凝结芽孢杆菌的检测

背景技术：目前，疑结芽抱杆菌作为有益菌被广泛地加以利用，如被加入到食品或动物饲料中，因此，疑结芽抱杆菌的量化计数的重要性和必要性日益凸显。然而，目前既没有国标方法，也没有一个可行的检测方法。因此，有效可行的检测凝结芽抱杆菌的方法急需研究开发。技术实现要素：本申请是基于发明人对以下事实和问题的发现和认识作出的：凝结芽抱杆菌的量化计数的重要性和必要性日益凸显，然而，目前既没有凝结芽抱杆菌检测的国标方法，也没有准确度高的可行的其他检测凝结芽抱杆菌的方法，基于上述问题，发明人经过无数的实验探索，研究开发出了一种操作简单，准确度高的凝结芽抱杆菌检测方法以及培养基，实现了从无到有的突破，该方法可操作性强，计数结果准确可信。本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。在本发明的第一方面，本发明提出了一种培养基。根据本发明的实施例，所述培养基包括：胰蛋白胨5.0~10.0重量份，酵母浸粉/膏2.0-3.0重量份，葡萄糖1.0-5.0重量份，聚山梨醇-801.0~2.0重量份丄-半光氨酸0.1~0.5重量份，臭甲酚紫0.04~0.06重量份，琼脂15.0-20.0重量份。发明人发现，胰蛋白胨、酵母浸粉/膏、葡萄糖可以提供凝结芽抱杆菌生长所需的碳源、氮源、微生物和矿物质；L-半光氨酸是芽抱杆菌保护剂，同时也是营养增补剂，可以促进凝结芽抱杆菌的生长；聚山梨醇酯80提供凝结芽抱杆菌生长所需的辅酶，并中和微生物生长所产生的'细胞毒性物质，同时是培养基固水剂（即防止高温下培养基水分过快丢失）和蛋白质保护剂，为凝结芽抱杆菌的生长提供一个良好的生长环境；溴甲酚紫是培养基酸碱指示剂，有凝结芽抱杆菌生长的菌落周围的培养基变黄，易于计数；琼脂是培养基凝固剂。培养基中加入L-半光氨酸、聚山梨醇酯80、溴甲酚紫，凝结芽抱杆菌生长良好，菌落大易计数，且结果准确；培养基中不加入L-半光氨酸、聚山梨醇酯80、溴甲酚紫，凝结芽抱杆菌生长不好，菌落较小，无法准确计数；若培养基中的L-半光氨酸、聚山梨醇酯80、溴甲酚紫的加入量过多或过少，会影响芽抱杆菌的生长状况或计数的准确度。根据本发明实施例的培养基，菌落生长良好，成本低，配制简单方便，并且利用根据本发明实施例的培养基对凝结芽抱杆菌进行检测时计数结果准确可信。在本发明的第二方面，本发明提出了一种试剂盒。根据本发明的实施例，所述试剂盒包括上述培养基。根据本发明实施例的试剂盒用于检测凝结芽抱杆菌时，简单方便，计数结果准确可信。在本发明的第三方面，本发明提出了上述培养基或试剂盒在检测凝结芽抱杆菌中的用途。发明人发现，所述培养基或试剂盒用于检测凝结芽抱杆菌时，简单方便，计数结果准确可信。在本发明的第四方面，本发明提出了一种检测凝结芽抱杆菌的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：利用上述培养基对待测样品进行扩增培养；以及将经过扩增培养的待测样品进行计数。根据本发明实施例的检测方法，可操作性强，计数结果准确可信。根据本发明的实施例，上述方法还可进一步包括如下附加技术特征至少之一：根据本发明的实施例，所述待测样品预先依次进行稀释处理和加热处理，所述稀释处理的稀释倍数为10倍，所述加热处理是在温度为78~82弋的水浴条件下进行29~31min。温度过高或时间过长，尤其温度超过82弋时凝结芽抱杆菌被损伤或杀灭，菌落数均为0,计数结果有显著性差异；温度过低（小于78。0或时间过短（小于29min）,无法使多为革兰氏阴性杆菌或阳性球菌等非目标菌灭活，从而使所述检测方法的计数结果的准确度降低。发明人发现，在该条件下进行加热处理，可以激活凝结芽抱杆菌，灭活非目标菌，从而便于凝结芽抱杆菌的分离和计数，使所述检测方法的计数结果更加准确可信。根据本发明的实施例，所述扩增培养是在温度为45~55弋的条件下进行22~26h。温度过高（大于55。0，则凝结芽抱杆菌停止生长，菌落数为0；温度过低，凝结芽抱杆菌生长缓慢、菌落太小、不易观察计数。培养时间过长，菌落计数结果偏低，原因有两方面，其一为培养时间过长，则凝结芽抱杆菌过度生长，本为单个独立菌落而相互连接、根据通用的计数原则两菌落无明显界限成链状可计为一个菌落，导致计数结果偏低，其二为培养时间过长，则培养基过度失水，出现干裂等情况，影响凝结芽抱杆菌的生长繁殖，导致计数结果偏低；培养时间过短，菌落太小、不易观察计数，从而使所述检测方法的计数结果的准确度降低。发明人发现，在该条件下进行扩增培养，菌落大，从而便于凝结芽抱杆菌的分离和计数，使所述检测方法的计数结果更加准确可信。根据本发明的实施例，所述加热处理后，扩增培养前，进一步包括：梯度稀释处理，所述梯度稀释处理的稀释倍数为10倍。根据本发明的实施例，所述稀释处理或梯度稀释处理是通过加入磷酸盐缓冲液或生理盐水进行的。