微生物检测基本技术

微生物检测基本技术第1页，共21页，2023年，2月20日，星期六染色观察第2页，共21页，2023年，2月20日，星期六革兰氏染色1884年丹麦医师Gram所发明

第3页，共21页，2023年，2月20日，星期六革

兰

氏

染

色

法1.涂片固定2.单染—结晶紫染液第一次染色

1min

第4页，共21页，2023年，2月20日，星期六3.媒染—碘-碘化钾溶液浸湿30S4.脱色—95%乙醇溶液进行颜色洗脱5.复染—红色的藩红染液第二次染色

第5页，共21页，2023年，2月20日，星期六呈现第二次染色的效果红色；称革兰氏阴性菌（红阴G-）细菌呈现第一次染色的效果紫色，革兰氏阳性菌（紫阳G＋）；第6页，共21页，2023年，2月20日，星期六划线接种，分离纯化Inoculatinganagarplatetoobtainsinglecolonies第7页，共21页，2023年，2月20日，星期六第8页，共21页，2023年，2月20日，星期六灼烧第9页，共21页，2023年，2月20日，星期六第10页，共21页，2023年，2月20日，星期六第11页，共21页，2023年，2月20日，星期六生化反应来测定微生物的代谢产物，生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。微生物生化反应：糖酵解试验

淀粉水解试验V-P试验甲基红（MethylRed）试验靛基质（Imdole）试验枸椽酸盐试验：尿素酶（Urease）试验三糖铁（TSI）琼脂试验第12页，共21页，2023年，2月20日，星期六糖酵解试验

不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异，或能利用或不能利用，能利用者，或产气或不产气。可用指示剂及发酵管检验。第13页，共21页，2023年，2月20日，星期六淀粉水解试验某些细菌可以产生分解淀粉的酶，把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。淀粉水解后，遇碘不再变蓝色。第14页，共21页，2023年，2月20日，星期六V-P试验某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称V－P（+）反应。第15页，共21页，2023年，2月20日，星期六甲基红（MethylRed）试验肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一步分解中，由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，可使培养基PH值下降至pH4.5以下，使甲基红指示剂变红。第16页，共21页，2023年，2月20日，星期六靛基质（Imdole）试验某些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚。吲哚的存在可用显色反应表现出来。吲哚与对二甲基氨基苯醛结合，形成玫瑰吲哚，为红色化合物。第17页，共21页，2023年，2月20日，星期六枸椽酸盐试验某些细菌能利用枸椽酸盐作为碳源，及磷酸铵作为氮源，将枸椽酸盐分解为二氧化碳，培养基反应后成碱性，由于指示剂的作用，培养基变为兰色。第18页，共21页，2023年，2月20日，星期六尿素酶（Urease）试验有些细菌能产生尿素酶，将尿素分解、产生2个分子的氨，使培养基变为碱性，酚红呈粉红色。1、未接种2、尿素酶阳性3、尿素酶阴性第19页，共21页，2023年，2月20日，星期六三糖铁（TSI）琼脂试验本试验可同时观察乳糖和蔗糖发酵产酸或产酸产气（变黄）；产生硫化氢（变黑）。葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。a.uninoculated

b.littlechange/alkaline/-/-

c.alkaline/acid/-/+

d.acid/acid/+/+

e.acid/acid/+/-

slantcolor/buttcolor/gasproduct