小量全血基因组DNA快速提取(离心柱型)操作方法及步骤说明书

杭州昊鑫生物科技股份“://hzhxbio/“htpp://hzhxbio杭州昊鑫生物科技股份“://hzhxbio/“htpp://hzhxbio--1-DNA快速提取试剂盒名目号：DN01DN0101DN0102DN0103DN0111DN0112DN0113

包装单位50次100次200次50次(带蛋白酶K粉)100次(带蛋白酶K粉)200次(带蛋白酶K粉)适用范围：适用于快速提取全血基因组DNA试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成 保存 50次100次200次平衡液 室温 5ml10ml20ml缓冲液BB 室温 10ml20ml40ml结合液CB 室温 15ml30ml60ml抑制物去除液IR 室温 25ml50ml100ml漂洗液WB 室温 15ml25ml50ml第一次使用前按说明加指定量乙醇EBK粉〔可选〕20mg/mlAC收集管〔2ml〕

室温-20℃

15ml20mg50个50个

15ml20mg×2100个100个

15mlx2200个200个12个月不影响使用效果。储存事项:37℃水浴几分钟帮助重溶解，恢复澄清透亮后冷却到室温即可使用。为避开降低活性，便利常温运输，供给蛋白酶K为冻干粉状，收到后，可短暂离心后，参与1毫升灭菌水溶解。由于反复冻融可能会降低酶活性，因此溶解后马上依据每次使用量分装冻存，－20℃保存。pH盖紧盖子。产品介绍：独特的结合液/蛋白酶K快速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶，然后基因组DNA在DNA从硅基质膜上洗脱。产品特点：不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。快速，简捷，单个样品操作一般可在20分钟内完成。屡次柱漂洗确保高纯度，典型的产量200µl全血可提取出3-12µg，OD /OD260 2801.7～1.930kb-50kb，可直接用于PCR、Southern-blot和各种酶切反响。择购置。200µl3-12µgDNA。留意事项：如Eppendorf5415C或者类似离心机。能格外大。需要自备异丙醇。开头试验前将需要的水浴先预热到70℃备用。43天的标本，不要使用3次的标本，否则会严峻降低产量。pH7.5，pHDNA应当〔10mMTris-HCl，1mMEDT，pH8.0EDTA可能下游酶切反响，使用时可以适当稀释。关于平衡液的使用核酸吸附硅胶膜柱子长期放置过程中会同空气中的电荷/尘埃发生反响而影响其核酸的结合力气。硅胶柱经平衡液预处理后可大大削减柱子中硅胶膜的憎水基团，提高核酸的结合力气。从而提高硅胶柱子回收效率或者产量。平衡液是强碱性溶液，假设不留神遇到，请用大量自来水清洗。用完后需盖紧瓶盖，以免接触37℃使沉淀完全消逝。使用方法：取一个的硅胶膜吸附柱子装在收集管中，吸取100μl的平衡液至柱时平衡液预处理柱子完毕。接后续的操作步骤。操作步骤：〔试验前请先阅读留意事项〕提示：第一次使用前请先在漂洗液WB中参与指定量无水乙醇，充分混匀，参与后请准时在方框打钩标记已参与乙醇，以免屡次参与!200ul1.5ml离心管。假设全血起始量小于200μl，则用缓冲液BB补足到200μl。假设起始量介于200μl-300μl之间，则后续操作需要依据比例增加试剂用量。假设起始量介于300μl-1ml之间，则需要先进展红细胞裂解操作〔见本说明书后附录。假设处理血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血液，其红细胞为有核细胞，因此处理量5-20μl，可加缓冲液BB补足到200μl后进展后续步骤。20μl蛋白酶K(20mg/ml)溶液，充分混匀，再参与200μlCB，马上涡旋振荡充分混匀7010分钟。溶液应变清亮〔但颜色偏黑色。:假设RNARNA，可以在参与200μl5-10分钟。平衡液预处理吸附柱备用：冷却后参与100μl异丙醇，马上涡旋振荡充分混匀，此时可能会消灭絮状沉淀。上述步骤中马上涡旋或者吹打充分混匀格外重要，混匀不充分严峻降低产量，必15秒混匀。〔包括可能有的沉淀AC〔〕13,000rpm30-60秒，倒掉收集管中的废液。IR，12,000rpm30秒，弃废液。600μlW〔请先检查是否已参与无水乙醇!12,000rpm30弃掉废液。600μlWB，12,000rpm30秒，弃掉废液。AC放回空收集管中，13,000rpm2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反响。取出吸附柱AC在吸附膜的中间部位加100μl洗脱缓E〔65-7℃水浴中预热效果更好3-52分钟，12,000rpm1分钟。洗脱体积越大，洗脱效率越高，假设需要DNA浓度较高，可以适当削减洗脱体积，但是最小体积不应少于50μlDNADNA产量。2-8℃，假设要长时间存放，可以放置在－20℃。附录〔300μl，1ml全血举例红细胞裂解操作〕：900μl1.5ml3ml15ml〔红细胞裂解液可向本公司购置〕将抗凝全血〔使用前回复到室温〕300μl1ml全血分别6-810分钟〔期间应当颠倒轻弹混匀数次，帮助裂解红细胞。15ml离心管，倒弃红色上清，并留神的尽可能多的吸弃上清〔留意不要吸到管底的细胞团10μl的残留上清。离心后在管底应当见到白色的白细胞团，也可能有一些红细胞残片和白细胞团在一起，但是假设看到的是大局部的红色细胞团，说明红细胞裂解很不充分，应当3，4。参与200μl缓冲液BB涡旋振荡重悬白细胞团，充分分散白细胞团。其中由于肝素抗凝血的白细胞沉淀团很难打散重悬，影响后续试验裂解效果，建议选用非肝素的抗凝剂收集血液标本。现在可以依据操作步骤提取全血基因组DNA了。问题与解决方法问题标本中含有血凝块红细胞裂解不完全

评论与建议丢弃有血凝块的标本，重用EDTA，肝素，柠檬酸剂收集血液。*血液标本裂解前没有回复到室温-处理前先把血液标本回复到室温。*裂解时间不够-建议：15分钟以上。*裂解过程中没有混匀-轻弹管壁帮助裂解。*血液标本中本身含有的白细胞数量低-建议：增加起始血液处理量。-建议：45天的产量可能大大降低，因此不要存放太久。*K失效了-建议：收到蛋白酶K后，依据每次使用量分装冻存，避开反复冻融。DNA产量低 *裂解不完全或者和异丙醇没有充分混匀-建议参与结合液后和参与蛋白酶K后马上吹打或者涡旋混匀；参与异丙醇后马上吹打或15秒充分混匀。*洗脱效率不高-建议：8，否则残留乙醇会影响洗脱效69和只使用洗脱缓冲液EB洗脱。问题 评论与建议DNA下游酶切不能切开或者酶切不完全DNA长度15kb

*8，乙醇抑制了酶切反响-建议：8，然后空气中晾几分钟，让残留乙醇挥发。*-建议：将洗脱的基因组DNA13,000rpm再离心一分钟，留神取上清使用。*血液样品太老或者不正确的存放，造成DNA降解-建议：选用颖的血液样品*操作不当，造成对基因组DN