血栓与止血检验分析前的质量控制

血栓与止血检验分析前质量控制血栓与止血检验分析前的质量控制第1页基础理论血栓与止血检验分析前的质量控制第2页

一、血管壁止血功效1、收缩反应增强：伤口缩小，血流减慢。2、血小板激活:形成血小板血栓，堵塞伤口。3、凝血系统激活：激活Ⅻ，开启内源凝血系统；释放组织因子，开启外源凝血系统。4、局部血粘度增高：局部血管通透性增加，血浆外渗，血液浓缩，血粘度增高，血流减慢，有利于止血。血栓与止血检验分析前的质量控制第3页二、血小板止血功效1、粘附功效：粘附于血管内皮下组份。2、聚集功效：血小板相互粘附。3、释放反应：释放α、δ（致密）、γ（溶酶体）颗粒。4、促凝功效：如PF3促凝活性，α颗粒中凝血因子释放。5、血块收缩功效：血凝块收缩，有利于伤口缩小和愈合。6、维护血管内皮完整性血栓与止血检验分析前的质量控制第4页三、血液凝固机制1、凝血因子特征：14个，FⅢ存在全身组织中。共分4组。（1）、依赖VITK凝血因子（2）、接触凝血因子：Ⅺ、Ⅻ（3）、对凝血酶敏感凝血因子：FⅠ、FⅤ、FⅧ、FXⅢ（4）其它因子：FⅢ、FⅣ血栓与止血检验分析前的质量控制第5页四、血液抗凝系统和纤溶系统1、细胞抗凝作用：主要经过单核-巨噬细胞系统、肝细胞、血管内皮细胞。2、体液抗凝作用：AT-Ⅲ、PC、PS、TM（血栓调整蛋白）等。3、其它抗凝物质：组织因子途经抑制物3、纤维蛋白溶解系统：包含组织型和尿激酶型纤溶酶原激活物、纤溶酶原、纤溶酶、纤溶抑制物。血栓与止血检验分析前的质量控制第6页一、检测系统要求二、室内质量控制方法及要求三、血凝仪之间比对试验四、参考范围确实定五、标本采集说明六、常见分析前原因异常结果分析血栓与止血检验分析前的质量控制第7页一、检测系统要求血凝仪试剂、校准品、消耗品配套使用：

使用非配套分析系统试验室应按照NCCLS-EP9要求与配套分析系统结果进行比对，以验证分析系统有效性。仪器使用前评价：验证其性能是否能到达制造商性能要求（制造商要求性能要求必须满足临床需要）。如：精密度、准确度、携带污染、可汇报范围等。血栓与止血检验分析前的质量控制第8页批内精密度：试验方案：取正常、异常新鲜血浆或质控，连续重复测定20次，计算CV，SD。要求：CV在1/4CLIA'88范围内。批间精密度：试验方案：连续20天测定同一批号室内质控正常、异常两个水平，分别计算CV、SD。要求：CV在1/3CLIA'88范围内。血栓与止血检验分析前的质量控制第9页携带污染率高值样本对低值样本污染试验方案：取新鲜样本或定值质控，将低值样本置样本架1和3位置，高值样本置于2位置，每个样本分别测定3次，统计结果：N1、N2、N3、A1、A2、A3、N4、N5、N6。计算：k1={[N4-Mean（N1，N2，N3）]/Mean（N1，N2，3）}×100%要求：k1在1/4CLIA'88范围内。低值样本对高值样本污染

将1、3位置放高值，2位置放低值，方法和要求同上血栓与止血检验分析前的质量控制第10页准确度：试验方案：依据本室参加最近一年临床检验中心室间质评回报结果，以本室上报测定值(X轴)和此次质评回报靶值(Y轴)求回归曲线，用医学决定水平代入回归曲线求得对应预测值，计算医学决定水平和预测值相对偏差来验证准确度。医学决定水平：INR:3.6,APTT:40s,FIB1.5g/L要求:在1/2CLIA‘88范围内。血栓与止血检验分析前的质量控制第11页质控品选择：制订程序和方法，以评价质控品质量和适用性。二、室内质量控制方法及要求质控品浓度水平：应最少使用2个浓度水平（含正常和异常水平）质控项目：全部检测项目均应开展质控频度：检测当日最少1次血栓与止血检验分析前的质量控制第12页室内质量控制质控品均值确实定：

20个测定值，最少10天取得（天天上下午各测一次，与上批号交叉）试剂更换新批号或仪器进行主要调整时，应重新确定均值。标准差：采取前一个月或前3个月平均标准差制造商提供数据仅供参考血栓与止血检验分析前的质量控制第13页室内质量控制失控判断规则：最少使用1-3s规则，各种质控规则使用可提升误差捡出概率。

