微生物标本处理及药敏试验自动保存的

微生物标本处理及药敏试验自动保存的第1页/共47页微生物标本处理及药敏试验第2页/共47页细菌室各种标本处理1、细菌室标本接收后应及时处理：为什么？第3页/共47页细菌室各种标本处理所有细菌室标本均要求2小时内送到细菌室进行处理。痰标本：不及时处理可导致痰液中的肺炎链球菌、流感嗜血杆菌等苛养菌由于不适应外界环境和自溶现象而死亡。另外，痰液标本在室外放置过久，会导致口腔的杂菌生长和病人体内定植菌生长过快，而影响结果的准确性。第4页/共47页细菌室各种标本处理血培养：采血后2小时内不及时放进血培养仪培养会导致假阴性。另外，采血后禁止将血培养瓶置4℃保存。

第5页/共47页细菌室各种标本处理无菌液体（包括脑脊液、胸腹水、心包积液、脓液和关节液等）：由于脑膜炎奈瑟氏菌、肺炎链球菌和嗜血杆菌对外界环境抵抗力很低，对寒冷和干燥均敏感，如不及时接种，病原菌可能死亡，导致培养阴性。第6页/共47页细菌室各种标本处理尿液标本：由于尿液标本采集容易受到外生殖道正常菌群污染，而且尿液是细菌的最好培养基，因此，采集标本后应在2小时内处理完毕，否则置4℃冰箱保存，时间不能超过8小时。第7页/共47页细菌室各种标本处理生殖道分泌物：由于淋球菌离体后，很快会自溶死亡；另外，生殖道标本采集容易污染外生殖道的正常菌群，如果不及时接种，会由于这些正常菌群大量繁殖，导致结果假阳性。第8页/共47页细菌室各种标本处理大便标本：由于志贺菌属对理化因素抵抗力较弱，对酸性环境也较敏感，在粪便中由于其他菌属产酸可使本菌属的细菌在数小时内死亡。另外，霍乱弧菌对热，干燥，日光和酸均很敏感，同样离体后不及时处理，则容易死亡。第9页/共47页细菌室各种标本处理常见标本接种及培养标本平板环境痰液、咽拭子、肺泡灌洗液血平板、巧克力平板35℃、有氧环境、CO2环境血、骨髓需氧培养瓶，厌氧培养瓶35℃、有氧环境、血培养仪尿血平板35℃、有氧环境大便SS平板、中国蓝平板、血平板35℃、有氧环境脑脊液、胸水、腹水、引流液等血平板35℃、有氧环境、巧克力平板35℃、CO2环境、第10页/共47页痰培养结果判读第11页/共47页痰培养结果判读第12页/共47页痰培养结果判读第13页/共47页痰培养结果判读第14页/共47页细菌结果发出时间细菌结果发出时间。一般标本的培养+药敏时间：3～4天。血液标本：7天(有菌生长即电话报告)。真菌培养+药敏：3天。第15页/共47页纸片扩散法（K-B）药敏试验第16页/共47页纸片扩散法（K-B）药敏试验第17页/共47页纸片扩散法（K-B）药敏试验第18页/共47页纸片扩散法（K-B）药敏试验第19页/共47页纸片扩散法（K-B）药敏试验第20页/共47页怎样才能做到正确选用抗菌药物进行药敏试验抗菌药物分类（一）β—内酰胺类A、青霉素类抗生素1、青霉素G：主要使用在链球菌、脑膜炎双球菌、螺旋体、梭状芽孢杆菌等的感染。对葡萄球菌及许多革兰阴性菌如大肠杆菌等大多耐药（产生各种β-内酰胺酶灭活青霉素G)。