兽医微生物学专家讲座

天津农学院兽医微生物学1999\12\280021计算机应用技术学习内容提要兽医微生物学第1页兽医微生物学

(多媒体教学课件)天津农学院动科系动物预防医学教研室制作/02/281999\12\280022计算机应用技术学习内容提要兽医微生物学第2页绪言

共六部分，介绍微生物与微生物学概念，微生物学发展简史，微生物学理论与技术成就及应用，兽医微生物学地位、任务与贡献。细菌总论

共七章，介绍细菌形态、结构、生理，消毒与灭菌，细菌生态、致病机理、遗传变异，细菌分类与命名等。免疫基础

共七章，介绍抗原抗体，免疫系统，抗感染免疫，变态反应，免疫调整，免疫技术及应用等。细菌各论

共十二章，介绍各属主要病原细菌形态、生化特征、致病性、微生物学诊疗和免疫防治等。真菌

共二章，介绍真菌分类、形态、生化及致病特征，真菌病诊疗与防治等。病毒

共十四章，介绍病毒形态、结构、繁殖、遗传、培养，病毒致病性。各科属主要病毒形态、生化及致病特征，微生物学诊疗和防治等。试验

共十多个，显微镜油镜使用，细菌形态及结构观察，细菌抹片制备及染色，培养基制备，细菌分离培养、生长表现观察、生化试验、药敏试验，沉淀反应和凝集反应，主要病原菌认识，真菌与病毒培养测定等。内容介绍1999\12\280023计算机应用技术学习内容提要兽医微生物学第3页第十五章

革兰氏阳性球菌第十六章肠杆菌科第十七章弧菌科第十八章巴氏杆菌科及相关属第十九章革兰氏阴性需氧杆菌第二十章革兰氏阴性无芽孢微需氧和厌氧菌第二十一章革兰氏阳性无芽孢杆菌第二十二章革兰氏阳性产芽孢杆菌第二十三章分支杆菌及相同属第二十四章螺旋体第二十五章霉形体第二十六章立克次体及衣原体第三篇细菌学各论1999\12\280024计算机应用技术学习内容提要兽医微生物学第4页第二十四章螺旋体第一节概述第二节疏螺旋体属第三节蛇形螺旋体属第四节密螺旋体属第五节细螺旋体属第三篇1999\12\280025计算机应用技术学习内容提要兽医微生物学第5页第一节

概述螺旋体是一类细长、柔软、弯曲呈螺旋状、能活泼运动原核单细胞微生物。它基本结构与细菌类似，细胞壁中有脂多糖和壁酸，胞浆内含核质，以二分裂繁殖。依靠位于胞壁和胞膜间轴丝屈曲和旋转使其运动，这与原虫类似。所以螺旋体是介于细菌和原虫之间一类微生物。螺旋体广泛存在于水生环境，也有许多分布在人和动物体内。大部分营自由腐生生活或共生，无致病性，只有一小部分可引发人和动物疾病。第24章1999\12\280026计算机应用技术学习内容提要兽医微生物学第6页1.形态与结构螺旋体细胞呈螺旋状圆柱形，含有多个完整螺旋。其大小极为悬殊，长可为5-250um，宽可为0.1-3um。一些可经过细菌滤器。细胞螺数、螺间及弧幅各不相同，在分类上有意义。轴丝螺旋体细胞中心为原生质柱，外有2-100根以上轴丝，又称轴鞭毛或内鞭毛，现亦简称为鞭毛，沿原生质柱长轴缠绕其上。轴丝夹在细胞壁外鞘和细胞膜之间。螺旋体经过轴丝而运动，主要有3种方式：①沿长轴旋转，快速前进；②细胞屈曲伸缩前进；③螺旋状或蛇状前进。第24章1999\12\280027计算机应用技术学习内容提要兽医微生物学第7页螺旋体含有不定形核，无芽孢，核酸兼有RNA和DNA，以二等分横分裂法繁殖。

