DB37T 3624-2019牛场气溶胶结核分枝杆菌复合群荧光定量PCR检测技术规程_第1页
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DB37DetectionofMycobacteriumtuberculosiscomplexpathogenicorganismsinaerosolofcattlefarmbyReal-timePCR山东省市场监督管理局发布 本标准起草单位：山东省农业科学院奶牛研究中心、山东师牛场气溶胶结核分枝杆菌复合群荧光定量PCR检测技术规程本标准规定了牛场环境气溶胶样本中结核分枝杆菌复合群核酸实时荧光定量PCR检测方法的技术要GB/T6682分析实验室用水规格和4缩略语AGI：全玻璃液体冲击式采样器（All-Glass-Imping8.2气溶胶样品的采集后的灭活处理待检样品在2℃~8℃保存不应超过24h；-20℃保存不超过三个月；-80℃以下可长期保存。样品应置于低温（2℃~8℃)、密封的容器内运输。9操作方法9.1气溶胶样本的前处理9.2核酸提取采用商品化细菌基因组DNA提取试剂盒进行9.3.1反应液的配制9.3.2加样在已分装有荧光PCR预混液的PCR光学管中每管分别加入2μL待检样品或对照模板，混匀质控有效的条件为：阴性对照和空白对照应无Ct值或≥35，阳性对照的Ct值应＜35，且呈现S型扩明显对数增长期，判为荧光定量PCR阴性反A.2台式离心机（转子容积2mL，50mL；最高离心力15000×gA.6冰箱（2℃~8℃,-20℃,-80℃)。B.6.1设备安装：首先安装三脚架，空气微生物采样器放置高度为距地面1.5m，将30mL灭菌生理盐1和2的模板分别为牛结核分枝杆菌和结核结核分枝杆菌复合群核酸阳性的熔解曲线Tm次性灭菌离心管。防止不同样品之间通过采样器、气溶

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