多发性骨髓瘤分子遗传学异常与其临床预后指标的相关性研究

究摘要：目的：通过检测多发性骨髓瘤（multiplemyeloma，MM）患者瘤细胞膜表面分子遗传学变化，探讨分子遗传学之间以及他们与影响预后的临床指标间的MM体治疗提供依据。方法：采用间期荧光原位杂交技术（interphasefluorescenceinsituhybridization，I-FISH）3613q14缺失、P53lq21扩增IGH易位，探讨分子遗传学异常与各临床生物学指标间可能存在的潜在联系。结果：与正常对照组相比，55.56%13q14缺失（13q14.3RB1的共同缺失），其中在Ⅲ期患者中所占的比例高于Ⅰ、Ⅱ期患者，61.11%的III期患者存在IGH易位，两者具有相关性（r=0.378，p<0.05），但与各临床指标无相关性。关键词：多发性骨髓瘤；荧光原位杂交技术；分子遗传学；临床疗效多发性骨髓瘤影响预后的因素很多。其生存期可从数月到10年以上不等。这种差异主要由骨髓瘤细胞生物学和复杂的宿主因素所决定。目前多数研究认为，血清β2-微球蛋白、白蛋白（ALB）、C反应蛋白（CRP）水平，Durie-Salmon（DS）分期及细胞遗传学异常如del（13q14）等与疾病的预后相关[1]已经作为血液系统疾病的常用检测手段，其在辅助诊断、预后评估方面的价值也被越来越多的学者认同。资料一般资料20146-20178MM36例，所有患者均进行外周血细胞计X线摄片和免疫球蛋白、、IgM）C反应蛋白等测[2]。治疗方案中均未使用过单克隆抗体治疗即非靶向治疗。男201663岁。M20例，IgA106例。Durie-Salmon临床分期：Ⅰ期8例，Ⅱ期13例，Ⅲ期15例。ISS临床分期：Ⅰ期2例，Ⅱ期10例，Ⅲ期24例。均对其行间期荧光原位杂交检测。正常对照20例，为同期染色体正常的营养性缺铁性贫血患者，中位年龄53.5岁。临床分期Durie-Salmon<0.6×1012/m2血红蛋白>100g/L；②X蛋白：IgG<50g/L，IgA<30g/L<。期：瘤细胞数IⅢ>1.2×1012/m2<85g/L；②血清钙>2.98mmol/L；③X线多处进行性溶骨性损害；④M蛋白：IgG>70g/L，IgA>50g/L，尿轻链>12g/24h。国际分期分期β2-MG<3.5mg/L>35g/LⅡ期：血清β2-MG<3.5mg/L<35g/Lβ2-MG≧3.5mg/L<5.5mg/LⅢβ2-MG>5.5mg/L。预后风险分组参考相关文献FISH预后风险组：以是否存在del（13q14）和（或）del（17p13）把病例组按预后风险分组为高危组（del13q14）和标危组（del17p13）2组。[3]2.方法：间期荧光原位杂交主要仪器离心机：北京飞鸽牌高速离心机高分辨荧光显微镜：OLYMPUSBX51，日本高级恒温水浴锅，37℃和72℃恒温水浴锅：上海医疗器械厂主要试剂PH7.4的PBSRPMI1640培养基0.02%肝素秋水仙胺：浓度为5ug/ml，4℃保存备用。0.075mol/LKCL3：1甲醇/冰醋酸固定液13q14DNAD13S319、RB114q32DNA探LSIIGHC/IGHV-20℃保存备用。主要方法13q14D13S319RBlDNA14q32IGHDNA17p13P53DNAlq21lq21DNA-20℃的病人染色体标本，按照产品说明书操作，予以变性、杂交、洗片、复染，在DAPI/FITC/RHOD滤光片的激发下观察细胞中桔红色和绿色荧光信号，每例至少分析200个细胞，计数边界清楚，无重叠，结构完整的细胞核，用德国耶拿CCD摄像头进行图像采集，使用IMSTAR软件进行图像分析。根据正常对照组Ⅹ±3S以确定RB1、D13S319、P53、1q21、IGH位点的阈值，阈值分别为6.1%、5.2%、6.3%、3.4%、1.2%。MM患者如果检测值大于阈值，判定为阳性结果。