染色特征都是革兰氏阴性，多数不易着色。姬姆萨氏染色效果很好，可染成红色或蓝色。蓝色多属腐生性螺旋体。惯用镀银染色法染色，使之变租而显黑褐色。也用印度墨汁或刚果红负染，螺旋体透明无色，背景衬有颜色，反差显著。以相差和暗视野显微镜观察螺旋体效果良好。能检验形体又可分辨运动方式，甚为惯用。第24章1999\12\280028计算机应用技术学习内容提要兽医微生物学第8页2.培养特征螺旋体培养有较为困难，多数需厌氧培养。但有些属种，尤其是细螺旋体(又称钩端螺旋体)培养并不难。个别致病性螺旋体可采取含血液、腹水或其它特殊成份培养基培养。有些螺旋体尚不能用人工培养基培养。3.分类螺旋体目，下分为两个科，即螺旋体科和细螺旋体科。细螺旋体科只有一个属，即细螺旋体属（钩端螺旋体属）。螺旋体科又由螺旋体属、脊螺旋体属、密螺旋体属、疏螺旋体属和蛇形螺旋体属五个属组成。其中与兽医相关主要有疏螺旋体属、密螺旋体属、蛇形螺旋体属和细螺旋体属。第24章1999\12\280029计算机应用技术学习内容提要兽医微生物学第9页第24章1999\12\2800210计算机应用技术学习内容提要兽医微生物学第10页

第二节疏螺旋体属本属组员细胞呈螺旋状，长3-20um，宽0.2-0.5um，每条菌体有3-10个不规则疏松螺旋，有15-20根轴丝。以螺旋状推进方式活泼运动。用姬姆萨氏染液着色良好。易培养，微需氧或厌氧。伯氏疏螺旋体是莱姆病(Lymedisease)病原体。莱姆病最早于1975年在美国莱姆镇发觉，故而得名，现己遍布全世界。此病由硬蜱为传输媒介，感染人和犬、牛、马等动物，致关节炎等各种疾病。第24章1999\12\2800211计算机应用技术学习内容提要兽医微生物学第11页1.生物学特征菌体细长，长约20-30um，直径约0.2um，有4-20个大而宽疏螺旋。其鞭毛缠绕着菌体，位于外膜和胞浆膜之间，称之为轴鞭毛。2.致病性伯氏疏螺旋体致人、犬、牛和马关节炎，被硬蜱叮咬部位呈圆环状疹块，之后表现为游走性关节炎，可见破行、关节肿胀，发烧及淋巴结肿大。硬蜱在吸吮感染动物血液之后，便可在多年内都含有传染性。啮齿动物是伯氏疏螺旋体天然贮主。第24章1999\12\2800212计算机应用技术学习内容提要兽医微生物学第12页3.微生物学检验蜱叮咬部附近皮肤、患病关节关节液可用于病原学检测。用暗视野显微镜或作姬姆萨染色等可观察到疏螺旋体。伯氏疏螺旋体培养困难，可用改良Kelley氏培养基分离培养，培养物每七天用暗视野显微镜检验。血清学诊疗可行。ELISA最为惯用。犬在感染4周后即可测出抗体，3个月后抗体达高峰，此时犬可连续感染。抗体滴度维持高水平最少18个月。PCR、限制性酶切及DNA杂交等分子生物学伎俩亦用于诊疗。第24章1999\12\2800213计算机应用技术学习内容提要兽医微生物学第13页

4.防治

强力霉素或阿莫西林可用于莱姆病治疗，但只能一定程度缓解病损，并不能完全毁灭伯氏疏螺旋体。在疫区可预防接种。有两种疫苗，一个是全菌灭活疫苗，有不良反应，效果不好。另一个亚单位疫苗，为纯化OspA。用它免疫犬可产生抗体，当蜱吸血时，伯氏疏螺旋体被抗体阻断，不能从蜱中肠向唾液腺移行，从而使蜱不再感染新吮血对象。第24章1999\12\2800214计算机应用技术学习内容提要兽医微生物学第14页第三节蛇形螺旋体属蛇形螺旋体属是一个新属，包含猪痢蛇形螺旋体和无害蛇形螺旋体。本属特征细胞呈疏松、规则螺旋形，长7-9um，宽0.3-0.4um。有8、9根轴丝，呈屈曲和蛇形运动或移位运动。有机营养。可在含10％胎犊、犊牛或兔血清酪蛋白胰酶消化物大豆胨汤(TSB)或脑心浸液汤(BHIB)，36-42℃厌氧生长。在TSB血液琼脂平板，38℃培养48-96h形成扁平、半透明菌落，大小0.5-3mm，可展现微弱或强β溶血。第24章1999\12\2800215计算机应用技术学习内容提要兽医微生物学第15页

