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文档简介

实验荧光显微镜结构及口腔粘膜上皮细胞DNA的观察实验目的实验原理仪器、材料与试剂实验步骤实验报告及思考题

实验目的了解荧光显微镜的基本构造和基本光路了解荧光探针Hoechst33258或33342与细胞成分的结合特性和光谱特性什么是荧光?

物质中的电子吸收光的能量由低能状态转变为高能状态，再回到低能状态时释放出的光。即：物质吸收短波光，发射出的长波光。一种光化荧光荧光的种类自发荧光次生荧光自发荧光：物质受光激发产生的固有荧光次生荧光：物质借荧光色素受光激发产生的荧光荧光的性质吸收光保持固有的荧光特性荧光波长＞激发波长（STOKES法则）荧光强度极小于激发光的强度有不同程度的衰减荧光强度取决于激发光强度、被检物浓度、荧光效率落射荧光显微镜各部件特性和作用

汞灯光源:提供激发光(UV、B、G)

激发滤色镜:波长选择nmT%BANDPASS滤色镜的选择荧光素的特性滤色镜的特性激发分色吸收—根据荧光素和滤色镜的特性选择滤色镜荧光显微镜要求有特殊的光源提供足够强度和较短波长的激发光，诱发荧光物质发出较长波长的荧光。视野中所看到的像，主要是样品的荧光映像。荧光显微镜技术是在光学显微镜水平上对蛋白质和亚细胞组分进行定位的最常用的方法之一。非免疫荧光探针可用来直接标记许多特殊的亚细胞组分及生物大分子。这些探针大多数能被活细胞直接摄取并掺入和聚集在特定的细胞器中，因此我们就可以通过荧光显微镜对这些细胞器进行观察。Hoechst33258是一种亲脂性物质，可跨膜进入活细胞，与DNA特异性结合，它主要结合在富含AT区域的DNA小沟部分。结合DNA后荧光大大增强，最大激发光波长约为350nm,最大发射光波长约为461nm。可用于活细胞观察，不需要对细胞作固定及透化处理。仪器、材料与试剂仪器：荧光显微镜，材料：口腔粘膜上皮细胞，载玻片，牙签试剂：PBS(pH7.4)Ho.33258orH.33342（10µg/mL，溶于PBS)

注意事项盖片时防止产生气泡滴加的染料不宜太多，否则背景

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