常用发酵产品配方和工艺

部分发酵产品配方和工艺

青霉素菌种：产黄青霉H一110；培养基：发酵培养基，一玉米浆，磷酸二氢钾，碳酸钙，麸质粉，葡萄糖。将长好的种子移入5m。自动发酵罐。发酵过程各参数控制：PH值6．0～6．5，空气流量6L／min，转速300r／min，培养温度25℃，单糖浓度46．8%，发酵全过程采用控制补料。从60小时带放后每4小时补加一次玉米浆，每次补入35ml直到放罐。发酵单位测定是运用高压液相色谱仪用外标法测定。

发酵培养：种子培养基移入发酵罐后(接种量为：1O%)，培养温度维持在26

螺旋霉素发酵参考环境：5～100吨罐，搅拌转速115转/分，罐压0.5公斤，最高通风量1：1/分，pH在7左右，培养基重要成分为？，发酵菌种采用螺旋霉素链霉菌，发酵周期130小时左右。根据螺旋霉素生物合成的研究结果，短链脂肪酸是合成螺旋霉素的前体,结果发现在发酵培养48h后添加O．5%浓度的乙醇，可以提高其发酵效价1O%左右(表2)加入豆油能较大幅度地提高螺旋霉素的发酵效价。在培养48h时加入较在基础料中加入更能提高螺旋霉素发酵效价，豆油的浓度以1%为好。

新霉素发酵参考环境：5～100吨罐，搅拌转速115转/分，罐压0.5公斤，最高通风量1：1/分，pH在7左右，培养基重要成分为热榨的黄豆饼粉，广东的酵母粉，福建的蛋白胨，发酵菌种采用？菌，发酵周期130小时左右。

推荐产品：DF6000K。在新霉素发酵过程中，需不断补充碳源(糖)和氮源(硫酸铵)。若一次补人的糖量太多且供气局限性时，碳源氧化不完全，会导致有机酸堆积，则pH值下降；当培养基中的蛋白质、氨基酸或其它含氮的有机物中碳被运用后，将释放出游离NH使pH值上升。同样，一次补人糖和硫酸铵量的多少，也会使发酵液的pH值发生波动。因此，为了使产生菌生命活动及合成新霉素的各种酶活力发挥得好，必须控制一定的补入量，以补充产生菌正常营养，调节发酵液pH值适合菌体的生长，发育，繁殖和新霉素的合成。在生产中控制pH值的最佳适宜范围在6．5～6．8之间。

利福霉素发酵参考环境：5～100吨罐，搅拌转速115转/分，罐压0.5公斤，最高通风量1：1/分，pH在7左右，培养基重要成分为葡萄糖10%,液化淀粉2%，黄豆饼粉1%，蛋白胨1%，鱼粉0.5%，各种无机盐适量，发酵菌种采用地中海诺卡氏菌，发酵周期130小时左右。

红霉素发酵参考环境：10～100吨罐，搅拌转速115转/分，最高通风量1：1/分，pH自然，发酵菌种采用红色链霉菌；培养基重要成分A:液化淀粉4%，葡萄糖4%，黄豆饼粉4%，正丙醇1%，无机盐适量B:黄豆饼粉4.0％、葡萄糖4.0％、淀粉4.0％、糊精2.0%、CaCO30.6％、(NH4)2SO40.15%、KH2PO40.02％、NaC10.2%、MgSO0.02%，28℃

洁霉素发酵参考环境：5～100吨罐，搅拌转速115转/分，最高通风量1：1/分，pH在7左右，发酵菌种采用链霉菌,发酵周期150小时。

培养基(%)黄豆饼粉2.5，玉米浆0.6，(NH)2SO4

0.5，NaNO30.4，NaC10.6，CaCO30.9，玉米淀粉2.5，葡萄糖3.0，KH2PO40.07。

发酵工艺FBC;培养温度：o～60h，31℃；6O～13Oh，30℃;130h至放罐31℃。

种子培养基淀粉20g/L，葡萄糖15g/L．豆饼粉25g/L，CSL30g/L，caco35．0g/L，pH7．0～7．2

1．3．3发酵培养基可溶性淀粉30g/I，葡萄糖100g/L，豆饼粉30g/L，(NH4)2SO48.0g/L，NaNO38.0g/L．KCI5.0g/L．CaCO39.0g/L，pH6．5～7．0

