组织培养基本操作

《薯类种子种苗生产技术》组织培养基本操作主要内容一二洗涤技术灭菌技术三无菌操作一、洗涤技术（一）玻璃器皿洗涤新购置玻璃器皿1%稀HCl浸渍12h洗衣粉洗涤清水冲洗晾干备用已用过的玻璃器皿一、洗涤技术（二）塑料用品洗涤已用过的塑料器皿2%NaOH浸泡12h清水冲洗2%—5%盐酸浸泡30min清水冲洗蒸馏水冲洗晾干备用新的塑料器皿打开即用一、洗涤技术（三）金属用品洗涤热洗衣粉水洗净冲洗擦干配方成分弱液次强液强液常用配方重铬酸钾（g）浓硫酸（ml）蒸馏水（ml）501001000100200100060800200100200800清洁液配方二、灭菌技术（二）灭菌1.培养基灭菌：高温高压湿热灭菌法（1）压力在9.8×1010.8×104Pa（2）温度在121℃（3）灭菌20~30min2.玻璃器皿灭菌：蒸汽高压消毒灭菌、干热消毒灭菌。3.塑料器皿灭菌：多采用高压蒸汽消毒灭菌。4.金属用具灭菌：灼烧灭菌浸入95%酒精，后置于酒精火焰上灼烧，冷却后使用。饱和蒸汽压力与其对应的温度饱和蒸汽压力温度（℃）饱和蒸汽压力温度（℃）kg/cm21b/m2kg/cm21b/m20.00.1410.2810.4420.5630.7030.8440.98402468101214100103.6106.9109.8112.6115.2117.6119.91.0551.1251.2661.4061.5431.6811516182022243050121.0122.0124.1126.0127.8129.6134.5147.6二、灭菌技术（二）灭菌5.接种室灭菌空气消毒灭菌接种室超净工作台紫外灯照射70%—75%的酒精擦洗培养材料的接种紫外灯照射二、灭菌技术（二）灭菌6.外植体灭菌流水冲洗10—20min或更长时间70%—75%酒精中浸泡30s0.1%—0.2%氯化汞液中浸泡10min左右蒸馏水冲洗4—5次在10%的次氯酸钠、饱和漂白粉浸泡30min左右备用常用消毒剂消毒灭菌比较表消毒剂使用浓度（%）去除难易消毒时间（min）效果次氯酸钙次氯酸钠漂白粉溴水过氧化氢升汞酒精抗生素硝酸银9~102饱和溶液1~210~120.1~170~754~5（mg/L）1易易易易最易较难易中较难5~305~305~302~105~152~100.2~230~605~30很好很好很好很好好最好好较好好三、无菌操作实验员消毒实验室、无菌台灭菌实验器材的灭菌无菌接种消毒实验台卫生培养室培养三、无菌操作1.消毒，更换实验服、帽子与鞋子，进入接种室。2.打开超净工作台和无菌操作室的紫外灯，照射40min左右，后关闭。3.开启过滤室风机，使无菌风吹拂工作台面和四周的台壁。4.用70%~75%的酒精擦拭工作台和双手。5.用沾有70% ~75%酒精的纱布擦拭盛培养基的培养器皿，放进工作台。三、无菌操作6.把解剖刀、剪刀、镊子等器械浸泡在95%的酒精中，再在火焰上消毒，放在器械架上。7.在酒精灯火焰附近切割备用的接种材料。8.打开瓶口，用火焰烧瓶口，转动瓶口使瓶口各部分都烧到。9.取下接种器