生化仪器中的空白定标和质控

生化仪器中的空白定标和质控第1页，共44页，2023年，2月20日，星期日第二，标准液的吸光度与试剂空白的吸光度一定要准确。吸光度受仪器状况、试剂状况的影响，如果您的仪器相当稳定，试剂是影响K值的一个主要因素。如何确定K值是正确的？一般我们用质控血清来检查，最好是两种水平的质控来检查，如果质控结果很好，可以说K值是准确的，用这个K值计算出来病人的结果也是准确的，所以K值非常关键。K值的真面目：K值实际上代表了斜率，截距代表试剂空白，试剂空白每天都在变化，所以K值的稳定性决定您的仪器与试剂，如果仪器与试剂都十分稳定，那K值也很稳定。多长时间定一次标合适？这要看您试剂的稳定性，质控结果不好，有些项目做试剂空白可以解决，有些项目要做两点定标。酶的项目如何确定K值：一是计算出来的理论K值；K=(TV×1000)/(SV×L×ε)二是用有酶项目的定标液得出K值：目前各公司可以提供多项目的定标液，不仅有底物类的项目，也有酶类的项目。第2页，共44页，2023年，2月20日，星期日生化检验中的各种空白概念1、试剂空白：由于生化测试测量的吸光度为相对吸光度，所以从理论上说，所有终点法的测试都需要把试剂本身的吸光度扣除。试剂本身的吸光度就是试剂空白。测量方法是按照正常测试的试剂和样本量第3页，共44页，2023年，2月20日，星期日把样本换成蒸馏水来测量。在传统手工方法中,每次测定都要做至少三个管:测定管、标准管、空白管。其中空白管是试剂加蒸馏水，测出来也就是试剂空白。因为操作环境、仪器状态、试剂稳定性等变异，所以要求每次都要测定试剂空白，称为实时试剂空白。在全自动分析仪上，大体上是模拟手工操作。但许多全自动分析仪为追求速度，在设计上采用一些折中方法来测定试剂空白。以日立全系列生化仪为例。该系列分析仪是做不了实时试剂空白，因为它们全是先加入样本后加试剂，为了折中，只好在定标时做一个试剂空白，保存起来，需要扣除试剂空白时再减这个预先保存的值。这种做法，对于比较稳定的试剂来讲，对结第4页，共44页，2023年，2月20日，星期日果影响不大。通俗的讲，日立的仪器工作流程中首先是将标本加入到比色杯中，然后依次加入R1试剂、R2试剂，所以试剂空白在每个测定项目曲线中是无法看到的。但是7600从CALIBRATION中是可以看到的，S1ABS就是代表试剂空白吸光度，在CALIBRATION画面里的下方找到ReactionMonitor（反应监察），其中STD(1)就是代表试剂空白反应曲线.为了减小误差，日立仪器会连续做两次测定，所以你看到FIRST和SECOND两条，计算时是取他们的平均值。做试剂空白目的之一就是观察试剂是否稳定，积极采取措施纠正。对于日立的这种试剂空白测定很多仪器都采用这种方法，也叫做试剂空白校准。总的说来，自动生化仪上的试剂空白一般表现为零点吸光度，该吸光度是通过校准确立的。第5页，共44页，2023年，2月20日，星期日2、样本空白：由于溶血、脂血、黄疸等情况，会导致样本本身的吸光度对测试结果造成影响。所以对样本本身吸光度的测量，即样本空白，可以去除这方面的影响。测量方法是按照正常测试的试剂和样本量，把试剂换成蒸馏水或生理盐水来进行测量。自动生化仪上，很难界定样本空白。与消除样本空白有关的大约有如下几点:a).在双试剂测定时，加入试剂1和样品后的吸光度可一定程度上扣除样本空白，所以有单试剂不能扣除样本空白的说法。b).现在优质的试剂的抗干扰能力都比较强，比如有些双试剂，R1加入后先和样本孵育一段时间，将血红蛋白、脂肪第6页，共44页，2023年，2月20日，星期日胆红素等反应掉，再加入R2开始测定反应。在一定范围内都可以消除样本空白。c).现代全自动生化仪大多采用双波长测定.双波长测定的原则是根据干扰组分和待测物质吸收光谱的峰形特征，选择两个波长和，使干扰组分在这两个波长处的吸光系数相等，而使待测物质在两波长处的吸光系数有显著差别。以两波长分别测定分析溶液的吸光度，以两个吸光度值之差(△A)计算。这也可以扣除一部分样本空白.d).有些仪器,例如日立系列,有专门的“血清信息”功能的设置。做法都是单独占用一个空白通道来计算，这也叫做样品空白校准。3、水空白：比色杯在加入水以后的吸光度。水空白的意义主要是对光路系统进行检查和校正，如光源，比色杯等，同时在计算中起到消除“杯差”的作用。日立7060中的CellBlank（杯空白）测定的就是水空白。第7页，共44页，2023年，2月20日，星期日全面质量控制的内容全面质量控制的内容主要包括分析前、分析中、分析后这三个主要过程的质控。只有认真的检测和控制这三个过程中各个环节可能出现的误差，才能保证最后检测结果的准确性，才能达到我们的质量要求。第8页，共44页，2023年，2月20日，星期日（一）分析前质控人员培训实验室的设置（水、电、相关设备、用具等）实验仪器的质量保证