统计学方法收集两组研究对象的数据，进行整理，并建立数据库，采用SPSS20.0分析，计数资料，描述应用（n%），应用X2检验，P<0.05，具有统计学意义。结果I-FISH分析基因组异常Ⅹ±3S、D13S319、、1q21、IGH位点的阈值，阈6.1%5.2%6.3%3.4%1.2%3620例（55.56%）13q14缺失（13q14.3RB1的共同缺失例（61.1IGH易位，P538例（22.22%），17例，1q2113例（36.11%），11例。分子遗传学异常与临床指标的相关性研究2013q1411.11%（4/36），Ⅱ13.89%（5/36），Ⅲ期占30.56%（11/36），22IGH13.89%（5/36），Ⅱ19.44%（7/36），Ⅲ27.78%（10/36），8P535.56%（2/36），Ⅲ期占16.67%（6/36），131q21Ⅰ11.11%（4/36），Ⅲ25%（9/36），Ⅲ期患者所占的比例均高于Ⅰ、Ⅱ期患者（见表1），61.11%的III期患者存在IGH易位，两者具有相关性（r=0.378，p<0.05），但未发现各遗传学异常与临床分期、免疫球蛋白分型及实验室指标差异有统计学意义。4讨论MM患者的临床特征、自然病程及预后存在明显的异质性，对MM细胞的细胞遗传学和分子细胞遗传学研究表明几乎所有的MM13号染色体部分或完全缺失是MMMM的各个阶段并且是复发和预后的不良因素[4]。Zojer等采I-FISHMM13q1413qRblD13S31946.2％（48/104）和38.9％（28/72），进一步与临床因素比较发现Durie-Salmon分期越高、β2-MG及浆细胞比例越高越容易发生del（13q14），并且认为13q14缺失的患者总生存期短（24.2mVS>60m，P<0.005），对传统剂量化疗反应性差（40.8%VS78.6%，P=0.009）[5]。本研究中16例（44.44%）检测到del（13q14.3），24例（66.67%）存在RB1缺失，20例（55.56%）del（13q14）（13q14.3RB1的共同缺失），与国外研究结果相近但[6]13q14β2-MG等临床因素中存在显著差异性，很可能因为三期病例及总病例数较少有关，但研究发现2013q14缺失的患者中，Ⅰ期占11.11%（4/36），Ⅱ期占13.89%（5/36），Ⅲ期占30.56%（11/36），与文献[7]报道相似，但由于本研究例数较少，有待扩大样本例数进一步验证。参考文献：郝玉书，王建祥，肖志坚，主编．白细胞疾病基础理论与临床．第1技术出版社，2006．711-738．.[M].3版[3]DispenzieriA，RajkumarSV，GertzMA，etal.TreatmentofnewlydiagnosedmultiplemyelomabasedonMayoStratificationofMyelomaandRisk-adaptedconsensusstatement.MayoClinProc.2007.TrcicRL，SkelinIK，SustercicD，etal.Cytogeneticsofmultiplemyeloma.CollAntropol.2010.34（1）：41-4.ZojerN，KonigsbergR，AckermannJ，etal.Deletionof13q14remainsanindependentadverseprognosticvariableinmultiplemyelomadespiteitsfrequentdetectionbyinterphasefluorescenceinsituhybridization.Blood.2000.BatailleR，Pellat-DeceunynckC，RobillardN，Avet-LoiseauH，HarousseauP.CD117（c-kit）isaberrantlyexpressedinasubsetofMGUSandmultiplemyelomawithunexpectedlygood