花卉的组培技术应用

花卉的组培技术应用第1页/共46页第一节花卉的组培技术应用（以非洲菊、百合组培为例）

第2页/共46页传统的花卉繁殖是靠播种、扦插、分株、压条、嫁接这些措施来实现的，然而在花卉业迅猛发展的今天，传统的育苗技术已经无法满足生产需要。当前，利用组织培养进行花卉繁殖的技术已日臻成熟。自20世纪60年代的兰花工业兴起后，运用组培克隆技术培育名贵花卉种苗已成为花卉种苗生产的必然趋势。第3页/共46页组织培养技术在花卉产业上的应用良种快速繁殖种苗脱毒复壮杂交育种培育新品种种质资源保存第4页/共46页案例一非洲菊的组培快繁技术第5页/共46页非洲菊，又名太阳花、扶郎花，属多年生草本花卉。重瓣花，花色有红、橙红、淡红、白色，花色艳丽，经济效益高，占世界切花销量第五位，是近年来发展迅速的重要切花种类之一。第6页/共46页第7页/共46页传统的繁殖方法为播种或分株繁殖，但非洲菊种子寿命短、发芽率低，而且播种繁殖变异率很高，难以得到性状一致的种苗，因而不能用于规模生产；而分株繁殖则存在繁殖慢，易退化和传播病害，也不适于现代的大规模生产，因而目前国外一般都采用组织培养的方法来生产种苗。第8页/共46页一．外植体的选择

茎尖是一种较好的外植体，出愈率最高、繁殖速度快，但取材有限、灭菌很易产生药害；幼叶、幼叶柄、花梗作为外植体，可诱导产生愈伤组织，但是诱导成苗难；花托是非洲菊组织培养中比较理想的外植体，其好处在于花托较大且量多，易于剥取，并有花被包裏，污染程度轻，易于消毒，污染率低。第9页/共46页首先要选择花大、花色艳丽、市场流行的品种，然后再选择无病虫害、植株生长健壮、花色纯正的优良品种单株进行取材。作为外植体的花蕾要选取直径在1.0cm左右，而且未露心的小花蕾，太大或是太小的花蕾均不能获得满意的效果。外植体的选择方法

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二．外植体的消毒方法1

1、剥去外层萼片，在自来水下冲洗干净

2、置75%酒精浸泡30秒

3、置0.1%的升汞溶液中浸泡5~8分钟

4、取出后剥去外部所有萼片,在1%的次氯酸钠溶液中再次消毒10分钟

5、放入无菌水中充分洗涤5次第11页/共46页方法21、剥去外层萼片，在自来水下冲洗干净2、置75%酒精浸泡30秒3、用0.1%升汞加数滴吐温浸泡12～15分钟4、无菌水冲洗5～6次第12页/共46页三．外植体的初代培养1、将灭菌后的花蕾剥去所有萼片、管状花和舌状花，将花托外植体切成0.5cm2长的小块接种。2、诱导培养基：MS+BA10mg/L+IAA0.5mg/L第13页/共46页四．试管苗的增殖与继代培养培养6~7周以后，外植体脱分化形成愈伤组织，并陆续有小芽分化，此时将带有小芽的愈伤组织团切成2~4个小块，分别移到增殖与继代培养基上。培养基：MS+BA0.2～1㎎/L+NAA0.2mg/L﹢KT0.3mg/L第14页/共46页培养一段时间后，又有小芽陆续分化。培养4周后，把这些继代培养的芽丛分割，并移到新鲜的培养基上。每次继代培养时间约为4周，芽丛的发生力可保持半年左右。第15页/共46页注意:1、随6-BA浓度的提高，增殖速度相应提高。但在较高的6-BA浓度条件下芽苗会变细、变弱。2、生产中在努力提高芽苗增殖率的同时，还应保证分生芽苗的健壮。根据品种不同,一般把增殖倍数控制在3.0-5.0倍之间。第16页/共46页五．试管苗的壮苗与生根

将长高的无根苗(2～3㎝)转移到生根培养基，诱导根培养基：1/2MS+NAA0.1mg/L。7～8天后，小苗基部会长出3～5条不定根，12～15天就可以出瓶，生根率达到95%以上。在无糖的MS培养基上,植株生根快,且生根率高。无糖或低糖培养所诱导的根系发达，呈白色，试管苗过渡成活率高。糖的浓度以0～1.5%为好,低盐培养基生根效果较好。第17页/共46页六．试管苗的移栽与田间管理欲移栽的组培苗先去掉瓶盖通风炼苗，3天后将生根苗洗净根部附着物，移入温室内的珍珠岩+腐殖土（1：1）基质中。一周内保持遮光75％和适当的湿度，湿度以90%～95%为宜，温度20～25℃。一周后，适当增加光照，且每周淋一次无机液肥。第18页/共46页在2周内保持较高的空气相对湿度，3周时幼苗长出白根，新叶抽出。一个月左右长出4片新叶，株高6～8厘米，可大定植或上市出售，移栽成活率可达95%以上。第19页/共46页案例二

