记，天然数量稀少最好用流式细胞仪的多参数分析方法来分析表达的抗原包括间质细胞,内皮细胞,表皮细胞的标志:1)粘附分子类:CD102,CD56,CD54,CD166等,无CD62P;2)生长因子和细胞因子受体类:CD121-126等,无CD25;3)整合素分子类:CD49,CD29等,无CD11;4)其它分子类:CD105,CD90,CD73等,无CD34,CD45,CD80,CD86.流式细胞仪的应用（肿瘤）细胞周期和倍体分析肿瘤相关基因表达的研究抗肿瘤药物作用机制的研究放疗/化疗疗效的研究多药耐药基因的研究细胞凋亡的分析凋亡细胞的分析凋亡相关蛋白的分析DNA细胞周期分析细胞周期G0G1sG2MDNA分析DNA含量细胞数量

2N4NDNA分析的临床意义DNA分析诊断肿瘤1.出现非整倍体细胞峰，DI>1.1或DI<0.92.无明显的异倍体，但S期>15%3.无明显的异倍体，但G0/1的CV>10%，S期在10%-15%4.S+G2/G1/0>20%DNA倍体分析： 结合临床病理的形态学诊断，对一些恶性肿瘤进行早期诊断，跟踪随访和早期治疗，提高治愈率和生存率。尤其对一些细胞抽吸物、体液、组织液、灌洗液脱落细胞的分析，意义尤为重要。研究各期细胞比率与肿瘤组织分级的关系。提示肿瘤患者预后。增殖状态分析：

反映了肿瘤的生长速度和侵袭性，判断临床治疗方法的疗效或用于探讨新药新方法的作用机理和疗效。正常DNA倍体分析PIFluorescence2N4NAneuploidpeakDNA异倍体DNAindex4.53AneuploidpeakPIFluorescence肿瘤基因表达产物的检测恶性肿瘤是一种多基因异常疾病。由于原癌基因的激活或抑癌基因的突变、失活或缺失，导致某些细胞分化不良和增殖失控而形成肿瘤。FCM利用特异性的抗癌基因/抑癌基因表达产物（特异性蛋白质）的单克隆抗体对癌基因的表达蛋白进行检测，监测癌基因与抗癌基因表达在肿瘤发生发展中的作用，从分子水平推动了恶性肿瘤的发生机制及调控因素的研究进程。肿瘤基因表达产物的检测癌基因与抑癌基因： myc基因族（C-myc,N-myc,L-myc）：癌基因，高表达促使转化细胞恶性繁殖进入肿瘤临床期 ras基因族（N-ras,K-ras,H-ras）：癌基因，编码蛋白为P21，在乳腺癌、胃癌中表现为P21蛋白过度表达 P53：抑癌基因，可抑制ras基因和myc基因协同作用引起的细胞转化，许多恶性肿瘤都有P53基因的缺失或点突变 c-erbB2基因：又称neu基因，在癌细胞表面常有表达，表达产物为HER-2/neu，其过量表达与肿瘤的发生、复发转移及预后不良有关细胞凋亡凋亡与坏死凋亡启动细胞内Ca2+动员★Caspase激活脱水致细胞皱缩核染色质凝缩★线粒体膜电位丧失★细胞膜PS外翻★核碎片形成★DNA被切割成低分子量片段细胞内酸化凋亡小体形成凋亡启动

凋亡早期

凋亡中期

凋亡晚期

与