根据本发明的实施例，所述扩增培养是通过如下方式进行的:从梯度稀释液中每次吸取1mL置于培养皿中，平行吸取m次，其中，m为不小于2的整数；向培养皿中加入所述培养基，以便进行扩增培养。根据本发明的实施例，所述计数是通过如下方式进行的:若只有一个稀释度的平板菌落数在10CFU~150CFU范围内，计算所述稀释液的m个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以所述稀释液的稀释倍数，计算获得每g或每mL所述待测样品中凝结芽抱杆菌的数目；若两个连续稀释度的平板菌落数在10CFU~150CFU范围内时，按公式⑴计算获得每g或每mL所述待测样品中凝结芽抱杆菌的数目，N二工C/(n1+n2)d公式⑴其中N表示待测样品中凝结芽抱杆菌的数目迓C表示平板菌落数在10CFU-150CFU范围内的平板菌落数之和「1表示第一稀释度的平板个数门1为不大于m的整数；n2表示第二稀释度的平板个数，n2为不大于m的整数；d表示第一稀释度；若所有稀释度的平板菌落数均大于150CFU，计算稀释度最高的稀释液的m个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以最高稀释倍数，计算获得每g或每mL所述待测样品中凝结芽抱杆菌的数目；若所有稀释度的平板菌落数均小于10CFU，计算稀释度最低的稀释液的m个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以最低稀释倍数，计算获得每g或每mL所述待检样品中凝结芽抱杆菌的数目；若所有稀释度的平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算；若所有稀释度的平板菌落数均不在10CFU~150CFU范围内，其中一部分稀释度的平板菌落数小于10CFU或大于150CFU时，计算平板菌落数最接近10CFU或150CFU的稀释液的m个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以所述稀释液的稀释倍数，计算获得每g或每mL所述待测样品中凝结芽抱杆菌的数目。需要说明的是，所述"以小于1乘以最低稀释倍数计算”是指最低稀释倍数为0即原液，结果报告＜1；最低稀释倍数为10倍稀释、结果报告＜1x10;以此类推。根据本发明实施例的计数方法，不局限于只有一个梯度在计数范围时的计数，而是考虑了所有可能出现的情况，并作了详细的描述和说明，所述检测方法全面、具体，检测结果准确可信。在本发明的第五方面，本发明提出了一种检测凝结芽抱杆菌的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：利用上述培养基对待测样品进行扩增培养；以及将经过扩增培养的待测样品进行计数；所述待测样品预先依次进行稀释处理和加热处理，所述稀释处理的稀释倍数为10倍，所述加热处理是在温度为78~82弋的水浴条件下进行29~31min,所述扩增培养是在温度为45~55弋的条件下进行22~26h,所述加热处理后，扩增培养前，进一步包括：梯度稀释处理，所述梯度稀释处理的稀释倍数为10倍，所述扩增培养是通过如下方式进行的：从梯度稀释液中每次吸取1mL置于培养皿中，平行吸取m次，其中，m为不小于2的向培养皿中加入所述培养基，以便进行扩增培养，所述稀释处理或梯度稀释处理是通过加入磷酸盐缓冲液或生理盐水稀释液进行的，所述计数是通过如下方式进行的：若只有一个稀释度的平板菌落数在10CFU~150CFU范围内，计算所述稀释液的m个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以所述稀释液的稀释倍数，计算获得每g或每mL所述待测样品中凝结芽抱杆菌的数目；若两个连续稀释度的平板菌落数在10CFU~150CFU范围内时，安公式(1)计算获得每g或每mL所述待测样品中凝结芽抱杆菌的数目，N二工C/(n1+n2)d公式⑴其中N表示待测样品中凝结芽抱杆菌的数目表示平板菌落数在10CFU~150CFU范围内的平板菌落数之和「1表示第一稀释度的平板个数,n1为不大于m的整数；n2表示第二稀释度的平板个数，n2为不大于m的整数；d表示第一稀释度；若所有稀释度的平板菌落数均大于150CFU，计算稀释度最高的稀释液的m个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以最高稀释倍数，计算获得每g或每mL所述待测样品中凝结芽抱杆菌的数目；若所有稀释度的平板菌落数均小于10CFU,计算稀释度最低的稀释液的m个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以最低稀释倍数，计算获得每g或每mL所述待检样品中凝结芽抱杆菌的数目；若所有稀释度的平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算；若所有稀释度的平板菌落数均不在10CFU~150CFU范围内，其中一部分稀释度的平板菌落数小于10CFU或大于150CFU时，计算平板菌落数最接近10CFU或150CFU的稀释液的m个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以所述稀释液的稀释倍数，计算获得每g或每mL所述待测样品中凝结芽抱杆菌的数目。