新版沙门氏菌检验

新版沙门氏菌检验新版沙门氏菌检验第1页

依据侵入机体沙门氏菌菌种不一样，在临床上引发四种不一样疾病:（1）伤寒、副伤寒由沙门氏属中伤寒杆菌和甲、乙、丙型副伤寒杆菌引发。（2）食物中毒沙门氏菌属引发食物中毒，主要以肠炎杆菌、鼠伤寒杆菌、猪霍乱杆菌、丙型副伤寒杆菌和汤普逊杆菌等最为多见。临床症状主要是胃肠炎。病程较短，普通2~4d,可完全恢复。（3）败血症多为猪霍乱杆菌引发，甲、乙、丙型副伤寒杆菌和肠炎杆菌亦可引发败血症。（4）慢性肠炎沙门氏杆菌可引发慢性、持久性肠炎。2新版沙门氏菌检验第2页

沙门氏菌广泛分布于自然界，是引发食物中毒主要病原菌。在世界各国各类细菌性食物中毒中，沙门氏菌常居前列。所以，沙门氏菌检测是各国检验机构对各种进出口食品必检项目之一。沙门氏菌不产生外毒素，但能产生毒力较强内毒素。沙门氏菌主要经过食物、饮水经口感染。可存在各种食物中，包含生肉、禽、蛋、奶制品、虾、鱼和田鸡腿等。3新版沙门氏菌检验第3页二、沙门氏菌生物学特征

1、形态与染色特征：革兰氏阴性短杆菌，无芽孢,普通无荚膜，周生鞭毛（除鸡白痢沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏菌外），大多数含有菌毛。2、培养特征：需氧或兼性厌氧；普通营养琼脂上生长良好，菌落中等大小，无色半透明、圆形、光滑、湿润。4新版沙门氏菌检验第4页3、生化特征：大个别发酵葡萄糖、麦芽糖、甘露醇和山梨酸产气；普通不发酵乳糖和蔗糖，不发酵侧金盏花醇；普通不产吲哚，V-P反应阴性；不分解尿素，苯丙氨酸不脱氨；三糖铁琼脂斜面常产生H2S。赖氨酸脱羧普通阳性4、抵抗力：较弱，不耐热，最适温度37℃，最适pH6.8-7.8。5、毒素特征：不产外毒素，产毒性很强内毒素，这是致病主要原因。5新版沙门氏菌检验第5页6、血清学特征：沙门氏菌含有复杂抗原结构。即使沙门氏菌含有O、H、K和其它表面物质(如菌毛)四种抗原，但只有O抗原是每个菌株都有成份。1）O抗原（菌体抗原）*存在于菌体表面，为脂多糖，多糖个别决定其特异性，*O抗原耐热(100℃、2.5h或121℃、2h加热均不破坏其抗原性)，其特异性不易丧失或变异。*一个菌体含有一个或各种不一样O抗原。6新版沙门氏菌检验第6页2）H抗原（鞭毛抗原）*H抗原存在于鞭毛中，不耐热，化学成份蛋白质，其抗原性能够被酒精所破坏。*H抗原可分为两相第1相：为特异相，用小写英文字母表示，a～z，Z以后则从z1、z2……，已编到z83。第2相：为非特异相以阿拉伯数字表示，共7种。含有第1相和第2相H抗原细菌称为双相菌，大多数沙门氏菌属于此；仅有一相者称单相菌，如肠炎沙门氏菌。极少数无鞭毛菌两相抗原都不含有，称为无相菌，如鸡白痢沙门氏菌。7新版沙门氏菌检验第7页3）

Vi抗原（包膜抗原）少数沙门氏菌中还有一个表面包膜抗原，功效与大肠杆菌K抗原类同，因普通认为它与毒力(Virulence)相关，故称Vi抗原。能阻止O抗原与对应抗体结合；经过几次传代、60℃热处理或石炭酸处理后轻易消失。8新版沙门氏菌检验第8页三、

生化反应9新版沙门氏菌检验第9页1、吲哚试验(indoltest)细菌产生色氨酸酶，可分解蛋白胨中色氨酸，生成靛基质（吲哚），靛基质与试剂对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰靛基质。色氨酸→吲哚（无色）＋对二甲基氨基苯甲醛→玫瑰吲哚（红色，+大肠杆菌）不产吲哚（无色，-产气杆菌）试验方法：取培养24h培养液，先加入少许乙醚，摇动试管以提取和浓缩吲哚，待其浮于培养液表面后，再沿试管壁徐缓加入吲哚试剂数滴，在接触面呈红色，即为阳性。应用：用于肠道杆菌判定10新版沙门氏菌检验第10页Indoltest吲哚试验tryptophan色氨酸→indole吲哚→玫瑰吲哚↑Kovac'sreagent吲哚试剂