菌种

Lin一337：皖北药业股份有限公司选育、保存。

1．1．2发酵培养基

玉米淀粉，2.0％；葡萄糖，4.0％；黄豆饼粉，2.0％；去酚棉子饼粉，0.5％；玉米浆，0.6％；氯化钠，0.5％；碳酸钙，0.5％；硫酸铵，0.3％；磷酸二氢钾，0.02％；玉米油，0.06％；GP，0.03％发酵液初期粘度最大到130mPas

推荐产品：DF6000K。配合豆油使用。

洁霉素发酵参考环境：5～100吨罐，搅拌转速100转/分，通风量1：0.5/分，罐压0.7公斤，pH在6.5～7，培养基(%)黄豆饼粉2.5%，玉米浆0.6%，(NH)2SO4

0.5%，NaNO34%，NaC10.6%，CaCO30.9%，玉米淀粉2.5%，葡萄糖3.0%，KH2PO40.07%。培养温度：0～60h，31℃；6O～13Oh，30℃

环孢素发酵参考环境：5～100吨罐，搅拌转速140转/分，通风量1：0.7/分，罐压0.7公斤，发酵培养基组成：葡萄糖2.0%，面粉4.0%，干酪素0.6～1.2%，NaNO30．15%，KH2PO40.2%，KCl0.05%，MgSO4·7H2O0.005%，CaCO30.2%；pH6.5，发酵时间4天左右，温度25度左右。

通气和培养温度对CyA的生物合成量影响非常大，

纳他霉素发酵培养基：大豆蛋白胨l.8%，酵母粉0.45%，葡萄糖3.6%，pH7．5，2％接种量接种，进行纳他霉素发酵生产96h，菌体生物量为l2．65/L，最终产量为2．8g／L。发酵菌种：褐黄孢链霉菌。

庆大霉素发酵参考环境：5～100吨罐，搅拌转速140转/分，通风量1：1/分，罐压0.5公斤，培养基重要成分为淀粉4.0%，玉米粉2%，黄豆饼粉3.0%，蛋白胨0.3%，(NH4)2SO40.1%，CaCO30.5%，每罐外加CoCl28～10g/吨。PH7.5～8.0。发酵菌种采用庆大小单孢菌,发酵周期80小时。金霉素金色链霉菌经正交法筛选得到发酵培养基配方(％)：玉米淀粉8．5，花生粉1．5，黄豆粉2．5，淀粉酶(沈丘酶制剂厂生产，酶活力2023Iu／mL)O．004，氯化钠0．25，硫酸铵0．5，碳酸钙0．7，蛋白胨1．0，酵母粉0．2，硫酸镁0．025，豆油1．OmL／25mL培养基(见表4)。在温度29℃±0．5℃，半径小诺霉素

1．1菌种:棘孢小单孢(Micromonosporaechinospora)

1．2培养基

种子培养基：黄豆饼粉l5g，葡萄糖1g，玉米粉20g，鱼粉2g，淀粉40g，pH7．5，定容1L

发酵培养基：葡萄糖5g，淀粉40g，玉米粉15g，黄豆饼粉25g，蛋白胨2g，硫酸铵O.5g，pH7.2，定容1L

再生培养基：斜面培养基添加蔗糖68g，氯化镁10g，定容1L

P稳定液：见文献[2]。筛选出的MS一116菌株生理特性与出株有所不同，对其发酵条件进行研究，认为最适宜温度应控制在34℃，其对氧的需求量较大，应注意改善供氧状况；培养基中应使用热榨黄豆粉饼，浓度为3．0％；葡萄糖浓度为0，2％。

核黄素发酵参考环境：5～100吨罐，搅拌转速140转/分，通风量1：1/分，罐压0.5

公斤，培养基重要成分为葡萄糖30.0%，玉米浆2%，无机盐适量。发酵菌种采用细菌,

发酵周期40小时。

四环素发酵参考环境：5～100吨罐，搅拌转速140转/分，通风量1：0.7/分，罐压0.7公斤，培养基重要成分为液化淀粉，玉米浆，黄豆粉，KH2PO4，每罐外加二巯基苯并噻唑和NaBr。pH在6左右。