根据本发明实施例的方法，不局限于只有一个梯度在计数范围时的计数，而是考虑了所有可能出现的情况，并作了详细的描述和说明，所述检测方法更加全面、具体，可操作性强，检测结果更加准确可信。附图说明图1是根据本发明实施例的不同温度和时间前处理进行凝结芽抱杆菌检测结果的对比柱形示意图；图2是根据本发明实施例的不同温度和时间前处理进行凝结芽抱杆菌检测结果的对比折线示意图；图3是根据本发明实施例的不同温度和时间培养凝结芽抱杆菌检测结果的对比柱形示意图；图4是根据本发明实施例的不同温度和时间培养凝结芽抱杆菌检测结果的对比折线示意图；图5是根据本发明实施例的凝结芽抱杆菌计数琼脂培养基中成分含量对应检测结果的对比示意图；以及图6是根据本发明实施例的两种方法的检测结果对比示意图。具体实施方式下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。下面描述凝结芽抱杆菌的一般检测方法：凝结芽抱杆菌计数培养基组成成分和配制1咸分：2制法：将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH。分装后121C高压灭菌15~20min。检测方法：1•基本方案：培养基的制备，样品的制备与稀释、接种、培养、菌落计数、结果报告。2.优选方案：设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他常规设备和材料如下:2.1超净工作台或生物安全柜；2.2高压灭菌器；2.3均质器；2.4电子天平（感量为0.1g）;2.5恒温培养箱：30°C±1°C;2.6冰箱：2°C~5C;2.7刻度吸管：1mL（具O.OImL刻度）、10mL（具O.ImL）刻度或微量移液器及吸头；三角瓶：500mmL、1000mL；试管：18x180；水浴锅：80°C士I°C;2.11无菌均质袋。3培养基试剂3.1凝结芽抱杆菌计数培养基培养基的配制方法：成分：酵母提取物2.5g，蛋白胨5.0g，葡萄糖1.0g，聚山梨醇酯801.0g,L-半光氨酸0.1g，溴甲酚紫0.06g，琼脂15.0g,PH=7.0。分装：将上述成分加入到1000mL蒸馏水中，加热溶解，分装后121C高压灭菌15~20min。3.2磷酸盐缓冲液；3.3无菌生理盐水；4操作步骤4.1样品的制备与稀释操作过程：固体和半固体样品：称取25g样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min~2min，制成1:10的样品匀液。液体样品以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。用无菌吸管吸取液体检样、固体或半固体检样的初级稀释液5mL-10mL于无菌试管中，立即将上述试管放人80弋士2弋的水浴中，(试管内液面至少低于水面4cm)加热处理30min±1min。在对照管中放一支温度计测定温度。试管内样液的升温时间不应超过5min，将加热处理后的试管取出立即放到20弋以下的流水中冷却。其中，凝结芽抱杆菌的转化处理：80弋士2弋的水浴中，试管内液面至少低于水面4cm)加热处理30min±1min,激活凝结芽抱杆菌、灭活非目标菌，便于凝结芽抱杆菌的分离和计数，且计数平板上的所有菌落数，计数结果准确可信。用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面)，振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液，另取1mL无菌吸管或微量移液器吸头，按上述操作顺序，做10倍递增样品匀液，每递增稀释一次，即换用1次1mL灭菌吸管或吸头。4.2样品的接种根据待检样品凝结芽抱杆菌的估计，选择2个~3个连续的适宜稀释度，每个稀释度吸取1mL样品匀液分别置于2个培养皿中，倾注培养基。4.3培养待琼脂凝固后，到置于45弋-55弋培养箱厌氧培养24h±2h，计数平板上的所有菌落数。若倒置于36弋±2弋培养箱培养48h±2h，则菌落较小不易计数，但根据本发明实施例的45。