酶促反应动力学演示文稿

酶促反应动力学演示文稿现在是1页\一共有82页\编辑于星期三酶促反应动力学现在是2页\一共有82页\编辑于星期三产物0时间初速度酶促反应速度逐渐降低酶促反应的时间进展曲线现在是3页\一共有82页\编辑于星期三

在其他因素不变的情况下，底物浓度对反应速度的影响呈矩形双曲线关系。反应初速度随底物浓度变化曲线现在是4页\一共有82页\编辑于星期三当底物浓度较低时反应速度与底物浓度成正比；反应为一级反应。[S]VVmax现在是5页\一共有82页\编辑于星期三随着底物浓度的增高反应速度不再成正比例加速；反应为混合级反应。[S]VVmax现在是6页\一共有82页\编辑于星期三当底物浓度高达一定程度反应速度不再增加，达最大速度；反应为零级反应[S]VVmax现在是7页\一共有82页\编辑于星期三E+SESP+Ek1k2k3（一）中间复合物学说

k4三个假设：（1）E与S形成ES复合物的反应是快速平衡反应，而ES分解为E及P的反应为慢反应，反应速度取决于慢反应即

V＝k3[ES]。（2）S的总浓度远远大于E的总浓度，因此在反应的初始阶段，S的浓度可认为不变即[S]＝[St]。（3）P→0忽略这步反应现在是8页\一共有82页\编辑于星期三（二）酶促反应的动力学方程式1、米氏方程的推导现在是9页\一共有82页\编辑于星期三1913年Michaelis和Menten提出反应速度与底物浓度关系的数学方程式，即米－曼氏方程式，简称米氏方程(Michaelisequation)。[S]：底物浓度V：不同[S]时的反应速度Vmax：最大反应速度(maximumvelocity)

Ｋm：米氏常数(Michaelisconstant)

ＶVmax[S]Km+[S]＝──现在是10页\一共有82页\编辑于星期三稳态时ES浓度不变

反应速度

V=k3[ES]ES的生成速度=消耗速度

k1[E][S]=k2[ES]+k3[ES]E的质量平衡方程

[E]=[Et]-[ES]E+SESP+Ek1k2k3(Ⅲ)(Ⅰ)(Ⅱ)现在是11页\一共有82页\编辑于星期三现在是12页\一共有82页\编辑于星期三稳态时ES浓度不变反应速度

V=k3[ES]ES的生成速度=消耗速度

k1[E][S]=k2[ES]+k3[ES]E的质量平衡方程

[E]=[Et]-[ES]E+SESP+Ek1k2k3V=V[S]Km+[S]米氏方程V=Vmax=k3[ES]max=k3[Et]Km=

k2+k3k1米氏常数现在是13页\一共有82页\编辑于星期三

a.当[S]很小时V=V[S]/Km一级反应反应初速度随底物浓度变化曲线米氏曲线V=V[S]Km+[S]b.当[S]很大时V=V[S]/[S]=V

0

级反应混合级现在是14页\一共有82页\编辑于星期三Km=?Km=[S]V=V[S]Km+[S]若V＝V/2V2＝V[S]Km+[S]1Km+[S]=2[S]现在是15页\一共有82页\编辑于星期三2、动力学参数的意义（1）米氏常数Km的意义Km＝[S]∴Km值等于酶促反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度，单位是mol/L。2＝Km+[S]VmaxVmax[S]VmaxV[S]KmVmax/2现在是16页\一共有82页\编辑于星期三

①Km是酶的特性常数：

与pH、温度、离子强度、酶及底物种类有关，与酶浓度无关，可以鉴定酶。酶底物Km(mmol/L)脲酶尿素25溶菌酶6-N-乙酰葡萄糖胺0.006葡萄糖-6-磷酸脱氢酶6-磷酸-葡萄糖0.058胰凝乳蛋白酶苯甲酰酪氨酰胺2.5甲酰酪氨酰胺12.0乙酰酪氨酰胺32.0现在是17页\一共有82页\编辑于星期三②可以判断酶的专一性和天然底物Km值最小的底物——最适底物/天然底物Km近似表示酶对底物的亲和力：Km越大、亲和力越小现在是18页\一共有82页\编辑于星期三Km=

k2+k3k1Km≈k2（分离能力）/k1（亲合能力）E+SESP+Ek1k2k3Km越小，亲和力越强。[S]很小时，反应速度就能达到很大。性能优，代谢中这类酶更为重要k2>>k3时现在是19页\一共有82页\编辑于星期三④Km可帮助判断某代谢反应的方向和途径催化可逆反应的酶对正/逆两向底物Km不同