推荐产品：DF204K。

红曲红色素

菌种：Monascusruber6一X4(由宁夏瑞德公司提供)

培养基固态培养基各成分质量分数：可溶性淀粉5％，麦芽糖4％，蛋白胨2％，琼脂I．8％一2%。

液体发酵培养基种子培养基各成分质量浓度：豆粉20g/L，大米粉50g/L，KH2PO42．5g/L，NaNO3g/L，MgSO4·7H204g/L，调节pH值为4．5左右。液体发酵培养基各成分质量浓度：大米粉100g/·L，NaNO37g/L，调节pH值为3．5左右。

多粘菌素发酵参考环境：10～60吨罐，搅拌转速115转/分，通风量1：1/分，pH在7左右，发酵培养基重要成分为玉米粉、液化淀粉、尿素、玉米浆，CaCO3。发酵温度30度左右，周期32小时。在25m3

我国1958年才开始赤霉素的研究、生产和推广应用，并于1969年由于党的“九大召开及国庆20周年，故把赤霉素称之为九二O”．25nm’发酵罐工业化生产实验

2．1实验材料与方法

2．1．1菌种：G—l14

2．1．2实验地点：

2．1．3培养基

①种子培养基(w／w)：葡萄糖1．5,糊精1．0,花生粉1．5,MgSO4·7HzO0．1,KH2PO40．1,消泡剂0．2,自来水配制，自然pH值,6m3种子罐中投料3m3，实罐消毒121℃，30分钟，冷却至28℃待接种。

②发酵培养基(w／w)：玉米淀粉7．0,饴糖2．5；豆饼粉0．3,花生粉1．0,MgSO4·7H2O0．07,KH2PO40．14；消沫剂0．05，a一淀粉酶0.05，50m3发酵罐投料40m3。pH值自然，实罐消毒121"C，30分钟，冷却至28℃后接入种子培养液．

2，1．4发酵设备；种子罐6m3，二档搅拌．发酵罐体积50m3。，三档搅拌．流加罐用

另一种子罐代替．

2．1．5发酵条件

种子罐：培养温度28℃士I℃，通风量l：Iv／v，罐压0．4—0．5kg／cm2．

发酵罐：培养温度28士l℃，通风量l：0．7v／v，罐压0．1—0．15kg／cm2．

赤霉素发酵参考环境：10～60吨罐，搅拌转速115转/分，通风量1：1/分，培养温度大多采用29℃～32℃。培养基的起始pH值控制在5.5左右，而将发酵过程的pH值维持在3.5～4.5之间为宜。种子培养基：葡萄糖0.3g，蒸馏水lOOml。豆饼粉1.5g，淀粉1.Og，葡萄糖1.Og，KH2PO40.lg，(NH4)2SO40．05g，MgSO40.1g，自来水lOOml。

发酵培养基：豆饼粉0.9％．淀粉7.0％，葡萄糖1.0％，KH2PO40.15％，MgSO40.08％，

a-淀粉酶0.003％，pH5～5.5发酵周期130小时

阿维菌素：

种子培养基(g/L)：淀粉30，豆饼粉20，酵母粉2.0，CoCl2·6H200.0005,pH7．0～7．2。

发酵培养基(g／L)：淀粉50，玉米粉l0，酵母粉l0，豆饼粉10．CaCO32.0，CoCl2·6HaO

0．0005，pH7.0～7.2。

妥布霉素发酵培养基：黄豆饼粉2.5；葡萄糖1.O；玉米粉1.O；玉米淀粉1.5；(NH4)2SO40.5；鱼粉O.4；MgS040.6；油1.0；ZnSO40.05；CaCO30.6;温度37℃,发酵时间112h左右。发酵菌种采用黑暗链霉菌。

