农药残留测定方法专业知识培训

农药残留测定方法专业知识培训农药残留测定方法专业知识培训第1页淋洗液色谱柱检测器数据处理第二节液相色谱仪农药残留测定方法专业知识培训第2页本节首页退出本章一、GC与HPLC比较农药残留测定方法专业知识培训第3页本节首页退出本章二、流动相基础要求保持色谱柱稳定性，因而与固定相不互溶（延长柱寿命）不发生不可逆吸附有适当pH值化学惰性—不与样品及固定相发生反应。农药残留测定方法专业知识培训第4页本节首页退出本章UV：在紫外线区“透明”

示差：折射率与溶剂有较大差异电化学检测器：电惰性。对样品有很强溶解力。清洗与更换方便低价、毒性小、纯度高。1、适合用于所选检测器农药残留测定方法专业知识培训第5页本节首页退出本章2.流动相选择有适当理化性质（沸点、粘度等，尽可能小一些）适当强度（分配系数要适当，简单样品可大，复杂样品要小）混合溶剂（有等度和梯度之分）极性适当（需依据溶剂性质而定）农药残留测定方法专业知识培训第6页本节首页退出本章3、流动相物理参数溶解度参数（溶剂极性量度）：与样品分配比相关，要适中。沸点：要低些，便于回收分离样品。粘度：柱效与粘度成反比，要求早在0.4～0.5cP。混合溶剂普通能降低粘度。农药残留测定方法专业知识培训第7页本节首页退出本章4、混合溶剂可靠改变溶剂组成来调整溶剂强度等，以适合不容样品。等度淋洗：淋洗过程中溶剂组成不变，强度恒定，k值在10以内可得很好分离。梯度淋洗：淋洗过程中溶剂组成随时间而变，普通使强度按程序增加，使组分在最适当k值处洗出。农药残留测定方法专业知识培训第8页本节首页退出本章5、梯度淋洗使用于极性范围宽混合物分离。优点：提供限单位时间内最大分离度。提升出峰对称性减小峰宽降低检测农药残留测定方法专业知识培训第9页本节首页退出本章问题：要用高纯试剂（贵）。可能在固定相上产生杂质富集，需再生处理（尤其是极性柱），可用10～

30倍柱体积溶剂淋洗。5、梯度淋洗农药残留测定方法专业知识培训第10页本节首页退出本章三、液相色谱柱保养柱稳定性与固定相类型及使用情况相关。为了保持柱效、柱容量及渗透性，必须进行仔细地保养。是否会因为柱外效应，使分析柱柱效显著下降？农药残留测定方法专业知识培训第11页本节首页退出本章（一）、预防堵塞1、必须将流动相仔细地蒸馏、过滤。在流动相贮槽与柱之间，使用0.5μm孔径过滤器。水往往是一个主要污染源。在水溶液流动相（如缓冲液）中，细菌轻易生长，可能堵塞筛板。预防细菌生长方法是加入抑制剂，如0.01%NaNO3。显然，抑制剂不能干扰分离和测定。农药残留测定方法专业知识培训第12页本节首页退出本章（一）、预防堵塞2、在恒定压力下，发觉流量降低，柱子可能个别堵塞。堵塞最轻易发生在极窄入口接头处以及入口、出口筛板处。堵塞后需要仔细拆洗，去除堵塞物，但必须预防较强机械震动，预防用热手接触柱子，以扰动柱内固定相层，使柱效发生改变。农药残留测定方法专业知识培训第13页本节首页退出本章5．要预防反冲（流动相逆向流动），不然使固定相层位移，柱效下降。6．柱子两端用金属螺帽封闭，保留在纯净有机溶剂中。应该将柱子保留在以下pH范围内水溶液流动相中：2<pH<8.5。为了长久保留，最好用纯有机溶剂（如甲醇）清洗柱子。7．一定要预防柱子干涸，尤其是硬胶柱。（一）、预防堵塞农药残留测定方法专业知识培训第14页本节首页退出本章二、液相色谱柱保养8．使用卫柱(GuardColumn,亦称预柱)。连续注射含有强滞留(不被洗脱)组分样品，将使柱效下降，保留值改变，选择性变坏，柱寿命缩短。为了延长柱寿命，在进样阀和分析柱之间加上卫柱。农药残留测定方法专业知识培训第15页本节首页退出本章二、液相色谱柱保养卫柱较短(5~10cm)，固定相与分析柱类似。其作用是吸着强滞留组分，预防对分析柱污染，保持分析柱性能稳定。试验表明，只要卫柱与高效、小粒度分析柱联用，除了使k’为零组分塔板数大大降低外，对k’值较大组分，其柱效下降极少。农药残留测定方法专业知识培训第16页本节首页退出本章三、检测器农药残留测定方法专业知识培训第17页本节首页退出本章三、检测器紫外检测器UV-DETECTOR农药残留测定方法专业知识培训第18页本节首页退出本章