2、半合成耐酶青霉素（甲氧西林、苯唑西林等）：主要使用于产青霉素酶的葡萄球菌感染。3、半合成广谱青霉素：因对各种β-内酰胺酶的稳定性差，临床使用逐渐减少。氨苄西林：对肠球菌、李斯特菌属优于青霉素阿莫西林：作用较氨苄强，常用HP治疗。哌拉西林：主要用于绿脓杆菌及肠杆菌科。主要作用革兰氏阴性杆菌的青霉素：美洛西林、替卡西林等。第21页/共47页B、头孢菌素类抗生素一代头孢菌素对G+菌（除肠球菌、MRSA外）有良好作用，G-菌作用差对β-内酰胺酶稳定性差常用品种：头孢氨苄，头孢唑啉，头孢拉定头孢唑啉用于外科手术切口感染预防第22页/共47页二代头孢菌素兼顾G+及G-菌（铜绿假单胞菌、阴沟肠杆菌、沙雷菌、枸橼酸杆菌、MRSA、肠球菌等无效）β-内酰胺酶稳定性增加常用品种头孢呋辛、头孢克罗、头孢丙烯、头孢孟多（有肾毒、出血）第23页/共47页三代头孢菌素G-菌作用强，尤其是肠杆菌科细菌、奈瑟菌属、流感杆菌均有强大抗菌活性，但对G+作用大多较差，对肠球菌耐药。大多数β-内酰胺酶高度稳定常用品种：头孢噻肟、头孢曲松、头孢他啶、头孢甲肟、头孢唑肟、头孢地嗪、头孢哌第24页/共47页四代头孢菌素比三代头孢菌素抗菌谱更广，活性更强。β-内酰胺酶稳定更强。对G+球菌作用增强，对阴沟、枸橼酸杆菌强常用品种：头孢匹罗、头孢吡肟第25页/共47页头孢菌素类抗生素作用特点特征第一代第二代第三代第四代对G+菌活性+++++++++/++对G-菌活性+++++++++/++++对绿脓杆菌活性---/++++++酶稳定性差中强更强肾毒性有小无无第26页/共47页非典型β内酰胺类1、头霉素类：①抗需氧菌作用与头孢菌素类似；②对厌氧菌作用强；③适用于需氧、厌氧的混合感染，如盆腔、腹腔、妇科感染。常用有：头孢西丁、头孢美唑、头孢替坦、头孢米诺。2、碳青霉烯类：①抗菌谱最广，抗菌作用最强；②对嗜麦芽窄食单胞菌及洋葱假单胞菌（伯克霍尔德）、黄杆菌等作用差。常用品种：亚胺培能、美洛培能、帕尼培能（克蓓宁）。3、单环类：对G-菌包括绿脓有强效，对G+菌、厌氧菌无效。主要品种：氨曲南。4、氧头孢烯类：拉氧头孢、氟氧头孢5、β内酰胺酶抑制剂：克拉维酸、舒巴坦、他唑巴坦，如阿莫西林/克拉维酸、头孢哌酮/舒巴坦和哌拉西林/他唑巴坦。第27页/共47页（二）氨基糖甙类：常用有庆大霉素、丁胺卡那、妥布霉素和奈替米星等。属杀菌药，对G-菌有强效对部分G+菌（葡萄球菌）有效，对链球菌、肠球菌无效。对厌氧菌无效水溶性好，性质稳定。某些品种对结核及分枝杆菌有效。第28页/共47页（三）喹诺酮类是近年来发展最快的化学合成抗菌药物，作用于细菌的DNA旋转酶。对G+，G-菌均有较强的作用，对厌氧菌也有一定的作用。第29页/共47页喹诺酮类第一代：萘丁酸、吡哌酸.因副作用大已基本淘汰。第二代：诺氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星左旋氧氟沙星。用于肠道感染。第三代：司巴沙星、托氟沙星、加替沙星、格帕沙星。