洛伐他汀培养基：淀粉，黄豆饼粉，葡萄糖，玉米浆，K2HPO4，(NH4)2S04，CaCO3，发酵菌种采用红曲菌株，M.ruber。发酵周期10天。

甾体激素氢化可的松菌种:蓝色犁头霉(As365)，培养基(%)葡萄糖1.O，酵母膏0.23，玉米浆1.5，硫酸铵0.5；pH值6.4～6.5；m1)，28℃培养24h，投入0.25%的RSA（发酵底物醋酯化合物：

曲酸发酵参考环境：5～100吨罐，搅拌转速100转/分，通风量1：0.2/分，罐压0.7公斤，pH在4左右，培养基重要成分为液化淀粉14%,各种无机盐适量，发酵菌种采用黄曲霉,发酵周期130小时。实验以豆腐渣、黄浆水为重要原料运用米曲霉发酵生产曲酸，对发酵生成曲酸所需添加的各种营养因素和发酵条件进行了研究。得出该菌运用豆渣的最佳发酵培养基为：豆渣80％、麸皮24％、酵母膏1．2％、MgSO4·7H2O0．16％，pH为自然；接种量为10％，每250mL三角瓶装量为50g，在30℃发酵培养，5～6d菌体生长量和曲酸产量最大。米曲霉运用黄浆水生产曲酸的最佳发酵培养基为：葡萄糖12％、酵母膏0．5％、MgSO4·7H2O0．05％、K2HPO40．05％、黄浆水100％，pH为6．0，接种量10％。每250mL三角瓶装量100mL在30℃转速为200r／min的摇床振荡发酵培养，5～6d菌体生长量和曲酸产量最大。对米曲霉沪酿3．042曲酸发酵工艺条件进行了研究，分析了碳源、氮源、pH、装液量对曲酸产酸量的影响，获得了最优摇瓶培养条件：10％蔗糖、1％蛋白胨、pH=2．5、装液量40mL(250mL三角瓶)，发酵温度30℃、摇瓶转速200r/min条件下达最高产酸量3340mg·L^-1。从土壤中分离出一株曲酸产量较高的米曲霉(Aspergillusoryzan)菌株，对该菌株的发酵条件进行了初步研究。结果表白，该菌株在淀粉8％、酵母膏0．2％、MgSO4·7H2O0．05％、K2HPO40.1％、pH6．0的培养基中，28℃恒温摇床据荡培养6d，摇瓶发酵液曲酸含量为41．2mg/mL。

F31012变株是以Aspergillusoryzae(米曲霉)2336经3次紫外诱变解决，采用快速筛选方法而获得的突变株，研究了F31012变株发酵工艺条件，通过正交实验得出该突变株最佳发酵培养基为：玉米淀粉10％，酵母膏0．2％，K2HPO40.15,MgSO4.7H2O0.05%,KCl0.05%,pH6.0.移种量为15％，每300ml三角瓶装量75ml，时间6天，发酵培养基最适温度为30℃

谷氨酸发酵参考环境：5～100吨罐，搅拌转速100转/分，通风量1：1/分，罐压0.7公斤，pH在7左右，培养基重要成分为葡萄糖13%，硫酸镁0.08%R磷酸二氢钾0.08%，糖蜜0.05%，氯化钾0.1%，发酵菌种采用谷氨酸棒杆菌,发酵周期30小时。

赖氨酸发酵参考环境：5～100吨罐，搅拌转速100转/分，通风量1：1/分，罐压0.7公斤，pH在7左右，培养基重要成分为葡萄糖14%，硫酸镁0.04%，硫酸铵2%，硫酸氢二钾0.1%，尿素0.4%，豆饼粉0.5%，发酵菌种采用谷氨酸棒杆菌,发酵周期35小时。种子培养基：葡萄糖1．5g，(NH4)2SO40．4g，MgSO4·7H2O40mg，玉米浆2．0g，尿素0．1g，CaCO33．0g，乙酸铵0.1g，K2HPO4’3H200.15g，盐酸豆饼水解液0.86mL，水100mL，pH7．2～7．4，115℃高压灭菌15min。