二极管阵列检测器DIODEARRAYDETECTOR农药残留测定方法专业知识培训第19页本节首页退出本章四、液相色谱仪使用1、流动相（2）溶剂要与检测器匹配。对于紫外吸收检测器，应注意选取检测器波长比溶剂紫外截止波长要长。所谓溶剂紫外截止波长指当小于截止波长辐射经过溶剂时，溶剂对此辐射产生强烈吸收，此时溶剂被看作是光学不透明，它严重干扰组分吸收测量。农药残留测定方法专业知识培训第20页本节首页退出本章（3）高纯度。不纯溶剂会引发基线不稳，或产生“伪峰”。（5）低粘度。常见有丙酮、乙醇、乙晴等。但粘度过于低溶剂也不宜采取，例戊烷、乙醚等，它们易在色谱柱或检测器内形成气泡，影响分离。农药残留测定方法专业知识培训第21页本节首页退出本章必须做!溶剂前处理过滤：0.45um或更小孔径滤膜

目标：除去溶剂中微小颗粒，防止堵塞色谱柱，尤其是使用无机盐配制缓冲液。农药残留测定方法专业知识培训第22页本节首页退出本章目标：除去流动相中溶解或因混合而产生气泡气泡对测定影响：

1）柱流量不准；2）检测器基线波动脱气注意点：

1）天天脱气；2）混合溶剂脱气时间不能过长必须做!溶剂前处理农药残留测定方法专业知识培训第23页本节首页退出本章2、高压输液泵1.每次使用后要把泵中缓冲液洗洁净，预防盐沉积，泵要浸在无缓冲液溶液或有机溶剂中。2.使用HPLC级流动相试剂。3.使用不锈钢烧结吸液滤头。农药残留测定方法专业知识培训第24页本节首页退出本章2、高压进样阀必须做!每次使用后要冲洗洁净进样阀中残留样品和缓冲盐。预防无机盐沉积和样品微粒磨损阀转子。禁止用!禁止使用气相色谱那样尖头针进样。农药残留测定方法专业知识培训第25页本节首页退出本章3、紫外检测器每次做1、流过池每次使用后连同色谱柱一起清洗2、使用脱过气流动相,预防气泡卡在流过池内。经常做不定时使用空流过池校正波长。农药残留测定方法专业知识培训第26页本节首页退出本章4、操作极限预防1.禁止在无流动相时开启高压输液泵.2.设定泵上限压力(≤25Mpa)预防长久压力过高损坏泵和进样阀.3.设定泵下限压力(0.5~1Mpa)预防流动相抽干和严重泄漏.农药残留测定方法专业知识培训第27页5、预柱与保护柱从泵来流动相预柱进样器保护柱分析柱到检测器农药残留测定方法专业知识培训第28页本节首页退出本章使用保护柱带整体过滤片保护柱农药残留测定方法专业知识培训第29页本节首页退出本章步骤1：使用含盐缓冲液后（如离子对试剂）应用溶解性强溶剂（如水）进行冲洗步骤2：先断开检测器，然后用对来自样品中物质有强溶解性溶剂进行冲洗。对于反相色谱柱，可使用甲醇，乙睛四氢呋喃，氯仿，庚烷等，在此条件下，应防止溶剂pH低于2或高于8若经过步骤1和步骤2后，压力仍没下降至步骤36、柱堵塞修复农药残留测定方法专业知识培训第30页本节首页退出本章步骤3：断开检测器，将色谱柱反方向放置，然后检验柱压（1）若压力稳定下降，至步骤4（2）若压力不下降，至步骤5步骤4：保持色谱柱反方向连接，用低于0.5ml/min流速冲洗1小时若步骤4不能降压，至步骤56、柱堵塞修复农药残留测定方法专业知识培训第31页本节首页退出本章步骤5：若内置过滤器被堵塞，应冲洗或更换。柱连接端拆卸或重装会造成柱效下降（有效塔板数下降和不对称峰）若步骤5不能降低柱压，至步骤6步骤6：若进口端填料发生堵塞，柱子将不可能被彻底恢复，只能经过去掉进口端个别填料，重新填充进行有限柱效恢复。（2~5mm）6、柱堵塞修复农药残留测定方法专业知识培训第32页