猪痢蛇形螺旋体1.致病性

猪痢疾又称血痢、黑痢、出血性痢疾、粘膜出血性痢疾等，由猪痢蛇形螺旋体引发，最常发生于8-14周龄幼猪。主要症状是严重粘膜出血性下痢和快速减重。特征病变为大肠粘膜发生部液渗出性(卡他性)、出血性和坏死性炎症。经口传染，病传输快速，发病率较高(约75％)而致死率较低(5％-20％)。2.形态结构及染色特征本螺旋体形态结构与其属描述一致，菌体多为2-4个弯曲，两端尖锐。革兰氏阴性，姬姆萨氏和镀银法均能使其很好着色。第24章1999\12\2800216计算机应用技术学习内容提要兽医微生物学第16页3.培养特征

严格厌氧，普通厌氧环境不易培养成功，必须使用预先还原培养基，并置于含H2(或N2)和CO2(二者百分比为80：20)混合气体以及以冷钯为触媒环境中才能生长。对培养基要求苛刻，通常使用含10％胎牛(或犊牛或兔)血清或血液TSB或BHIB培养基。在TSB血液琼脂上，38℃48-96min可形成扁平、半透明、针尖状、强β溶血性菌落。4.抗原与免疫性猪痢疾密螺旋体有两种抗原成份：脂多糖、蛋白质（特异性）。该菌有8个血清型。自然发病猪康复后，可产生对应抗体，含有一定保护力。第24章1999\12\2800217计算机应用技术学习内容提要兽医微生物学第17页5.微生物学检验（1）直接镜检有以下3种方法。

染色镜检：以病猪新鲜粪便粘液，或病变结肠粘膜刮取物制成薄涂片，染色镜检。多用姬姆萨氏法染色法。也可用印度墨汁作负染或镀银染色法染色镜检。

相差或暗视野显微镜活体检验：待检样品与适量生理盐水混合后制成压滴标本片，用相差或暗视野显微镜下镜检。若每个高倍视野中见有2-3个或更多个蛇样运动较大螺旋体即可确诊。第24章1999\12\2800218计算机应用技术学习内容提要兽医微生物学第18页

染色组织切片检验：将采集病变肠组织先用10％甲醛缓冲液固定后切片，再用维多利亚蓝染色法染色。镜检时可见螺旋体大量存在组织表面及粘液囊腔内，有时数量多到堆积成网状。（2）分离培养：分离培养方法。

过滤培养法：将样品作5-10倍稀释，轻度离心，上清用0.8um和0.45um滤膜依次过滤。取滤液直接涂布接种于鲜血琼脂平板上，厌氧培养37-38℃培养3-6d，每隔2d检验1次，当观察到平板上出现β溶血现象时，即可挑取可疑菌落，作成悬滴或压滴标本，用暗视野显微镜检验。第24章1999\12\2800219计算机应用技术学习内容提要兽医微生物学第19页6.防治对猪痢当前尚无可靠或实用免疫制剂以供预防之用。普遍采取抗生素和化学药品控制此病，培育SPF猪，净化猪群是防治本病主要伎俩。第四节密螺旋体属(自学）

第五节细螺旋体属细螺旋体属组员是一大类纤细、螺旋致密，一端或两端弯曲呈钩状螺旋体，故常称钩端螺旋体，简称钩体。大部分营腐生生活，广泛分布于各种水生环境中，无致病性。一部分为寄生性和致病性螺旋体，可引发人和动物细螺旋体病。第24章1999\12\2800220计算机应用技术学习内容提要兽医微生物学第20页1.形态结构与染色特征呈纤细圆柱形，长6-20um，宽0.1-0.2um，螺旋弧度0.2-0.3um，最少有18个弯曲细密规则螺旋，菌体一端或两端可弯曲呈钩状。其运动形式多样，能翻转和屈曲运动，也可沿其长轴旋转而快速前进。细胞壁结构与革兰氏阴性杆菌相同。外膜位于原生质柱和轴丝外层，相当于细菌荚膜。