055弋培养箱厌氧培养24h±2h，菌落大易计数，计数结果准确可信。4.4菌落计数选取菌落数在10CFU~150CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。其中一个平板有较大片状菌落生长时则不宜采用而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。5结果与报告5.1结果凝结芽抱杆菌菌落总数的计算方法：⑴若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g(mL)样品中凝结芽抱杆菌数结果。⑵若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按公式(1)计算：N二工C/(n1+n2)d (1)式中：N 样品中凝结芽抱杆菌数；IC——平板(含适宜范围菌落数的平板)菌落数之和；n1——第一稀释度(低稀释倍数)平板个数；n2——第二稀释度(高稀释倍数)平板个数；d——稀释因子(第一稀释度)。(3)若所有稀释度的平板上菌落数均大于150CFU贝9对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。若所有稀释度的平板菌落数均小于10CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。若所有稀释度(包括液体样品原液)平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。若所有稀释度的平板菌落数均不在10CFU~150CFU之间，其中一部分小于10CFU或大于150CFU时，则以最接近10CFU或150CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。5.2报告凝结芽抱杆菌菌落数报告：菌落数在100以内时，按"四舍五入”原则修约，采用两位有效数字报告；菌落数大于或等于100时前3位数字采用"四舍五入"原则修约后取前2位数字，后面用0代替位数来表示结果；也可用10的指数形式来表示，此时也按"四舍五入”原则修约，采用两位有效数字；空白对照平板上有菌落出现，此次检测结果无效；称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告。下面详细描述本发明的具体实施例，所述具体实施例的是示例性的，旨在用于解释本发明的具体实施方式，而不能理解为对本发明的限制。实施例1添加凝结芽抱杆菌样品的计数检测1•设备和材料超净工作台或生物安全柜;高压灭菌器；均质器；电子天平（感量为o.ig）;恒温培养箱：30°C±1°C;冰箱：2°C~5C;刻度吸管：1mL（具O.OImL刻度）、10mL（具O.ImL）刻度或微量移液器及吸头；三角瓶：500mmL、1000mL;试管：18x180;水浴锅：80°C士IC;无菌均质袋。2•培养基试剂2.1凝结芽抱杆菌计数培养基培养基的配制方法：成分：酵母提取物2.5g，蛋白胨5.0g，葡萄糖1.0g，聚山梨醇酯801.0g,L-半光氨酸0.1g，溴甲酚紫0.06g，琼脂15.0g。PH=7.0分装：将上述成分加入到1000mL蒸馏水中，加热溶解，分装后121C高压灭菌15~20min。2.2磷酸盐缓冲液；2.3无菌生理盐水；2.4凝结芽抱杆菌菌株。3•操作步骤3.1样品的制备与稀释操作过程:固体和半固体样品：称取25g样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min~2min，制成1:10的样品匀液。液体样品以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。用无菌吸管吸取液体检样、固体或半固体检样的初级稀释液5mL-10mL于无菌试管中立即将上述试管放人80弋士2弋的水浴中，试管内液面至少低于水面4cm)加热处理30min士1min。在对照管中放一支温度计测定温度。试管内样液的升温时间不应超过5min，将加热处理后的试管取出立即放到20弋以下的流水中冷却。用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面)，振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液，另取1mL无菌吸管或微量移液器吸头，按上述操作顺序，做10倍递增样品匀液，每递增稀释一次，即换用1次1mL灭菌吸管或吸头。3.2样品的接种根据待检样品凝结芽抱杆菌的估计，选择2个~3个连续的适宜稀释度，每个稀释度吸取1mL样品匀液分别置于2个培养皿中，倾注培养基。