发酵培养基：葡萄糖15.0g，(NH4)2SO43.5g，CaCO34.0g，MgSO4*7H2O20mg，玉米浆

2.5g，乙酸铵0.9g，生物素20ug，K2HP04·3H2O0.15g，盐酸豆饼水解液1.6mL，水100mL，

pH7.2～7.4。115℃高压灭菌15min。

赤藓糖醇:在20％葡萄糖，O．5％酵母膏，pH6．0的发酵培养液中，于34℃发酵摇瓶6天，可产赤藓糖醇32mg/ml。

推荐产品：DF6000K。

在分批培养中，葡萄糖的开始浓度3O0g／L，赤藓糖醇的容量生产率最高=葡萄糖的浓度控制在225g／L，容量生产率最高，赤藓糖醇的生。迟缓时间缩短。补料分批培养的葡萄糖开始浓度是300g／L．控制的葡萄糖浓度是225g／L，，磷源是肌醇六磷酸(植酸)一在这样的补料分批培养中，400g／L葡萄糖，88小时的赤藓糖醇最后产量为192g／L,相称于容量生产率226g

碱性蛋白酶发酵菌种为芽孢杆菌(Bacillus)，37℃，培养48h，

1发酵培养基l：可溶性淀粉1％、蛋白胨0.5％、Na2HPO4*12H2O0.4％、KH2P040.03％、CaCl20.1％、pH中性、121℃灭菌25rnin。

2发酵培养基Il：玉米粉2％、豆饼粉3％、麸皮3％、Na2HPO4*12H2O0.4％、KH2P040.03％、ZnCl20.1％、pH8.0、121℃灭菌25min。

发酵培养基(1000mL)：黄豆饼粉50g，玉米粉50g，麸皮25g，KH2PO40．3g，Na2HPO40．4g，Na2CO3lg；自然pH，在36℃下通风培养，前期通风1：0．15，后期通风1：0．2，搅拌40h左右。

低温碱性蛋白酶：黄海黄杆菌

发酵培养基

(1)豆饼粉(水解液，加0．5%NaOH，121℃水解30min，冷却、过滤)4．5%、玉米浆(酶解液．购自华北制药厂)6%、Na2HPO40．4%、KH2PO40．03%、Na2CO，0．1%、MgSO40．02%、CaC120，2%、泡敌约0．5‰(视具体情况及时补加)，pH7，121℃灭菌30min。

(2)豆饼粉(水解液．加0．5NaOH，121℃水解30min，冷却、过滤)4.5%、葡萄糖1%、Na2HPO40.4%、

KH2PO40.03%、Na2CO30.1%、MgSO40.02%、CaC12

0．2%、泡敌约0.5‰(视具体情况及时补加)，pH7。121℃灭菌30min

分批发酵动力学实验

使用瑞士Bioengineering公司NLF22型自动控制发酵罐进行分批发酵。发酵罐容积20L．两层六平直叶搅拌，双挡板。采用1．2．3节(1)培养基，装料系数0．65，接种量4%，培养温度18℃，以5mol／LNaOH液调节pH7左右，通气量1：1、搅拌速度300～500r／min，控制溶氧在35%～45%之间。

补料分批发酵实验

使用瑞士Bioengineerig公司NLF22型自动控制发酵罐进行补料分批发酵。发酵罐容积2OL，两层六平直叶搅拌，双挡板。采用1．2．3节(2)培养基，装料系数0．4，接种量4%，培养温度18℃，以5mol／LNaOH液调节pH7左右，通气量1：1、搅拌速度300～500r／min，控制溶氧在35～45之间。当细胞进入对数生长期后以60%葡萄糖补料，控制底物浓度并及时取样测定糖浓度、细胞浓度及总酶活力。

弹性蛋白酶发酵培养基酪蛋白胨3%，葡萄糖4%，玉米提取液0.2%，K2HPO40.1%，MgSO*7H2O0.01%，pH7.0．发酵菌种为芽孢杆菌，发酵培养24h．

对黑曲霉黄色变株A一2580产耐温酸性蛋白酶的发酵条件进行优化，由实验结果得如下结论：

(1)麸皮和豆饼粉分别是该菌发酵产生酸性蛋白酶的良好碳源和氮源．(2)通过正交实验优化培养基，拟定其最适产酶培养基为(g／L)：麸皮21.6、豆饼粉48.4、NHC12.0、KH2PO0.8．(3)培养基起始pH为4～5，接种量30ml