分子遗传学复制

关于分子遗传学复制第1页，课件共39页，创作于2023年2月第2页，课件共39页，创作于2023年2月滚环复制的电镜照片第3页，课件共39页，创作于2023年2月哪些DNA进行滚环复制?真核rDNA的扩增,F因子DNA的转移,λ裂解途经的复制,φX174,M13.G4等单链环状DNA噬菌体第二阶段复制都是进行滚环复制的.第4页，课件共39页，创作于2023年2月第5页，课件共39页，创作于2023年2月第6页，课件共39页，创作于2023年2月第7页，课件共39页，创作于2023年2月二.DNA末端起始复制线性双链DNA的复制有的是从一端开始的:腺病毒（Adenovirus）φ29DNAs脊髓灰质病毒（poliovirus)腺病毒DNA全长35937bp,线性双链，两端各有反向重复顺序103～162bp，两末端各有50bp为复制起点。其复制是以单链置换（stranddisplacement）形成一个大的茎环或叫平锅形结构来进行的。第8页，课件共39页，创作于2023年2月第9页，课件共39页，创作于2023年2月第10页，课件共39页，创作于2023年2月三.复制的终止1.E.coli的复制终止现已发现有两个终止区域（terE,D,A和terC,B），位于相遇点的另一侧100Kb处。每一终止顺序对某一方向移动的复制叉来说是特异的。ter顺序有一个23bp的区域，在体外可导致复制的终止，但其功能显示了一定的方向性。终止需要tus(terminusutilizationsubstance)基因的产物Tus(36kD)，Tus能识别ter保守顺序，并阻止复制叉继续前进。ter-Tus复合物可能通过抑制螺旋酶来实行终止第11页，课件共39页，创作于2023年2月第12页，课件共39页，创作于2023年2月第13页，课件共39页，创作于2023年2月第六节复制的过程一.半不连续复制第14页，课件共39页，创作于2023年2月E.colidUTPase，它能使dUTP变成dUMP，dUMP是不能作为DNA合成的底物，这样它就不再能加入DNA中。尿嘧啶N-糖苷酶（uracilN-glycosylase），它可以切断混合尿苷的糖苷键，形成无Pu和Py位点（apurinicorapyrimidinic，AP），再由AP内切酶在AP位点切出一个缺口，进一步进行切除修复。第15页，课件共39页，创作于2023年2月以下实验证实了这个解释：(1)在dut-突变体（dUTPase缺失）中冈崎片段比在dut+中为短。这是因为U掺入机会增加；(2)在ung-

（尿嘧啶N-糖苷酶缺失）突变体中，新合成的DNA约有一半由片段组成。(3)因为尿嘧啶N-糖苷酶缺失，不会切除U的糖苷链，也就不会出现AP位点，所以碱沉淀时不易断裂，从而保持了半不连续的原貌。在dut-,ung-双突变体中，结果和实验（2）相同，更进一步证实了此推测。第16页，课件共39页，创作于2023年2月第17页，课件共39页，创作于2023年2月第18页，课件共39页，创作于2023年2月第19页，课件共39页，创作于2023年2月第20页，课件共39页，创作于2023年2月第21页，课件共39页，创作于2023年2月第22页，课件共39页，创作于2023年2月第23页，课件共39页，创作于2023年2月第24页，课件共39页，创作于2023年2月酵母的自主复制区ARS(autonomouslyreplicationgsequence)发挥复制起点的功能，但是过量的。酵母染色体Ⅳ的着丝粒附近为ARS1序列ARS1分为A,B,C三个功能区,A,B起主要作用,C起次要作用。A区为15bp,其中11个保守，称ACS

(ARSconsensussequence)。有复制起始子的功能B区约为80bp,含B1,B2,B3三个功能区。B3是ABF1（ARS-bindingfactor1）结合区，第25页，课件共39页，创作于2023年2月酵母的复制第26页，课件共39页，创作于2023年2月ORC：由6个亚基组成相当于DnaA和λ的O蛋白，与A/B1结合，结合于游离的DNACdc6:相当于DnaC,及λ的P蛋白，使Mcm蛋白结合到复合体上。此对在Origin上起始复制是必须的。

Mcm:DnaB螺旋酶。即licensingfactorABF1（转录因子）结合于B3第27页，课件共39页，创作于2023年2月第28页，课件共39页，创作于2023年2月原核和真核生物复制体系的比较E.coli

λ

SV40/人酵母功能DnaAOT抗原ORC起始蛋白DnaBDnaBT抗原MCM解旋酶DnaCP?Cdc6装配因子DnaGDnaGPolα-引发酶Polα-引发酶引发酶

PolⅢ的α亚基PolδPolδ,Polε聚合酶PolⅢ的ε亚基PolδPolδ,Polε校正PolⅢ的亚基PCNAPCNA滑动钳复合体RF-CRF-C滑动钳装配器SSBRF-ARF-A单链结合蛋白第29页，课件共39页，创作于2023年2月第30页，课件共39页，创作于2023年2月第31页，课件共39页，创作于2023年2月Pvu

Bg1BamH1BampBR322TELTEL四膜虫rDNAARS

PvuBg1

BamH

连接

Pvu转化酵母

Pvu传几代酵母DNAPvuPvu

连接

转化酵母传几代

图11-56四膜虫与酵母TEL的拼接以及酵母细胞将其特有的TEL加到四膜虫的TEL上(参考Shampg,JandBlackburnetal:《Nature》1984,310:154-157)