（对二甲基氨基苯甲醛）-+E.coli蛋白胨水试管11新版沙门氏菌检验第11页2、尿素酶（Urease，脲酶）试验有些细菌能产生尿素酶，将尿素分解、产生2个分子氨，使培养基变为碱性，酚红呈粉红色。尿素酶不是诱导酶，因为不论底物尿素是否存在，细菌均能合成此酶。其活性最适pH为7.0。酚红：黄色→红色（+普通变形杆菌）黄色（-大肠杆菌）试验方法：挑取18~24h待试菌培养物大量接种于液体培养基管中，摇匀，于36±1℃培养，观察结果。或涂布并穿刺接种于琼脂斜面，不要抵达底部，留底部作变色对照。培养24h左右，观察结果，如阴性应继续培养至4天，作最终判定，变为粉红色为阳性。12新版沙门氏菌检验第12页UreaseTest

尿素酶试验：urea尿素ammonia氨13新版沙门氏菌检验第13页3、氨基酸脱羧酶测定

有些细菌含有氨基酸脱羧酶，使羧基释出，生成胺类和二氧化碳。此反应在偏酸条件下进行，当培养基含胺类时呈碱性反应，使指示剂变色。

接种与观察结果：用幼龄培养液作为菌种，直接接种。接种后封油，对照管与测定管同时接种封油。肠肝菌科细菌于37℃培养4天观察。当指示剂（溴甲酚紫）呈紫色或带红色调紫色者为阳性，呈黄色者为阴性。对照管应呈黄色反应。14新版沙门氏菌检验第14页15新版沙门氏菌检验第15页4、三糖铁（TSI）琼脂试验试验方法：以接种针挑取待试菌可疑菌落或纯培养物，穿刺接种并涂布于斜面，置36±1℃培养18~24h，观察结果。培养基：乳糖：蔗糖：葡萄糖=10：10：1；加有酚红本试验可同时观察糖发酵产酸或产酸产气（变黄）；产生硫化氢（变黑）。只能利用葡萄糖细菌，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成少许酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面以后又变红，底部因为是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。16新版沙门氏菌检验第16页17新版沙门氏菌检验第17页5、β-半乳糖苷酶（ONPG）测定ONPG:邻硝基酚-β-D-半乳糖苷。含有半乳糖苷酶细菌，能使其水解，从而释放黄色邻硝基酚ONPG试验左为阳性（黄）右为阴性对照18新版沙门氏菌检验第18页四、检测方法19新版沙门氏菌检验第19页

从食品中分离和判定沙门氏菌，当前通常采取方法共分5个步骤：前增菌：食品样品在含有营养非选择性培养基中增菌，使受损伤沙门氏菌细胞恢复到稳定生理状态。加工食品均应经过前增菌。（选择性）增菌：此培养基允许沙门氏菌连续增菌，同时阻止大多数其它细菌增殖。未经加工食品无须经过前增菌而直接增菌。选择性平板分离：采取固体选择培养基，抑制非沙门氏菌生长，提供肉眼可见疑似沙门氏菌纯菌落识别。生物化学筛选：排除大多数非沙门氏菌，也提供了沙门氏菌培养物菌属初步判定。血清学技术判定培养物菌种。20新版沙门氏菌检验第20页中华人民共和国国家标准

食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验GB4789.4-冻肉、蛋品、乳品及其它加工食品鲜肉、鲜蛋、鲜乳或其它未经加工食品前增菌法25g＋BPW225mL36℃±1℃普通4h，干蛋品18h～24h10mL＋MM（或TTB）100mL10mL＋SC100mL直接增菌法25g＋灭菌生理盐水25mL检样匀液25mL＋MM（或TTB）100mL检样匀液25mL

＋SC100mLBSDHL（或HE、WS、SS）TSI（排除A/AH2S－结果），靛基质，尿素，KCN，赖氨酸H2S＋靛－尿－KCN－赖＋（或一项不符）沙门氏菌血清学试验甘露醇+山梨醇+H2S＋靛＋尿－KCN－赖＋H2S－靛－尿－KCN－赖＋/－非如左述各种反应结果沙门氏菌血清学试验ONPG－沙门氏菌非沙门氏菌42℃