革兰氏染色阴性。镀银染色法和刚果红负染很好。用暗视野显微镜较易观察其形态和运动力。第24章1999\12\2800221计算机应用技术学习内容提要兽医微生物学第21页2.培养及生化特征需氧，对营养要求不高，较易人工培养。在含血清和蛋白胨培养基上生长良好。钩体一些菌株能产生溶血素。3.抵抗力钩体pH中性湿土和水中可存活数月，该病主要经水源传输。对热和酸碱环境抵抗弱，45℃30min，50℃10min，60℃10s即可致死。4℃冰箱中可存活1-2周，-70℃可保留2年多。对各种化学消毒剂和青霉素、金霉素、四环素等抗生素敏感性。4.抗原结构抗原分两种：表面抗原(P抗原)，为多糖蛋白复合物，含有型特异性。内部抗原(共同抗原，S抗原)，系类脂多糖复合物，含有属特异性。第24章1999\12\2800222计算机应用技术学习内容提要兽医微生物学第22页

5.毒力因子本病为动物源性疾病。毒力因子主要有：吸附物质、溶血素、内毒素样物质、细胞毒性因子。6.感染路径及其所致疾病

（1）传染源钩体可感染大部分哺乳动物和人。已从50各种动物检出钩体，其中鼠类和猪是钩体主要贮存宿主和传染起源，排菌期长。（2）感染路径

人和家畜经过直接或间接地接触污染源而被感染。路径：(1)损伤皮肤黏膜，最为常见；(2)口腔、咽喉头和肠道粘膜；(3)动物咬伤或吸血昆虫叮咬，引发感染；(4)经过交配或人工授精。第24章1999\12\2800223计算机应用技术学习内容提要兽医微生物学第23页（3）易感动物及症状

在家畜中以牛和羊对钩体易感性最高，其次为马、猪、犬、水牛和驴等，许多野生动物，尤其是鼠类易感。钩体病临床表现：急性病例主要症状为发烧、贫血、出血、黄疸、血红素尿及粘膜和皮肤坏死；亚急性病例可表现为肾炎、肝炎、脑膜炎及产后泌乳缺乏症；慢性病例则表现虹膜睫状体炎、流产、死产及不育或不孕。（4）钩体病病程

约连续7-8d钩体菌血症(前期发烧)阶段和连续2-3月或更长时间钩体菌尿期(后期无热)阶段。在前期阶段，钩体于血、肝、肾和脑脊髓液中，而后期于肾内长久繁殖，经尿排出。第24章1999\12\2800224计算机应用技术学习内容提要兽医微生物学第24页7.微生物学诊疗最终诊疗有赖于微生物学检验。检验病料：即发病7-8d内(菌血症、发烧期)可采集血、脑脊髓液，剖捡可取肝和肾；发病7-8d后(退热、菌尿症期)采集尿液，死后为肾。方法：（1）直接镜检可分2种方法：

暗视野活菌检验：将病料差速离心集菌压滴标本片镜检。如在暗视野中见有钧体菌经典形态与运动方式，即可确认为钩体。

染色镜检：多用改良镀银法和媒染法。前者使钩体呈深黑色或灰色。后者，钩体呈紫红色。姬姆萨染色片中钩体呈紫色。第24章1999\12\2800225计算机应用技术学习内容提要兽医微生物学第25页（2）分离培养

钩体培养基很多，惯用有柯氏培养基等培养基。病料接种后，置28-30℃温箱内培养，每5-7d观察钩体生长情况并取样镜检，连续四面(最多至3个月)末检出钩体者可作阴性处理。（3）动物接种试验可用于病料内钩体分离，又可作为菌株毒力测定。动物惯用体重150-200g幼龄豚鼠或50-60g金黄仓鼠。普通在接种后1-2周动物出现体温升高和体重减轻，此时即可剖检，取其肾和肝进行镜检和分离培养。主要病变为内脏出血和皮下出血、黄染