第三章原料的预处理

第三章目标产物原材料的预处理第一节生物材料靶部位的预处理生物体内的生化成分包括动物、植物及微生物在新陈代谢时所产生的蛋白质、多肽、氨基酸、核酸、多糖、脂类、脂肪酸以及各种初生代谢物和次生代谢物等，这些物质与生物学、化学、医学、食品科学等学科的发展息息相关，并促进化学工业、食品工业等行业的快速发展。生物材料的选择与培养、生物反应液的澄清与过滤、细胞的破碎与TP的提取、初级分离等预处理工作是生化成分有效分离的前提与基础，直接涉及分离纯化的时效性。一、生物材料的准备（一）生物材料的选取与要求对于糖、脂、蛋白质、核酸、酶等生化成分，动物、植物和微生物都可以作为提取和制备的原料，所选用的材料主要根据实验的TP来确定。总体来说，主要遵循的原则为：选择有效成分含量高的新鲜材料；来源丰富易得；制造工艺简单易行；成本比较低；综合利用价值高，经济效益好等。1.选择有效成分含量(1)生物品种：根据TP的分布，选择富含有效成分的生物制品是选材的关键。(2)合适的组织器官：如免疫球蛋白从血液或富含血液的胎盘组织中提取；制备胃蛋白酶只能选用胃为材料等。(3)生物的生长期：生物的生长期对有效成分的含量影响很大。2.杂质情况

难于分离的杂质会增加工艺的复杂性，严重影响回收率、质量和经济效益。选材时，应避免与TP性质相似的杂质对纯化过程的干扰。如胰脏中含有性质较为相近的磷酸单酯酶和磷酸二酯酶，两者难于分开，因此一般不选用胰脏为原料制备磷酸单酯酶，而改用前列腺为原料，因为它不含有磷酸二酯酶，操作简单易行。3.来源

选用来源丰富的材料，尽量不与其他产品争原料。最好能一物多用，综合利用。例如，健康男性的尿液可以生产尿激酶、激肽释放酶、蛋白酶抑制剂、睡眠因子等；用猪心生产细胞色素c和辅酶Q12；用胰脏制备胰岛素和胰酶、胰岛素和胰高血糖素、弹性蛋白酶和激肽释放酶等。（二）生物材料的采集与保存生物材料保存的主要方法有：速冻、冻干、有机溶剂脱水，制成丙酮粉，浸存于甘油和丙酮中等

1.动物材料利用动物作为原料来提取所需物质，同一种物质在不同的生物体中或同一生物体的不同组识中含量差异很大。而且纯化的难易程度也可能差异较大，所以根据需要，合理取材十分重要。2.植物材料以植物为原料作为提取物，要视植物材料采收是否具有代表性。如从大田或试验田以及实金器皿中收取植物材料作为原始样品，再按原始样品种类（例如植物的根、茎、叶、花、果实、种子等）分别选出平均样品，然后根据目的要求和样品种类特征，采用适当的方法从中选出供提取的材料，同时还要注意植物的季节性。对于药用植物要求更高。3.微生物材料用微生物作为原料来提取所需物需满足以下要求：①不是致病菌，不产生毒素，要经过毒理学试验；②不易突变退化，不易感染噬菌体；③产量高；④能利用廉价原料，发酵周期短，易于培养；⑤注意生长期，在微生物的对数生长期，酶、蛋白质、核酸的含量都较高。二、生物材料靶部位的预处理（一）动物材料的预处理：对于动物组织，必须选择有效成分含量丰富的脏器、组织为原料，并先进行绞碎、匀浆、去脂肪、去皮筋等处理。（二）植物样品的预处理

1.种子样品的处理：

首先去除杂质，后进行研磨、粉碎，过80-100目筛，混合均匀保存，贴上注有采样地点、特性、日期和采样人等内容的标签，若长期保存还要用蜡封，在容器中放入一点樟脑或对位二氯甲苯。

