使用制备型高效液相色谱的经验之谈

精品文档案例一:某特定化合物系强极性有机小分子，极性大、难挥发，采用硅胶柱层析不易提纯，需用其他分离技术来纯化。解决方法：终极目的是提纯该物质。总体策略——“先看，后想，再精品文档放心下载行动”——“看化学结构，想理化性质，定纯化方法。由于该化合物精品文档放心下载及相关杂质的理化性质决定了难以用常规的重结晶、蒸馏（精馏）、精品文档放心下载精品文档放心下载型.高效液相色谱法（Preparative）来分离纯化之。精品文档放心下载方法步骤：了解样品及有关组分的情况→2.样品预处理→3.感谢阅读AnalyticalHPLCMethod→4.优化PreparativeHPLC条件→5.检查出现的问题→回精品文档放心下载收纯化的物质。更细致地来讲，开始PreparativeHPLC之前须明白：待分离样精品文档放心下载精品文档放心下载等极性基团）、光谱图（涉及到后续试验检测波长设定）、分子精品文档放心下载LC-MS精品文档放心下载含化合物的数目，preparativeHPLC之前是否须经flashcolumn粗谢谢阅读分）；样品预处理——最主要的是样品的溶解度（将尽量多的样品溶谢谢阅读感谢阅读质（潜在的“柱杀手），样品溶液是否需要中和等；建立AnalyticalHPLC——这一步，跟平常的HPLC相似，重感谢阅读1欢迎下载。精品文档谢谢阅读隔远些（起码得基线分离，利于后续制备时放大），若流动相中必须精品文档放心下载谢谢阅读谢谢阅读否则要脱盐，得二次分离；优化PreparativeHPLC条件——通常来讲，制备柱是实验室现精品文档放心下载有的（色谱柱就这么定下来了，没得选择的余地，除非是需新购色谱精品文档放心下载AnalyticalHPLC感谢阅读目标组分收集确认（LC-MS测分子量）；检查出现的问题——这一步是最需要费心留神的！很多时候，谢谢阅读出了问题，根本就没有挽回的余地，当然了，有时也是亡羊补牢，犹谢谢阅读为未晚；所以，更多的时候，是需要未雨绸缪，把可能会发生的事情感谢阅读尽量考虑周全！比如样品的溶解度（在甲醇、水、乙腈、流动相、四谢谢阅读氢呋喃那、酸水、碱水中的溶解性如何？），若样品溶解性不好，第精品文档放心下载一步就卡住，很打击人滴！感谢阅读上面提到的那些溶剂中analyticalHPLC虽然分离得很漂亮，但还是没精品文档放心下载法做。最后是通过感谢阅读绕了个圈才搞定！再比如，样品的酸碱稳定性、热稳定性，这涉及到谢谢阅读谢谢阅读2欢迎下载。精品文档会变坏，那得万分谨慎了。虽困难，到从合成的角度来讲，也容感谢阅读感谢阅读感谢阅读品结构信息，是否含氰基、活性酯键、游离氨基、游离羧基等，谢谢阅读以防去除流动相过程中发生氰基变酰胺、酯水解、酸催化酯化等等谢谢阅读情况，基础有机化学方面的知识可以派上用场。谢谢阅读就前功尽弃、徒劳无益了。可以先低温旋蒸掉乙腈（甲醇）后，再溶剂萃取或者沉淀出目标化合精品文档放心下载物；若热稳定性好的话，也可以直接旋蒸干水，或者用油泵拉干，量精品文档放心下载少的话。冷冻干燥也可以派上用场。具体情况具体分析吧。需要留心感谢阅读的是，虽然挥发性添加剂会旋蒸掉，但也不可能一蹴而就，在旋蒸过精品文档放心下载感谢阅读需要注意这个过程中目标化合物的稳定性，是否顶得住。案例二：某强极性、含氮碱性化合物的分离纯化上面简单陈述了反相制备型高效液相色谱法分离纯化的基本流感谢阅读程及方法建立过程中的注意事项，下面，聊一个自己的亲身经历，在谢谢阅读谢谢阅读与大家分享一下，前事不忘后事之师！对该强极性、含氮碱性化合物，先在analyticalHPLC上摸索分离条精品文档放心下载件，初次尝试乙腈水体系，流动相中不添加任何改性剂，结果，分感谢阅读离效果极不理想，出峰偏早且色谱峰形差，拖尾严重！考虑在流动相精品文档放心下载3欢迎下载。精品文档中添加FormicAcid，调，抑制色谱柱残留硅羟基的解离，从感谢阅读感谢阅读就这样在analyticalHPLC的条件模式好了，下一步，转移到感谢阅读preparativeHPLC上。制备分离之前，在溶解样品的时候，又遇到感谢阅读麻烦了，该化合物在纯甲醇、纯水中溶解度都不怎么好，甲醇水混谢谢阅读合溶剂，还是不咋的——成了乳浊液了，跟牛奶似的，考虑到流动相谢谢阅读里添加了酸，而该化合物又是碱，于是