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.生,国内外众多学者对、,但要胞,至今仍非易事早期主要用法法械大低Ca2+、M+的螯合剂(如枸橼分离肝细,但螯合剂,,包括,且由于胰蛋白酶是,,,虽然肝细,体,这些长及其功,有利于肝因此,要获取理想胞,但所需,,,胶原酶的用量原酶的浓则作用+.

.,去依,;的,胶原酶的作用需要的活,5+浓度,用500mg/L,温度需保持在4时pH值宜维持在7.4左,不7.27.6,,,提高肝细胞成活,门,铺过胶原,。a,置于℃恒温箱中过夜后使用。过去选择含8%W,但我们试胎牛,并在其中,肝细胞生长好细胞:,细胞;密度,,培养板中缺少足够的空/l,主:胰、锥Sigma胎牛Gibco公。BT01-100泵.

.)低温离心机(公)全仪津,倒镜司。CO2箱Kendro司,室厂。实验步骤一、原代大肝细胞的分）大鼠雄性150～200g周20℃～25℃。备倒置相动平衡微型离心机LDZ4-北净工缓（万U（100万SD大酮801U肝用弯头钳子钝性分离门静脉和14.

.角在3细线结扎（输液瓶高度距离灌流大37直5～10min，改37℃mL控制约10灌5～10min，0.05%以判可以终止灌流离断韧带眼科镊钝性撕裂肝组织℃RPMI完止IVmL三，10min，所50mL.

.，500r/min，离心3min，弃上清，以4℃RPMI16403完二、原代大肝细胞的纯50mL离分离分离4℃80010另吸取第液1:1:1分铺4℃，离心1三、肝细胞代培养详细骤基1胎牛血RPMI1640培养基素05U·L－1、素00－1和素60U·L1)调整肝细1106有肝液的6孔培养在7℃mL·L－1CO2.

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