2根、茎、叶、果实样品的处理：对于刚采回的新鲜样品，一般要经过净化、杀青、烘干或风干一系列前处理。①净化：从产地采回的新鲜样品常常沾有泥土等杂质，应用柔软湿布擦干净，勿用水冲洗（大量样品的提取除外）；②杀青：为使样品的化学成分不发生转变或损耗，需及时中止样品中酶的活性，将样品在105℃的烘箱中杀青15-20min；③烘干：样品经过杀青之后，可自然风干，也可立即降低烘箱温度，维持在70-80℃直到样品烘干为止，一般8-12h。（三）微生物样品的预处理随着科学技术的发展，大多数自然界存在的有机物都可以通过微生物发酵获得，尤其是蛋白质、酶、核酸等物质。因为微生物具有种类多、繁殖快、容易培养、代谢能力强等特点，若从微生物发酵液中提取TP，第一步就是对发酵液进行预处理，以改变发酵液的物理性质，提高从悬浮液中分离固形物的速度，提高固形物分离器的效率；尽可能使产物转入处理后的某一项中（多数是液相）；取出发酵液中部分杂质，以利于后续各步骤的操作。第二节生物反应液的预处理生物反应液中的杂质很多，其中有些杂质不仅影响提取物的质量和提取率，同时对后续的分离、提取和精制有较大影响。一、无机离子的去除发酵液中的无机离子主要有Ca2+、Mg2+和Fe2+等。Ca2+－－草酸钠Mg2+－－三聚磷酸钠Fe2+－－黄血盐二、条杂蛋愚白质黄的去鸭除（一探）沉浪淀法痒－蛋白夜质是撞两性杠电解绒质，受它的混稳定茎性与如所带愤的电摄荷有炒关。焦大多扒数蛋练白质喂的等懒电点床都在其酸性丝式范围摆内(p车H4瓣.卸0-居5.岛5棉)，但蚂是仅径靠调陆节pH还不尘能使瓣大部饿分蛋那白质套沉淀挖，必陵须与录其他快方法案共用优。（二盼）变第性法悼－变只性蛋恢白质吉的溶雹解度彩较小止，容悬易形锡成沉呀淀而谨除去乳。蛋和白质齐具有溉热敏史感性愈，一敌般在70叫-8架0℃发臭生不姨可逆裕变性糖，有犹的甚大至在50℃就颠会变示性。（三百）凝宗聚和轿絮凝要从夹出发预酶液露中获丧得澄睛清酶背液就真需要葱过滤朝或离扁心，木为了普加快穿过滤丝式速度杆，提解高分画离效殖果，侄出发耗酶液梦需要乞通过昌凝聚鬼和絮肤凝技猪术处数理，辱改变休细胞钟、细遍胞碎惊片和痕蛋白秩质等晶胶体润粒子丸的分次散状恰态，钥使其陡凝结浆成较筐大颗给粒。凝聚(a窗gg潮lo遇me嫁ra辣ti前on伶)指在刮电解辣质作携用下遵，由胡于胶氏粒之娘间双竭电层困排斥恐电位排的降歉低，蓝而使之胶体滤体系群不稳管定，芒胶体盗粒子凑间因锄相互钉碰撞晨而产竿生凝汁聚的万现象测。絮凝(f帐lo躬cc遭ul箩at辜io跨n)则是座指在脖某些呀高分谨子絮料凝剂分（通途常为夺含有意极性态官能裳团的骆聚合舍物）乌的架毯桥作讨用下名，将扯胶体涨粒子朴交联姿成网役，形恳成10摆mm大小著的絮搜凝团捡的过宪程。聚丙脖烯酰所胺类至衍生慈物、给聚丙弓烯酸骑类阴倒离子疤絮凝士剂（四室）吸耽附法串－利拍用某慈些吸遭附剂覆对蛋蔑白质慈的吸过附作屠用，税也可蜻以除赠去杂逮蛋白努质。绿例如暴，在印枯草缠芽抱逃杆菌登发酵狸中，搅常常目加入央氯化艰钙和财磷酸逃氢二臂钠，层两者节本身疏生成间庞大雕的凝刷胶，奇把蛋垒白质恰、菌滤体和腿其他啄不溶尊性离喇子吸北附并守包裹馋在其势中而侍沉淀抬出来当。三、加色素握及其齿他物垒质的乳去除发酵鬼液中用的色碑素可纸能是祥微生术物生葱长代裙谢过程程分璃泌的头，也骆可能鼓是培居养基秧带来凯的，句色素摩物质全化学区性质识的多未样性榆增加协了脱榜色的市难度魔。工借业上产应用饭的价氏廉而阵有效睡的脱扬色剂烂是活莫性炭呀。活面性炭排脱色钩的机恩制是义吸附录，它岁既能痒吸附嫁色素谷，也款能吸匆附部重分酶爆。第三饺节发雨酵液念的澄麻清与慌过滤微生裹物发隐酵液参中除捕了酶殖和其诊他代忠谢产柳物外纲，还摔存在钩大量循的菌棉体和龟培养译基残滑渣，会如不接经过采固液耻分离晶，而委将其舰中的陡菌体辱和残兼渣全帜部包灭括在彼酶制款剂之幅中，省这样根根本顷就谈旺不上内任何叨程度煮的纯顾化。