肝素的提取制药

生物制药工艺课程肝素药物的提取制药1、化学结构和性质

白色或灰白色粉末，无臭无味，有吸湿性，钠盐易溶于水，不溶乙醇、丙酮、二氧六环等有机溶剂。是一种含有硫酸基的酸性黏多糖，其分子具有由六糖或八糖重复单元组成的线状链状结构。2023/5/13生物制药工艺学——糖类药物3肝素生产工艺

三硫酸双糖单元二硫酸双糖单元2、酶解—树脂法

2023/5/13生物制药工艺学——糖类药物4肝素生产工艺

（2）工艺过程

①酶解

取100kg新鲜肠黏膜加苯酚0.2％。在搅拌下加入绞碎胰0.5％～1％，用40％氢氧化钠液调节pH8.5—9，升温至40～45℃，保温2～3h,pH8，再加5％粗食盐升温至90℃，用6M盐酸调节pH6.5，保温20min,以布袋过滤，得酶解滤液。

②吸附、洗涤、洗脱

取滤液冷至50℃以下，用6M氢氧化钠调节pH7,加入5kgD—254强碱性阴离子交换树脂，搅拌5h左右，交换完毕，弃去液体，用水、2M和1.2M氯化钠洗涤。用约树脂体积一半的5M氯化钠洗脱，后用约为树脂体积的1/2的3M氯化钠洗脱，合并洗脱液。

2023/5/13生物制药工艺学——糖类药物5生产工艺

（2）工艺过程

③沉淀、脱水、干燥

滤液加入活性炭和95％乙醇处理，冷处沉淀8～12h。弃去上清液，沉淀中加蒸馏水和4倍量95％乙醇，冷处放置6h，收集沉淀，用乙醇、丙酮脱水2次，得肝素钠粗制品。

④脱色、沉淀、干燥

10％的肝素钠溶液，以4％高锰酸钾进行氧化脱色。以滑石粉作助滤剂过滤，收集滤液。将滤液调节pH6.4，用0.9倍的95％乙醇置于冷处沉淀6h以上，收集沉淀，再用4倍量的95%乙醇，冷处放置6h以上、收集沉淀物。干燥得肝素钠精品。肠黏膜换算成总固体7％计，收率20000U/kg，最高效价141.6U/mg。

2023/5/13生物制药工艺学——糖类药物6生产工艺

3、盐解—树脂法

2023/5/13生物制药工艺学——糖类药物7生产工艺

4、CTAB（十六烷基三甲基溴化胺）提取法2023/5/13生物制药工艺学——糖类药物8生产工艺

5、以牛肺为原料的提取法2023/5/13生物制药工艺学——糖类药物9生产工艺

6、注解

①D—254为聚苯乙烯二乙烯苯三甲胺季铵型强碱性阴离子交换树脂，机械强度和耐磨性能差，易破碎，细碎粒易漂浮而流失。解决办法采用负压吸气气泡翻滚搅拌法，利用减压和虹吸将液体吸入或排出反应罐，使树脂始终在罐内，减少破碎和流失，提高收率。②肝素是聚阴离子(He-)，肝素·蛋白质用He-Pr+表示，为可溶性。酸性蛋白质，pI以6计，如果pH选择8.5—9，Pr-浓度比Pr+浓度大很多，则酸性蛋白与肝素的复合物完全可离解；若碱性蛋白质，pI为10，选择pH8.5—9不能促进蛋白与肝素复合物的离解。必须选择pH11．5—12，才能完全离解。2023/5/13生物制药工艺学——糖类药物10生产工艺

6、注解③洗脱肝素要控制盐的阳离子，其反应：

氯化钠的浓度越大，R+Cl—的浓度越小，有利于He-Na+的生成，宜用动态洗脱。因R+He-结合较牢，交换需要相当高的盐浓度，氯化钠常用2M、3M，能使He-近100％地洗脱下来。

2023/5/13生物制药工艺学——糖类药物11生产工艺

6、注解

④氧化作用能除去热原、脱色．配合调pH和加热，除去杂质，提高肝素的效价。有机杂质少时，氧化时间短，否则反之。由于高锰酸钾氧化作用较强，破坏肝素和增加K+的含量，故改用加入总量4％的过氧化氢，分两次加、好于单用高锰酸钾，不增加水溶液的新成分。1977年国内研究成功的过氧化氢—高锰酸钾组合氧化工艺，克服了单用高锰酸钾氧化破坏肝素的缺点。具体操作是先用低浓度的过氧化氢，在碱性介质中室温进行氧化，由于条件温和，可长时间放置。剩下难氧化的杂质，逐渐升温氧化，至80℃时，再加高锰酸钾最后氧化．即可完成。

2023/5/13生物制药工艺学