(仪器的精度、波长的准确度)检测方法的选择和评价（重复实验、回收实验、干扰实验、方法比较实验）试剂和标准品的选择和评价

（线性范围测定、反应曲线的观察、稳定性实验）标本准备（血清、血浆、胸腹水等)第9页，共44页，2023年，2月20日，星期日（二）分析中质控建立项目操作程序

标准化的操作规程（SOP文件）。室内质控和结果分析

对各个项目进行室内质量控制，并对质控结果进行分析与处理。第10页，共44页，2023年，2月20日，星期日（三）分析后质控审核实验结果室内质控的数据管理参加室间质量评价建立投诉调查与反馈机制第11页，共44页，2023年，2月20日，星期日二、临床生化检验室内质量控制（一）、概念与意义室内质量控制：指各实验室为了监测和评价本实验室工作质量，以决定常规检验报告能否发出，而采取的一系列检查，控制手段，包括实验室工作的全过程。意义：是检测常规工作中的精密度，并观察准确度的改变，提高本实验室常规工作中天内与天间标本检测的一致性。第12页，共44页，2023年，2月20日，星期日要进行室内质量控制就必须要有指示物对各项目的质量进行指示和判断，来说明质量好坏的情况，指示物就是我们需要的控制物（也称质控物）。

控制物定义（也称质控物）：含有被检测的化学成份，用于监测实验室的精密度和准确度的一种指示血清（溶液）称之为控制物。

标准品定义（参考物）：是指它的一种或几种物理或化学性质已经充分被确定，被用于校准仪器或证实一种测定方法的物质。第13页，共44页，2023年，2月20日，星期日2质控品应具备的特性人血清基质，因它的基质效应小.无传染性.添加剂和调制物的数量尽可能少.瓶间变异小，（1）酶类项目瓶CV应小于2％，其它分析物CV％应小于l％（2）某些不稳定成分(如胆红素、ALP等)在复溶后前4小时的变异应小于2％.（3）冻干品其复溶后，2～8℃环境中稳定不少于24h，－20℃环境中稳定不少于20天，到实验室后的有效期应在1年以上.第14页，共44页，2023年，2月20日，星期日室内质控血清浓度水平要求１、三级以上医院的临床实验室，定量测定每批(不超过24小时)至少使用两个浓度水平的质控血清。２、二级、一级医院临床实验室，至少使用一个浓度水平(医学决定水平)的质控血清。３、医学决定水平：是指某项待测物的含量，围绕该浓度的升高或降低，对确定疾病的诊断或治疗起帮助甚至关键的作用。第15页，共44页，2023年，2月20日，星期日统计学的基本概念１、精密度：测定值与均值之间的差值情况称为精密度，差值越大精密度越差，反之越好。

２、准确度：测定值与真实值之间的差值情况称为准确度，越接近真值准确度也好，反之就越差。第16页，共44页，2023年，2月20日，星期日第17页，共44页，2023年，2月20日，星期日室内质量控制的主要方法常规质控图（ｘ±S）法Westgard多规测质控法6西格玛质控图法4.日常标本测定结果均值图法

第18页，共44页，2023年，2月20日，星期日常规质控图（ｘ±S）法这种方法操作简单，直观，易懂，它具有成熟的理论和实际经验，它只需要单一浓度的质控血清就可实现对临床进行室内质量控制，是目前国内外采用最广泛的一种常规室内质量控制的方法。也称为均值-标准差质控图法，也称levey-Jenning质控图法。第19页，共44页，2023年，2月20日，星期日①在纵坐标上标出X、X±2SD、X±3SD的标志，横纵标上标出日期或次数。②用红笔划出X±2SD作为警告线；用蓝笔划出X±3SD作为出控线。这样称为一张空OCV或RCV图。③质控图上所包括的内容第20页，共44页，2023年，2月20日，星期日常规靶值、控制限的确定：一个月结束后,将该月的在控结果与前20个质控测定结果汇集在一起，计算累积X、S、CV,再作为第二个月的IQC的暂定靶值和控制限，观测第二个月的IQC。以此重复３～５个月建立常规的靶值、控制限。在计算累积值的时候需去掉超过±3SD的数据第21页，共44页，2023年，2月20日，星期日室内质控的结果分析（1）测定值的分布规律①95%的测定结果应落在X±2SD范围内。②不能有连续5次结果逐渐上升或下降。③不能有连续5次结果在均值的同一侧。④不能有连续2次结果在X±2SD以外。⑤不能有数据落在X±3SD外。

