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《种传病害细菌分离》目录CONTENTS一种传病害细菌分离一、种传病害细菌分离细菌的分离培养培养基：肉汁胨培养基（牛肉浸膏3g，蛋白胨5-10g，琼脂17-20g，水1000ml）划线分离法：种表消毒磨碎，无菌水将细菌溢出，接种环蘸取划线。将单个细菌分开，经培养后形成单菌落，获得纯菌株。平板稀释法：病原细菌数量大，稀释培养使病原细菌与杂菌分开，形成纯培养。培养皿4个，1ml无菌水，接种环搅匀，依次移入2、3、4皿，倒培养基（45℃）。一、种传病害细菌分离接种检验有时在植物发病部位发现或混杂在进境种子里的真菌，并不是引起该种病害的病原真菌，可能是由其他杂菌污染所造成的。拌种接种：种子和孢子拌匀浸种接种：菌丝段、孢子或细菌悬浮液花期接种：（花期侵入的病菌）小麦散黑穗病喷雾接种：细菌或悬浮液稀释，22-28℃保温针刺接种：需要伤口侵入的病原物剪叶接种：伤口侵入的细菌（水稻白叶枯病）摩擦接种：病毒，隔离条件下进行，金刚砂土壤接种，蘸根接种，根部切伤接种，涂抹法一、种传病害细菌分离（10）化学染色检验不同的化学品，对细菌、真菌、病毒等染色，鉴别有无病原体及其种类植物细菌性病害（革兰氏染色）步骤：切开病部，挤压挑取菌脓，结晶紫草酸胺液染色1分，碘液染色1分，95%的乙醇褪色30秒，番红染10秒，干燥后镜检。马铃薯环腐病，阳性，紫色，青枯病菌阴性，红色一、种传病害细菌分离一、种传病害细菌分离曲利苯蓝未被侵染被侵染（11）荧光反应检验植物细胞中含有各种核酸，在紫外线下能发生荧光，细菌、真菌、病毒等有荧光反应，并且它们比正常组织的荧光反应要强。凡感染环腐病的马铃薯块茎切面均呈现绿色的荧光，凡无病的薯块则呈现紫色荧光；而革兰氏阳性细菌为害的薯块都为黄色、蓝色或绿色。菜豆日烧病菌和菜豆细菌性疫病菌在浮白色或浅黄色豆粒上产生蓝白色荧光。注意：少数有病种子有时不发光，而健康种子可能会发较强光。一、种传病害细菌分离一、种传病害细菌分离（12）血清学检验血清学方法是病毒诊断和鉴定的基础方法。其基本原理是抗体与抗原之间的专化性结合。方法：酶联免疫吸附法、斑点免疫结合测定法、免疫扩散、免疫电泳、荧光免疫免疫胶体金技术。DirectELISAIndirectELISA（13）PCR检测聚合酶链式反应(Polymerasechainreaction,PCR)技术已广泛用于病毒、细菌、真菌、植原体、害虫和杂草等检测。方法：提取病原物的DNA，设计特异性引物，利用PCR技术进行相应真菌种类的鉴定。因其灵敏度高、特异性强，已经成为实验室对有害生物检疫的重要手段。一、种传病害细菌分离产地检验与室内检验的关系：（1）有些种子带病无明显症状，不能分离培养，实验室无法检验，需产地检验，尤其检疫性病害（2）产地检验主要靠肉眼，比较粗放（3）产地检验现场即可确定留种用的种子，但种子在

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