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本文格式为Word版,下载可任意编辑——HE染色考前须知HE染色本卷须知:
1.染色时PH值的调理是很重要的,有时组织块在多聚甲醛中固定时间过长往往使组织酸化而影响细胞核的着色,因此切片入水后,转入饱和碳酸锂水溶液中处理10-30分钟,这样可使细胞核着色较好。
2.用伊红染色切片时,往往在经脱水的低浓度酒精时极易脱色,特别是对于细胞密集的组织更明显,这时可在脱水至95%酒精1后,再以95%配制的1%伊红液中复染3-5分钟,然后脱水透明,可以获得满意的效果。
3.苏木精染色后,分色是至关重要的,应当在显微镜下进行。一般以细胞核染色比较明了,细胞质等基本无色为宜。如发现过染,可以延长分色时间,若染色太浅,则应重新进行染色后再分色,总之必需分色至细胞核明了而背景基本无色才能往下进行。
4.切片经酒精脱水后,如在转入二甲苯时有混浊现象产生或呈白色不透明状态,此为脱水不完全,应马上将切片退回无水酒精重新脱水,如再不透明时则应更换无水酒精。
HE染色是一种十分常见的染色方法,但对于不同的组织,其脱水,染色,透明等步骤的具体时间有所不同,好多环节还有待操进一步摸索
上面的链接中,苏木素的配方属于Harris苏木素,特点是即配即用。
假使你要长期使用,建议采用Mayer苏木素,Delafield苏木素或Ehrlich苏木素的配方(上网检索吧,资料好多)。这些苏木素都可以存放2年以上;特别是后两者(我们试验室翻出来一些1978年配制的这种苏木素,过滤后染色效果与新液没有什么区别。)
值得注意的是:
1.苏木素中的矾类,太少会使核染偏红,太多又会造成染色弥散,需要严格依照前人的配方摸索。
2.刚配好的苏木素或者存放数年以上的,都应当过滤,否则分色效果不好。
3.建议在分色-水洗后,入碳酸锂的水溶液(很稀到饱和都可以),恢复苏木素的蓝色。一般需要5-10分钟。劝你不要用氨水(有的书上这么讲的),由于氨水在有的状况下会造成脱片。4.假使伊红染色效果不好(颜色太淡),那么可以依照每100ml然液加一滴冰醋酸的方法加强胞浆着色。但负面作用是,假使染料质量不佳,有可能在切片存放1-2年后退色。所以你可以根据需要灵活选择。
HE染色配方及步骤:
1、1g苏木精倒入小烧杯—10ml乙醇大烧杯加20g硫酸铝钾200ml水加热溶解
将上述二者混合,烧开后,马上将其放入冷水中,同时倒入0.5g黄色氧化汞冷却后过滤即可5分钟
2、分色液:70%酒精90ml+冰醋酸10ml(数分钟,至颜色适当即可)3、95%酒精99ml+伊红1g(片刻)4、95%酒精2缸每次30秒内5、100%酒精2-3缸每次30秒内
6、100%二甲苯3缸第一缸10分钟,其次、三缸各五分钟7、封片
冰冻切片和石蜡包埋做切片有哪些不同点(操作,用途,优缺点)?这个问题有点繁杂,试着回复:
包埋介质不同,使用的仪器和步骤不一样,当然操作也不同,但用途基本上大同小异,区别在于石蜡切片薄,组织结构明白,可以保存组织包埋块,但有些抗体能
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