显微摄影术学习

显微摄影术学习第1页/共30页显微摄影的发展史

现代的显微摄影技术是随着显微镜和照相器材的发展而发展起来的。在本世纪的三十年代，德国的Zeiss公司就发展出早期的显微摄影系统。此时仅仅是在显微镜上加装普通的照相机。尚没有现在通用的自动测光系统和快门控制器等。在七十年代，出现了带有自动测光和快门控制的专用的显微摄影系统，如OlympusPM-10在国内得到相当广泛地使用。第2页/共30页传统的显微摄影术的不足

对焦不准是这类系统的主要问题，尤其在低倍镜下更为明显，虽然有辅助镜头专门用于对焦，但是结果不能完全令人满意。对于经验尚少的初学者，是难以拍出质量较高的显微照片的。第3页/共30页第4页/共30页显微摄影的“傻瓜”时代的到来

在八、九十年代，随着“傻瓜”照相机的问世，Nickon、Olympus、Leica和Zeiss等公司先后推出了自动对焦的显微摄影系统，加上自动测光、自动调节亮度和对比度、自动识别胶卷感光度和自动卷片等功能。现代的显微摄影系统真正做到了“全傻瓜”。初学者也能拍到质量上乘的照片。第5页/共30页高级的全能研究显微镜的出现

这类照相显微镜除了普通的透射光外，多数配置有落射荧光装置，相差，微分干扰和/或偏光装置，六个以上的全消色差的，平场高孔径值的高质量水晶玻璃物镜（2x，4x，10x，20x，40x，100x），大视野的目镜，无极电子变焦镜头，三个照相机、3CCD摄像头及显示器，或者数码相机。有的还有磁盘驱动器和外接计算机的接口。所以不仅仅是“全傻瓜”摄影系统，而是高级全能研究显微镜。第6页/共30页显微摄影的常识以下以OlympusAX80Provus高级全能研究显微镜为例，说明显微摄影对设备、切片、胶卷等的要求与一般摄影的共同点是，要求良好的照明、清晰的成像、适当的对比和正确的曝光，这些在AX80显微照相系统中均可以自动调整第7页/共30页第8页/共30页显微摄影的常识由于显微摄影的特殊性，还要求以下条件：制作良好切片（伸展、薄、染色比对鲜明、透明好等）特殊的滤光片（如黑白摄影使用绿色滤光片，彩色摄影使用的灯光型胶片的转换滤光片等）荧光染色的切片摄影，要求及时照相，因为标本难以长期保存第9页/共30页显微摄影的常识胶卷的选择：除了荧光摄影外，原则选择感光度低的胶卷，因为摄影时可以不考虑曝光时间如64DIN胶卷的颗粒较100DIN的细，100DIN的又较200DIN的细最好同时拍负片和反转片（正片），可以节省时间拍立得（Polaroid）胶片可以用于少量照片的摄影，但质量较差第10页/共30页显微摄影的常识摄影前最好将要拍的切片做好标记，以免在摄影时难以找到在选择视野时要避开切片上的刀痕、重叠、染色不良和过厚的区域免疫组化染色和原位杂交切片，由于阳性产物一般为棕色，背景明亮，一般应选择照明系统中的“brightfield”第11页/共30页第12页/共30页第13页/共30页显微摄影的常识自动对焦系统在切片厚度超标，或者盖玻片厚度超标时，可能失去自动对焦功能曝光时一定要保持显微镜的绝对静止，切忌用手或者其他的物品碰及台面物镜和目镜均是十分昂贵的，一定要小心爱护，油镜使用后一定要及时用二甲苯清洁使用完毕后要登记使用人，使用时间和设备完好情况等第14页/共30页利用数码相机和普通显微镜拍摄显微照片在显微镜下找到要拍摄的区域将相机固定在三角架上，对准一个目镜，关闭相机的自动闪光打开数码相机，调节焦距，使其在数码相机的CCD上的影像清晰曝光经验之谈:像素在200万左右，打印的照片与胶卷洗印相似第15页/共30页SmallcelltypeofALCL:1600x1200digitalcameraLacularcell:positivefilm第16页/共30页第17页/共30页免疫组织化学染色照相的注意之处切片薄，2-3微米适当过度显色适当过度曝光第18页/共30页CD30第19页/共30页显微摄影的常识荧光染色的照相，难度较大，因为 荧光在继发后数分钟内就会渐渐淬灭一般应选择曝光速度快的胶卷（400DIN）使用1%点测光，直接对发出荧光的组织测光双重染色的荧光照相，应使用不同的继发波长，两次曝光第20页/共30页第21页/共30页第22页/共30页数码显微摄影的计算机软件合成荧光摄影分次合成第23页/共30页虚拟切片技术（Virtualsection)第24页/