五、FL2200型液相色谱仪1、高压输液泵2、高压进样阀3、液相色谱柱4、紫外检测器5、溶剂箱农药残留测定方法专业知识培训第33页1、高压输液泵输液系统农药残留测定方法专业知识培训第34页2、高压输液泵农药残留测定方法专业知识培训第35页样品完全溶解在流动相中样品没有完全溶解过滤样品，不含固体颗粒用流动相或比流动相弱溶剂溶解样品进样量尽可能小六、常见峰问题1、样品制备农药残留测定方法专业知识培训第36页2、峰形问题（双峰）柱头塌陷或柱床运动。泵头过滤芯(Frit)个别堵塞。组份共流出正常双峰柱头塌陷农药残留测定方法专业知识培训第37页问题：一个有紫外吸收流动相与一个没有紫外吸收流动相动态混合产生噪音，增加静态混合器能够降低这种噪音。缺点:增加了延迟体积静态混合器3、噪音农药残留测定方法专业知识培训第38页检测池脏检测池灯能量下降由泵引发脉冲检测器上温度效应检测池中有气泡经过Time(min.)4、基线噪音农药残留测定方法专业知识培训第39页5、基线漂移梯度洗脱引发温度不稳定（RID）流动相脏柱子没有用流动相平衡系统中污染物溢出农药残留测定方法专业知识培训第40页6、鬼峰20%～100%MeOH梯度洗脱，没有进样鬼峰：没有进样就有色谱峰出现。原因－流动相脏农药残留测定方法专业知识培训第41页7、柱外扩展用较短、窄内径毛细管连接进样器和色谱柱以及柱子和检测器。确认连接管接头都相互匹配。使用死体积小流动池减小进样量增加柱外死体积农药残留测定方法专业知识培训第42页8、峰扩展全部峰都扩展柱效降低或有柱塌陷进样体积过大流动相粘度大个别峰扩展前一次分析样品流出物高分子量样品－蛋白质或聚合物农药残留测定方法专业知识培训第43页知识窗拖尾因子ABExcellentt=1.0-1.05Acceptablet=1.2Unacceptablet=2Awfult=4农药残留测定方法专业知识培训第44页9、拖

尾柱头有污染物堆积重金属反应全部峰均拖尾柱子失效小峰在大峰后洗脱出来个别峰拖尾二次保留效应残留硅醇相互作用拖尾因子＞1.2农药残留测定方法专业知识培训第45页正常前伸10、前伸峰柱子过载小峰在大峰之前洗脱出来拖尾因子＜0.9农药残留测定方法专业知识培训第46页11、负

峰溶解样品溶剂经过柱子时平衡被破坏样品吸收比流动相吸收小。RID中最常见正常负峰农药残留测定方法专业知识培训第47页本节首页退出本章七、压力问题

压力问题压力过高压力过低压力波动???农药残留测定方法专业知识培训第48页1、压力过高

柱子进口过滤芯被污染PURGE阀过滤芯被污染

色谱柱被污染

连接管路，尤其是针座毛细管堵塞

进样器旋转密封阀被堵塞

进样针或针座被阻塞

压力测量使用此阀分割系统农药残留测定方法专业知识培训第49页溶剂进口过滤芯堵塞连接管路泄漏或其它备件（泵密封垫）溶剂或流速改变主动阀失灵四元百分比阀失灵单向出口阀失灵色谱柱失效(固定相)2、压力过低压力测量溶剂进口过滤芯农药残留测定方法专业知识培训第50页溶剂进口过滤芯3