——Km较小者为主要底物③根据Km：判断某[s]时v与Vmax的关系判断抑制剂的类型现在是20页\一共有82页\编辑于星期三乳酸脱氢酶（1.7×10-5）丙酮酸脱氢酶（1.3×10-3）丙酮酸脱羧酶（1.0×10-3）丙酮酸乳酸乙酰CoA乙醛丙酮酸浓度较低时：代谢哪条途径决定于Km最小的酶一底物多酶反应现在是21页\一共有82页\编辑于星期三（2）Vmax和k3（kcat)的意义一定酶浓度下，酶对特定底物的Vmax也是一个常数。[S]很大时，Vmax＝k3[E]。k3表示当酶被底物饱和时，每秒钟每个酶分子转换底物的分子数，——又称为转换数、催化常数kcatkcat越大，酶的催化效率越高现在是22页\一共有82页\编辑于星期三（3）kcat/km的意义：V=Vmax[S]Km+[S]∵Vmax=kcat[Et]∴V=kcat[Et][S]Km+[S]当[S]<<Km时，[E]＝[Et]现在是23页\一共有82页\编辑于星期三是E和S反应形成产物的表观二级速率常数。其大小可用于比较酶的催化效率。kcat/km＝

kcat/km的上限为k1,即生成ES的速率，即酶的催化效率不超过E和S形成ES的结合速率kcat/km的大小可以比较不同酶或同一种酶催化不同底物的催化效率。现在是24页\一共有82页\编辑于星期三（1）Lineweaver-Burk双倒数作图法3、Km与V的求取现在是25页\一共有82页\编辑于星期三现在是26页\一共有82页\编辑于星期三蔗糖酶米氏常数（Km）的测定1.配12支蔗糖底物溶液，浓度分别为0、0.005、0.00625、0.0075、0.00875、0.010、0.0125、0.015、0.02、0.025、0.0375、0.050M，在35℃水浴保温；2.加入3U/ml已在35℃水浴保温的酶溶液，准确作用5分钟，终止反应；3.各吸取0.5ml反应液与3，5-二硝基水杨酸，沸水浴5分钟，冷却后在540nm测定吸光度OD值；4.作图

现在是27页\一共有82页\编辑于星期三（2）Eadie-Hofstee作图法现在是28页\一共有82页\编辑于星期三vV[S]Vmax斜率－Km现在是29页\一共有82页\编辑于星期三

（3）Hanes-Woolf作图法

现在是30页\一共有82页\编辑于星期三斜率=1/VmKm/Vm-Km[S]/V[S]现在是31页\一共有82页\编辑于星期三vVmax[S]－3Km－2Km－Km（4）Eisenthal和Cornish-Bowden线性作图法现在是32页\一共有82页\编辑于星期三（三）多底物的酶促反应动力学

分为单底物、双底物和三底物反应1.酶促反应按底物分子数分类：现在是33页\一共有82页\编辑于星期三①有序反应（orderedreactions）领先底物释放释放A和Q竞争地与自由酶结合（1）顺序反应或单－置换反应2.多底物反应按动力学机制分类：现在是34页\一共有82页\编辑于星期三②随机反应（randomreactions）如肌酸激酶使肌酸磷酸化的反应现在是35页\一共有82页\编辑于星期三AAEPE’PEE’QEQEBB

A和Q竞争自由酶E形式

B和P竞争修饰酶形式E’A和Q不同E’结合

B和P也不与E结合。(2)乒乓反应或双－置换反应现在是36页\一共有82页\编辑于星期三

三、酶的抑制作用失活作用：使酶Pr变性而引起酶活力丧失。抑制作用：使酶活力下降但不引起变性。抑制剂：能引起抑制作用的物质。现在是37页\一共有82页\编辑于星期三

依据：

能否用透析、超滤等物理方法

除去抑制剂，使酶复活。不可逆抑制与可逆抑制（一）抑制作用的分类现在是38页\一共有82页\编辑于星期三1、不可逆抑制作用：抑制剂与酶必需基团以牢固的共价键相连很多为剧毒物质重金属、有机磷、有机汞、有机砷、氰化物、青霉素、毒鼠强等。不可逆抑制现在是39页\一共有82页\编辑于星期三不可逆抑制剂