如违反上述规律时，称为失控。第22页，共44页，2023年，2月20日，星期日（２）质控图的几种失控表现

①曲线漂移：是由于系统误差造成，准确度发生了一次性的向上或向下的改变，这种往往是由于一个突然出现的新的情况引起。如更换质控血清、试剂及操作人员。第23页，共44页，2023年，2月20日，星期日②趋势性变化：质控图趋势性向下或向上变化。表明检测的准确度发生逐渐的变化，这种变化多发生是由于一个逐渐改变的因素造成的。如试剂的挥发、吸水、沉淀等。第24页，共44页，2023年，2月20日，星期日③精密度变化：仪器、试剂或方法学不稳定第25页，共44页，2023年，2月20日，星期日8、失控后处理①迅速回顾，检查整个操作过程。是否有发生错误的环节，包括试剂、方法、波长，以及程序等出现差错。②如操作步骤均无问题，可重复试验一次，如有改进，说明误差很可能操作错误所致，标本量，试剂量的错误，或波长选择错误所致。③如仍不能更正，可取一份新鲜的控制血清重作。④仍不能解决问题，取一份定值血清重做。⑤仍不能解决，应仔细检测仪器。⑥仍未得到纠正，试剂、质控血清重新配制和溶解，仪器保养检修，全部重新查找原因直到问题解决。第26页，共44页，2023年，2月20日，星期日1、方法：要求在常规条件，同时测定2份不同浓度的定值质控血清，所含测定物浓度最好分别为医学决定水平的上限或下限。Westgard多规则法第27页，共44页，2023年，2月20日，星期日2

常用的质控规则质控规则以符号AL表示：(1)A是指超过质控限(L)的质控测定值的个数(2)L是质控界限。(3)

1

2s质控规则,A=1,L=2s当质控测定值超过了规定某规则要求时，应判该批分析违背此规则。第28页，共44页，2023年，2月20日，星期日12s：有1个质控测定值超过X±2s，该规则称为“警告规则”。第29页，共44页，2023年，2月20日，星期日13s规则：1个质控测定值超过X±3s质控限。此规则多由随机误差造成第30页，共44页，2023年，2月20日，星期日22s规则:2个连续的质控测定值同时超过X＋2s或X－2s质控限。此规则主要由系统误差造成第31页，共44页，2023年，2月20日，星期日R4s规则：在同一批内进行两种不同浓度质控品监测时,高浓度测定值与低浓度测定值之间的差值超过4s。此规则多由随机误差造成。第32页，共44页，2023年，2月20日，星期日41s规则：4个连续的质控测定值同时超过X＋1s或X－1s。此规则主要由系统误差造成。第33页，共44页，2023年，2月20日，星期日10x规则：10个连续的质控测定值同时落在均值（X）的同一侧。此规则主要由系统误差造成。第34页，共44页，2023年，2月20日，星期日Westgard多规则的主要特点是：①是在Levey-Jennings方法基础上发展起来的，因此,它很容易与常用的Levey-Jennings质控图进行比较并涵括后者的结果；②通过单值质控图进行简单的数据分析和显示③具有低的假失控或假报警概率；④当失控时，能确定产生失控的分析误差的类型，由此可帮助确定失控的原因以寻找解决问题的办法。第35页，共44页，2023年，2月20日，星期日最初的Westgard多规则通常有六个质控规则，即12s、13s、22s、R4s、41s、10x。其中12s规则是是一种警告规则也是Westgard法的启动规则，它有助于对质控数据的快速判断。为了表达的方便，通常以“／”符号将各项质控规则联接起来，如13s/22s/R4s／41s／10x。第36页，共44页，2023年，2月20日，星期日在实践中13s或R4s规则常检出随机误差，而22s

、41s

、10x质控规则检出系统误差。第37页，共44页，2023年，2月20日，星期日第38页，共44页，2023年，2月20日，星期日IQC中需要注意存在的问题注意的问题：（1）质控血清必须完全溶解和融化后才能使用，同时，（2）必须有准确的加样器，而且水的质量一定要得到保证。（3）质控血清必须与常规标本同等对待，不得特殊处理，只有这样才能真正反映常规工作的质量。第39页，共44页，2023年，2月20日，星期日（4）质控血清测得值应及时在质控图上。确认没有失控后，再填发当天的检验报告。（5）通过质控图寻找出现误差规律。在失控时查找原因，均需要各方面详细记录，才能进行正常分析，因此必须养成良好的实验记录习惯。（6）单纯依靠质量控制制图监测工作质量是不够的。特别是对于过失误差，是无法用统计学方法去发现的。第40页，共44页，2023年，2月20日，星期日存在的问题（１）质控标本对质控过程的监控不够，一般只在早晨调机时做一次质控标本。（２）将质控血清反复测定多次，取其结果均值作为当天质控血清的检测值。因在取均值过程中抵消了大部分随机误差，使