（惯用1-3s+2-2s）失控汇报：描述失控情况、核查方法、原因分析、纠正办法及纠正效果评价质控数据管理：标准上每个月统计1次，最少应保留2年。血栓与止血检验分析前的质量控制第14页三、血凝仪之间比对试验条件：同一个系统（仪器、试剂）时间：6个月最少一次或更换主要部件后凝血试验不一样系统为何不能比对？不一样仪器检测原理不一样凝血反应为瀑布式，对不一样试剂敏感性不一无调整系数（凝血反应没规律性）处理方法：建立各自参考区间、验证等。血栓与止血检验分析前的质量控制第15页血凝仪之间比对试验试验方案：准备10份新鲜血浆样本（含正常和异常标本），整个试验应在2h内完成。分别在基准仪器和比对仪器上检测，计算比对仪器和基准仪器之间结果偏差百分比。要求：偏差绝对值在此范围内（1/2CLIA’88）为满足要求，80%以上标本满足要求为合格（以相对稳定仪器作为基准机）

（CLIA’88PT、APTT:15%，FIB:20%)血栓与止血检验分析前的质量控制第16页四、参考范围确实定参考范围不是操作规程或教科书上订出简单固定范围，而是伴随仪器、试剂、年纪、性别以及环境等原因而改变制订建立参考范围程序，以确定不一样检测系统参考范围如：PTINR参考范围为0.85～1.15

其秒数范围，不一样批号试剂应依据以下公式计算：INR=试验秒数对照秒数ISI血栓与止血检验分析前的质量控制第17页正常对照采集20份以上，年纪在18～55岁，男女各半，剔除服药者、肝肾功效异常及脂浊溶血标本，平静状态下采血。检测各管，结果取均值作为正常对照值

试剂更换批号，正常对照均应重新获取厂家提供参考值或参考范围不能作为正常对照血栓与止血检验分析前的质量控制第18页正常混合血浆采集20份以上，年纪在18～55岁，男女各半，剔除服药者、肝肾功效异常及脂浊溶血标本，平静状态下采血。离心后将各管血浆均匀混合，然后分装保留-20℃两周、-40℃两月、-70℃六个月。

用途：判别开瓶后试剂有效性、室内质控品血栓与止血检验分析前的质量控制第19页参考范围验证：试验方案：测定40份（男女各半）健康人员新鲜血样本。要求：判断检测结果是否落在本室设定参考区间内（95％以上）。血栓与止血检验分析前的质量控制第20页确认病人身份及容器（硅化或塑料）。屡次重复采血病人在同一条件下采血。止血带不要超出5分钟，强调采血顺利。快速将血液和抗凝剂轻轻颠倒混匀。五、标本采集说明血栓与止血检验分析前的质量控制第21页各管采血次序血培养→凝血管→血清管→肝素抗凝管→血常规管→血糖管美国BD企业推荐多管采集次序

凝血管总是放第二，当只有一只凝血管时提议先采集一只空管丢掉再采集凝血管。因为，当针头进入血管前要经过组织，此时组织液易进入针管。血液混入组织液后即刻开启外源凝血路径。血栓与止血检验分析前的质量控制第22页标本贮存

全血需在试验室要求时间内离心并分离血浆；若标本不能在4小时内检测，需分离出血浆并转移至洁净干燥符合要求试管中加盖保留于2℃～8℃。

当日不能检测样本需在-20℃条件下保留，两周内完成检测；

-70℃条件下保留期限可达6个月。血栓与止血检验分析前的质量控制第23页

抗凝剂枸橼酸钠，0.109mol/L

抗凝剂与血液百分比严格按1：9

当Hct增高>55%或<25%时，用以下公式换算：

抗凝剂用量（ml）

=0.00185×全血量（ml）×[100-Hct(%)]尤其要注意是Hct增高标本血栓与止血检验分析前的质量控制第24页结果1出血待查PT>120”APTT>180”TT17.1”/17.0”FIB3.12g/LPLT204x109/L分析：肝素？标本稀释？采集原因？II、VII、IX、X（V）处理：联络临床问询病史检测凝血因子活性常见于误食老鼠药（治疗）六、常见分析前原因异常结果分析血栓与止血检验分析前的质量控制第25页