非专一性不可逆抑制剂（作用于一/几类基团）

专一性不可逆抑制剂（作用于某一种酶的活性部位基团）不可逆抑制剂不可逆抑制现在是40页\一共有82页\编辑于星期三

（1）非专一性不可逆抑制剂①重金属离子

Ag+、

Cu2+、

Hg2+、

Pb2+、

Fe3+

高浓度时可使酶蛋白变性失活；低浓度时对酶活性产生抑制。

——通过加入EDTA解除现在是41页\一共有82页\编辑于星期三

H2N-CH-COOHCH2

SH

H2N-CH-COOHCH2

S-CH2COOHICH2COOHHI②烷化剂（多为卤素化合物）++碘乙酸现在是42页\一共有82页\编辑于星期三③有机磷化合物（敌百虫、敌敌畏）现在是43页\一共有82页\编辑于星期三胆碱酯酶OHPOC2H5OC2H5S有机磷农药部分现在是44页\一共有82页\编辑于星期三胆碱乙酰化酶胆碱酯酶胆碱乙酰胆碱积累导致神经中毒症状现在是45页\一共有82页\编辑于星期三如何紧急救治？排毒洗胃、喝鸡蛋清牛奶导泄、利尿血液透析（清除游离状态毒物）解毒药：解磷定现在是46页\一共有82页\编辑于星期三ROOROOROXROO—EP+E—OHP+HX有机磷化合物羟基酶磷酰化酶(失活)酸ROOROO—EP+-CHNOH磷酰化酶(失活)N+CH3-CHNN+CH3OOROOR+E—OH

P解磷定解毒------解磷定(PAM)：现在是47页\一共有82页\编辑于星期三④有机汞、有机砷化合物——与酶分子中-SH作用；

可通过加入过量巯基化合物解除。现在是48页\一共有82页\编辑于星期三⑤氰化物、硫化物和CO

——与酶中金属离子形成稳定的络合物如氰化物与含铁卟啉细胞色素氧化酶结合⑥青霉素（penicillin）与细菌糖肽转肽酶Ser-OH活性，影响细胞壁合成。现在是49页\一共有82页\编辑于星期三（2）专一性不可逆抑制剂

①Ks型具有底物类似的结构——（设计）带有一活泼基团：与必需基团反应（抑制）

∵利用对酶亲合性进行修饰∴亲合标记试剂（affinitylabelingreagent）现在是50页\一共有82页\编辑于星期三②Kcat型具有底物类似的结构本身是酶的底物还有一潜伏的反应基团“自杀性底物”

现在是51页\一共有82页\编辑于星期三

抑制作用可通过透析等方法除去。原因：非共价键结合可逆抑制竞争性抑制(competitiveinhibition)非竞争性抑制(non-competitiveI.）反竞争性抑制(uncompetitiveI.)

2、可逆抑制作用：现在是52页\一共有82页\编辑于星期三（1）竞争性（Competitive)抑制现在是53页\一共有82页\编辑于星期三I：抑制剂（inhibitor）现在是54页\一共有82页\编辑于星期三现在是55页\一共有82页\编辑于星期三【举例】

丙二酸与琥珀酸竞争琥珀酸脱氢酶琥珀酸琥珀酸脱氢酶FADFADH2延胡索酸琥珀酸现在是56页\一共有82页\编辑于星期三

磺胺类药物的抑菌机制：与对氨基苯甲酸竞争二氢叶酸合成酶二氢蝶呤啶＋对氨基苯甲酸＋谷氨酸二氢叶酸合成酶二氢叶酸现在是57页\一共有82页\编辑于星期三利用竞争性抑制是药物设计主要思路磺胺类药抗菌机理：（与对氨基苯甲酸是结构类似物）竞争性抑制细菌叶酸形成，抑制细菌繁殖人通过食物直接补充叶酸，对人无毒害。现在是58页\一共有82页\编辑于星期三生物碱麻醉—竞争性替代生物碱—吗啡、海洛因、可卡因、尼古丁

吗啡海洛因现在是59页\一共有82页\编辑于星期三抑制物（2）非竞性（Non-competitive)抑制无法形成产物现在是60页\一共有82页\编辑于星期三Noncompetitiveinhibition现在是61页\一共有82页\编辑于星期三现在是62页\一共有82页\编辑于星期三（3）反竞争性（Uncompetitive）抑制现在是63页\一共有82页\编辑于星期三现在是64页\一共有82页\编辑于星期三现在是65页\一共有82页\编辑于星期三1：反应体系不加I2：体系中加入一定量不可逆抑制剂3：体系中加入一定量可逆抑制剂v123[E](三)可逆和不可逆抑制作用的鉴别现在是66页\一共有82页\编辑于星期三[E]v不可逆抑制剂的作用[E]v可逆抑制剂的作用[I]→[I]现在是67页\一共有8