百合组培快繁技术第20页/共46页百合繁殖方法主要有分球繁殖、鳞心繁殖、鳞片繁殖等，但经多代无性繁殖以后，导致病毒积累、种性退化，严重地制约着百合产量和质量的提高。利用组织培养与脱毒技术相结合，能够迅速去除无性繁殖体内病毒，复壮品种，并可加快百合的快速繁殖速度。第21页/共46页百合特征:鳞茎，无皮，广卵形，茎高90厘米左右，直立茎上叶多而散生，披针形，叶色从浓绿，光滑。花朵呈喇叭状长筒形，颜色丰富，有清香。第22页/共46页一、外植体的选择百合的许多器官、组织都可作为外植体，如鳞片、花梗、叶片、茎尖、腋芽、花瓣、花托、花药、胚、等，其中采用鳞片作外植体的较多。注：以脱毒培养为主的应以茎尖作为外植体第23页/共46页以鳞片为例，在选取外植体时，要选择无病虫害危害的种球。外部鳞片易污染要将其剥离，中部鳞片肉质厚，生长势强，易诱导小鳞茎，是最佳的外植体。内部鳞片幼嫩，诱导率低，不易产生小鳞茎，故不宜采用。就季节性而言，以秋、冬季的鳞片分化成小鳞茎的能力最强。第24页/共46页二、外植体的消毒

由于百合鳞茎都生长在土中，受土壤微生物的影响，所以一般都会有污染。为此外植体消毒要严加注意，鳞片先用流线形自来水冲洗12小时以上进行预灭菌第25页/共46页先用70%酒精消毒30秒，再用0.1%升汞消毒15－20分钟。第26页/共46页最后用无菌水冲洗4~6次，用无菌吸水纸吸干水分。第27页/共46页三、外植体的初代培养在同一块鳞片上，其基部被诱导产生小鳞茎的能力最强，中部次之，而顶部及边缘位置相对要差些，所以在进行原代培养时，要取已消毒外植体的基部或中部。第28页/共46页将其切成1~2cm2大小，背部朝下接种。培养基：MS+2,4－D0.3mg/L+琼脂0.7%+蔗糖3%第29页/共46页培养条件为：温度控制在23±2℃，光照控制在3000~5000Lx进行脱分化，之后温度控制在25±2℃，每天10h小时1500Lx光照。第30页/共46页在百合组织培养过程中，鳞片诱导产生小鳞茎的过程是比较缓慢的，一般为30天以上，在鳞片上分化出多个肉眼可见的针尖大小的小突起。第31页/共46页40天左右发育成球状的可见鳞片的小鳞茎。第32页/共46页四、继代培养1）分离小鳞茎培养

选择直径达到0.5cm大小的小鳞茎，用镊子将其轻轻剥离，置于增殖培养基中。

第33页/共46页把原来的鳞片重新转到新鲜的诱导培养基上继续诱导小鳞茎，小鳞茎还会在其他的部位产生，整个生长周期可以延续5~6个月。第34页/共46页

小鳞茎继代培养30天左右可增殖1~2倍。开始是在鳞茎基部产生小鳞茎，40天左右小鳞茎长大，形成丛鳞茎。小鳞茎慢慢抽出新芽，然后形成小植株。此时可把丛芽切割继续培养增殖。第35页/共46页2）再生小鳞片剥离培养选择直径达到0.5cm大小的小鳞茎，将其小鳞片分离下来，不用切割，直接接种到分化培养基上。第36页/共46页

20d后，在小鳞片基部会出现3~5个小突起，以后发育成小鳞茎。多数次生小鳞茎会抽生细长叶片，造成小鳞茎不饱满；不抽生叶片的小鳞茎相对要肥厚一些。如此反复进行,可以使繁殖中间体得到快速增殖,但不可超过6代以上,否则分化率下降，小鳞茎细弱。第37页/共46页4、增重培养直径达到1cm以上即可进行生根培养，对于达不到此标准的小鳞茎，接种到增重培养基中，在此种培养基上，小鳞茎较少长叶而明显增重。第38页/共46页五、试管苗的生根与练苗将丛生的试管芽切成单株，接种在1/2MS+IBA0.5mg/L+活性炭0.5%生根培养基上，7天后芽基部开始形成根尖。慢慢伸长成辐射状白色的小根。20天后根长达7~10cm，基部稍膨大。温度设置为25~28℃，光照强度为1500Lx．每天给予10~12h光照。第39页/共46页当试管苗长成具4~5片叶，3~4条根，7cm左右高时，在自然光照和温度条件下炼20d可移栽。第40页/共46页六、试管苗的移栽与田间管理移栽时将试管苗根部的培养基洗干净再移栽。百合试管苗比较娇嫩，移栽幼苗最好用消毒的腐殖土或草炭+蛭石(2:1)的基质中，育苗盘必须清洗消毒。第41页/共46页水分管理栽后应浇一次定根水，同时保持较高的空气湿度（90%以上）。在棚室栽培中如土壤干燥，应在晴天上午浇水，切忌在中午日照强烈、气温很高时浇水或喷水，否则易引起百合芽枯病等生理性病害的发生。第42页/共46页光照管理

在日照充足的棚室和夏季，要注意适当遮荫。否则强光照和短日照都会使百合植株矮小，产量明显下降。

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