3.3培养待琼脂凝固后，倒置于50弋士2弋培养箱厌氧培养24h±2h计数平板上的所有菌落数。3.4菌落计数(1)选取菌落数在10CFU~150CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。其中一个平板有较大片状菌落生长时则不宜采用而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。4•结果与报告4.1结果凝结芽抱杆菌菌落总数的计算方法：⑴若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g(mL)样品中凝结芽抱杆菌数结果。⑵若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按公式(1)计算：N二工C/(n1+n2)d (1)式中：N 样品中凝结芽抱杆菌数；IC——平板(含适宜范围菌落数的平板)菌落数之和；n1——第一稀释度(低稀释倍数)平板个数；n2——第二稀释度(高稀释倍数)平板个数；d——稀释因子(第一稀释度)。若所有稀释度的平板上菌落数均大于150CFU贝9对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。若所有稀释度的平板菌落数均小于10CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。若所有稀释度(包括液体样品原液)平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。(6)若所有稀释度的平板菌落数均不在10CFU~150CFU之间，其中一部分小于10CFU或大于150CFU时，则以最接近10CFU或150CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。4.2报告添加凝结芽抱杆菌样品的检测结果见下表1；添加凝结芽抱杆菌样品的计数检测结果与添加量的对比分析见下表2；对表2数据进行F检验分析，结果见下表3；在F检验符合的情况下对表2数据进行T检验分析，结果见下表4。表1:添加凝结芽抱杆菌样品的检测结果表2:添加凝结芽抱杆菌样品的检测结果对比分析表3:F检验结果分析由上表2和表3数据可看出：95%置信水平下：F计<F临界值，两组数据的精密度无显著性差异。表4:T检验数据分析由上表4可看出：95%置信水平下：T计<T临界值，两组数据无显著性差异。通过以上表1~表4的对比分析可以看出，本发明方法的检测结果与添加的量相同或相近，经F检验和T检验，结果无显著性差异，同时符合微生物重复性r<0.25的规定，检测结果准确、可信、可控，本方法可用于凝结芽抱杆菌的检测，填补了凝结芽抱杆菌菌落计数检测方法的空白，满足产品中凝结芽抱杆菌的量化计数的要求，为卫生学评价提供科学、可靠的依据。对比例1按照实施例1的方法测定凝结芽抱杆菌含量，区别在于前处理的温度和时间。不同温度和时间的前处理进行凝结芽抱杆菌检测结果对比参见下表5、图1、图2所示。表5:不同温度和时间前处理进行凝结芽抱杆菌检测结果对比由表5以及图1、图2可以看出，根据本发明实施例1的方法的检测结果与添加的量相同或相近，结果无显著性差异（见实施例1）。但高温或时间过长（超过32min），计数结果都远低于根据本发明实施例1的方法的检测结果，存在显著性差异。温度过高即超过82弋时凝结芽抱杆菌被损伤或杀灭，菌落数均为0,对比例1所计数的结果与根据本发明实施例1的方法计数结果存在显著性差异。非目标菌多为革兰氏阴性杆菌或阳性球菌，这些菌均不耐热，但若温度过低（小于78弋）或时间过短（小于29min），无法使非目标菌灭活，导致计数结果准确度降低。因此，对比例1的方法检测结果不准确、不可信。根据本发明实施例的方法的检测结果准确、可信、可控，可用于凝结芽抱杆菌的检测，为卫生学评价提供科学、可靠的依据。对比例2按照实施例1的方法测定凝结芽抱杆菌含量，区别在于培养温度和时间。不同温度和时间培养凝结芽抱杆菌检测结果对比参见表6、图3、图4所示。其中，限于空间限制，如果方格内的数据呈分行排列的情况，仅表示一个数据，由上而下连接读取。表6:不同温度和时间培养凝结芽抱杆菌检测结果对比由上表6和图3、图4可以看出温度低于45弋培养的计数结果均低于本发明方法的检测结果，原因是温度过低，凝结芽抱杆菌生长缓慢，菌落太小，不易观察计数，从而使检测方法的计数结果准确度降低。温度过高即超过55弋培养时凝结芽抱杆菌停止生长，菌落数均为0,计数结果与添加的量有显著性差异。故对比例2的方法的检测结果不可取，计数结果不准确、不可信。根据本发明实施例的方法的检测结果准确、可信、可控，可用于凝结芽抱杆菌的检测，为卫生学评价提供科学、可靠的依据。对比例3按照实施例1的方法测定凝结芽抱杆菌含