依赖维生素K凝血因子包含FII、VII、IX、X，其共同特点---氨基末端含有数量不等γ-羧基谷氨酸

在肝合成必须依赖VK，不然无凝血活性

VK缺乏可造成新生儿出血或取得性成人出血性疾病

含有结合Ca++能力，并借助于Ca++与磷脂膜结合，Ca++起“搭桥”作用。

γ-羧基谷氨酸Ca++磷脂膜II、VIIIX、XVK血栓与止血检验分析前的质量控制第26页结果2PT16.9”/12.5”APTT>180”TT>180”FIB2.17g/L分析：标本被肝素污染静脉留置管血透时所采集处理：联络临床确认标本正确采集提议重新采血复查常见分析前原因异常结果分析血栓与止血检验分析前的质量控制第27页肝素抗凝原理：

肝素+AT→（构型改变暴露活性中心）精氨酸

+IIa、Xa、XIIa、XIa、IXa

(丝氨酸蛋白酶)

（1：1形成复合物）从而使这些酶失去活性

VIIa不被AT抑制PT为外源凝血系统筛选试验，其开启因子VIIaAPTT为内源凝血系统筛选试验，其开启因子XIIaTT所用试剂成份是IIa血栓与止血检验分析前的质量控制第28页结果3PT11.2”/12.5”APTT20.3”/36.0”TT19.0”/17.0”FIB2.33g/L分析：采血不顺利部分凝固抗凝剂不足处理：检验标本（抗凝百分比、凝块）重新采血常见于：肾病、产科、多发伤常见分析前原因异常结果分析血栓与止血检验分析前的质量控制第29页

因子X激活：

FXFXa

V

FVa

[FIXa-VIIIa-Ca++-PF3][TF-VIIa-Ca++]Ca+++PF3此复合物有FVa参加活性增加30万倍

凝血酶生成因子V激活：[Ca+++PF3+FXa+FVa]IIaII血栓与止血检验分析前的质量控制第30页结果4PT13.4”/12.5”APTT57.2”/36.0”TT16.8”/17.0”FIB3.32g/LFVIII46%FIX52%FXI48%FXII39%分析:

抗磷脂抗体综合征

抗磷脂抗体干扰凝血因子测定，而不是凝血因子活性真降低。LAC1.73以上凝血因子检测是在APTT基础上进行常见分析前原因异常结果分析舒普生类抗菌素干扰血栓与止血检验分析前的质量控制第31页表面接触FXIIFXIIaFXIFXIaHMWKFIXFIXaFVIIIaCa++PF3Ca++FXaFVaCa++PF3FXFIIFIIaFgFbLAC抗凝机制内源凝血系统LAC血栓与止血检验分析前的质量控制第32页结果5：羊水栓塞患者时间PT(s)APTT(s)FIB(g/L)TT(s)Ca++(mmol/L)产前12.133.04.7014.52.23DIC后22.474.90.5136.71.89DIC后24h17.682.51.1025.41.99DIC后48h13.1107.85.2814.11.65DIC后72h13.268.05.9015.52.08DIC后96h13.049.64.6214.82.51参考范围11.7~14.829.0~43.02.00~4.0014.0~20.02.10~2.55时间FⅡ:CFⅤ:CFⅦ:CFⅧ:CFⅨ:CFⅩ:CFⅪ:CFⅫ:CDIC后48h1041411911911891318487DIC后96h1091451392221261408877参考范围82~11472~13485~12078~12868~12884~12282~11872~113常见分析前原因异常结果分析血栓与止血检验分析前的质量控制第33页时间悬浮红细胞(u)新鲜冰冻血浆(ml)单采血小板(u)5%白蛋白针(ml)24h内727401025024~48h214001025048~72h-5401025072~!96h---250该患者在手术及发生DIC后不一样时间输注各种血量该患者输注了大量血制品，体内存留过量枸橼酸盐，造成APTT显著延长。血栓与止血检验分析前的质量控制第34页PT原理：

外源凝血开启到凝血酶生成只需8秒钟血浆37℃

Ca++足量组织凝血活酶APTTT原理：

血浆

足量激活剂PF337℃

Ca++内源凝血开启到凝血酶生成需要3~5分钟血栓与止血检验分析前的质量控制第35页受检血浆乏因子血浆

PT或APTT试剂患者正常凝血因子活性检测原理：制备不一样稀释度时间活度凝血因子测定通常先将受检血浆做1:10稀释该患者APTT高度异常是因为血浆中过量枸橼酸盐干扰APTT试验引发，而不是凝血因子缺乏造成。血栓与止血检验分析前的质量控制第36页PT测定临床意义参考范围：10-15SPT时间延长见于：1.ⅠⅡⅤⅦⅩ因子减低，较少见。2.肝脏疾病，3.VK缺乏症：胆石症、胆