对肺炎球菌等革兰阳性菌活性增大。第四代：曲伐沙星、莫西沙星、克林沙星

对革兰阳性菌和厌氧菌具强的活性大第30页/共47页喹诺酮类的适应证1.最适合用于肠道感染：如伤寒、痢疾、霍乱。2.对布氏杆菌、军团菌、结核杆菌也有效。3.对绿脓杆菌感染有效。一、二代喹诺酮对革兰阳性球菌无效，对厌氧菌、奴卡菌无效，对MRSA不如万古霉素。三、四代喹诺酮对革兰阳性球菌和厌氧菌有效第31页/共47页（四）大环内酯类为快速抑菌药，对G-、G+菌抗菌活性不强。主要使用在β—内酰胺抗生素无效的非典型病原体：支原体、衣原体、军团菌、弯曲菌、某些厌氧菌、奴卡菌、分枝杆菌和弓形体等。第32页/共47页其他抗菌药物磷霉素：是化学合成的广谱抗生素、作用于细胞壁合成的早期，很少引起过敏。与β-内酰胺类、氨基糖苷类有协同增效作用。万古霉素（去甲万古霉素）对G+菌有强效，对G-菌无效。替考拉宁：新的糖肽类抗生素，半衰期长（27-37h），一天一次给药，仅用于G+菌感染。第33页/共47页林可霉素类：林可霉素、克林霉素等：骨关节组织中浓度较高为其特点。但透过血-脑脊液屏障的能力差，脑组织浓度低。小于4岁儿童慎用，主要作用于G+菌。多粘菌素类：多粘菌素B，主要作用于G-菌。第34页/共47页四环素类1、由于目前常见致病菌对四环素类耐药现象严重，仅在病原菌对本品敏感时，方有应用指征。2、主要适用于支原体肺炎、衣原体感染、立克次体病、布氏杆菌病、霍乱、回归热。3、因影响影响牙齿和骨发育，8岁以下小儿、孕妇、乳妇禁用第35页/共47页不同抗菌药物的抗菌谱抗菌药物 G(+)球菌 G(-)杆菌 非典型菌大环内酯类 + - +β-内酰胺类 + + -氟喹诺酮类(新)+ + +第36页/共47页细菌耐药性MRSA和MRCNS的定义MRSA：耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌。MRCNS：耐甲氧西林的凝固酶阴性葡萄球菌。第37页/共47页MRSA和MRCNS的检测第38页/共47页金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）Antimicrobic抗生素MIC(mg/l)敏感度BetalactamaseAmpicillinClindamycinErythromycinGentamicinNitrofurantoinOxacillinMICPenicillin-GRifampinTetracyclineTrimethoprim/SulfaVancomycinLevofloxacinLinezolidMoxilfloxacinCefoxitinTeicoplanimβ-内酰胺酶氨苄青霉素/舒巴坦克林霉素红霉素庆大霉素呋喃妥因苯唑青霉素MIC青霉素G利福平四环素复方新诺明万古霉素左旋氧氟沙星力奈唑烷莫昔沙星头孢西丁替考拉宁POS>=32>=8>=8>=16<=32>=8>=162>=16>=3202>=8<=2>=8＋耐药耐药耐药耐药敏感耐药耐药中介耐药耐药敏感耐药敏感耐药耐药敏感评价：头孢西丁耐药的葡萄球菌，可对β-内酰胺类，头孢菌素类，碳青酶烯类，β-内酰胺类酶抑制剂复合物耐药。第39页/共47页广东医学院附属医院2007~2011年MRSA和MRSCN的检出率%第40页/共47页大肠埃希菌、克雷伯菌属产超广谱β内酰胺酶（ESBL）。

第41页/共47页ESBL的检测第42页/共47页肺炎克雷伯氏菌（Klebsiellapneumoniae）Antimicrobic抗生素MIC(mg/l)敏感度CefotaximeMeropenemCefoperazone/SulbactamAmikacinAmpicillinCefazolinCefepimeCeftazidimeESBLGentamicinImipenemPiperacillin/tazobactamLevofloxacinCefoxitinCefuroxime-AxetilCefuroxime-Sodium头孢噻肟美罗培南（美平）头孢哌酮/舒巴坦丁胺卡那（阿米卡星）氨苄青霉素头孢唑啉（先锋V号）头孢吡肟复达欣（头孢他啶）超广谱β-内酰胺酶庆大霉素亚胺培南（泰能）呱拉西林/他唑巴坦左旋氧氟沙星头孢西丁头孢呋新－酯头孢呋新－钠>=64<=2>=64>=64>=32>=32>=32>=32Pos>=16<=4>=128>=88>=32>=32耐药敏感耐药耐药耐药耐药耐药耐药+耐药敏感耐药耐药敏感耐药耐药评价：该细菌超广谱β-内酰胺酶实验阳性，对青霉素类，头孢菌素类及氨曲南不论药敏结果如何都视为耐药。第43页/共47页广东医学院附属医院2007~2011年大肠埃希氏菌和肺炎克雷伯氏菌ESBL检出率%第44页/共47页葡萄球菌

肺炎

链

球

菌β-溶血

链

球

菌草绿色

链

球

菌肠

球

菌青霉素（PG)红霉素(E)头孢西丁（FOX）克林霉素(CM)万古霉素（VA）利福平（RA）环丙沙星（CIP）庆大霉素（GM）力奈唑烷（LZ）青霉素（PG)红霉素(E)头孢曲松(CRO)克林霉素(CM)左旋氧氟沙星（LEV）万古霉素（VA）亚胺培南（IMP）力奈唑烷（LZ）青霉素（PG）红霉素(E)克林霉素(CM)头孢曲松(CRO)左旋氧氟沙星（LEV）万古霉素（VA）力奈唑烷（LZ）氨苄西林（AMP）青霉素（PG）红霉素(E