型若用品于食州品工谈业，态不仅串会影宗响食棕品风粱味，追而且隔影响拾食品愚安全棚，损掉害人兴体健绞康。固液突分离晃的主凉要方挺法是滚离心食分离损和过分滤，龙对微蹲生物蚀酶发哄酵液直进行驼的固岛液分帆离，遍国内押外常株用的鼻设备凶是转留鼓式糟真空肌吸滤区机、咳离心怠沉降群分离六机和韵板框絮压滤世机。一、弯影响效发酵还液过厌滤的衣因素发酵筑液的拉过滤朗速度拥与菌忽种、算各种来发酵执条件扎等因凶素有的关。充菌种柔、培且养基葬、发织酵时去间。二、忠过滤树技术设的种它类1.根据工过滤棍介质恨截留浮的物薪质颗蔑粒大瞧小，谜过滤尘可分妙为粗输滤、雕微滤怜、超缓滤和罪反渗裤透四沾大类帜。过真滤介望质有碎多种参，常植用的它有滤桐纸、利滤布价、纤尊维、讽多孔毕陶瓷导和各堂种高驴分子搁膜等柳。2.根据狭过滤既机制刚的不牧同，心过滤矮可以浅分为在澄清蛋和滤产饼两毫种。0.前1g例/1到00眠mL3.此外忙，根总据过俱滤对祝产生捞推动岛力的栋条件季不同黄，粗祝滤又季可分竭为常跟压过婚滤、泥离心获过滤桨、加趁压过际滤和纵减压脊过滤蒜四种痰。三、取过滤皱性能睁优化翠的途粗径在生卵产中挖常常浇会遇师到难袭以过车滤的席发酵惑液，装因此宇需要质通过伶改善昨过滤秘性能氧来提携高过忙滤速系度。铅除了受采用虑絮凝筋和凝移聚等商方法败外，搂还可绵以采绝用稀稍释、集加热讨等方剖法降帐低发登酵液连的黏那度，喇或通秒过加与入助摘滤剂它、酶纽奉降解饲等方没法，找也可再以改艘善发尽酵液叉的过悠滤性单能。助滤陈剂是含一种窃不可母压缩梯的多洁孔微锤粒，套它能际使滤珠饼疏女松，椅从而顾提高飘滤速忆。硅辩藻土讽、纤分维素男、石播棉粉什、珍扭珠岩月等。使用叮助滤坑剂的练方法兼有两趟种：辱①在茧过滤锦介质捡表面争铺一凡层助扇滤剂屡；②辉把助抽滤剂锅加到杠发酵印液中淘。非TP之间隶的反痒应第四扒节细慕胞破白碎与滑靶物怎质初刺步分蹦离一、真细胞牺破碎生物趋体内培的生逃化成崖分种言类繁碑多，生存在湾于不虹同部竿位。要如青伶霉素兄酰化府酶、版碱性混磷酸析酶、脉乙醇劫脱氢加酶等茎，必依须在冰分离络纯化药前先蓬将细完胞破订碎，拒使细度胞内星产物耳释放免到液唉相中昼，才渠能进策行提雷纯。不同挂的实孙验规套模、洞实验伍材料束和实雾验要租求，腰使用会的破伸碎方诱法和产条件野也不结同。抽破碎得组织滔细胞哪的方冲法有摔很多温，依某照原塘理分碧为机休械破予碎法况、物民理破敢碎法中、化仗学破疤碎法舒和酶档学破迈碎法郊四类趟。（一饲）机脆械破唇碎法通过根机械票运动候所产据生的谨剪切伤力使参细胞季破碎筛的方仰法称旦为机秘械破挠碎法幸。机煌械法搬的处弦理量坟大，环组织着细胞宪破碎挂速度屠较快劣；易友因发伶热，带导致美样品雹中活瓶性物累质的转局部蕉变化粱。1.组织康捣碎胆机破鸭碎法2.研磨贪破碎灾法3.匀浆员破碎乒法－咳高速认匀浆贝器（二顺）物沉理破删碎法利用体温度役、压缴力、衣超声勉波和横渗透爪压等驶各种没物理合因素妥的作财用，访使组领织细基胞破右碎的核方法默，称规为物壤理破缴碎法导。物踢理破匙碎法戴多用及于微腔生物祸细胞乡丰的破扭碎。吗常用羊的物年理破率碎法汗有反手复冻饶融法记、压维力差躲破碎拾法、资超声险波和策微波吗破碎睬法等促。1.反复海冻融干法反复迁冻融尺法是该一种颗利用招温度耕的变播化，容通过剂细胞边的热乔胀冷斩缩作秋用来枕破碎战细胞长的物吧理方烟法。烛生物战组织披经冷灾冻后府，一雀方面耕细胞勉膜的善疏水应键破即裂，袄细胞睬的亲考水性赞增加疫；另倾一方螺面细红胞结律成冰叶晶，罚细胞棉内外除溶液兵浓度简变化役，引堡起细杠胞突混然膨迹胀而限破裂咏。2.干燥竹法可采天用多队种方盘法使闷细胞捏干燥屯，如缓空气踩干燥蒙法、鼻真空名干燥形法、洒喷雾鸽干燥兰法和远冷冻梯干燥率法等捆。干晓燥法辆使细核胞壁予膜间键的结盯合水么丧失痛，细划胞渗半透压鼓改变阶。当完用丙布酮、现丁醇奖或缓辱冲液州等对远干燥印细胞斤进行朝处理逼时，短细胞见内物辩质就光很容可易被框抽提驴出来典。空躲气干愈燥法快适用钱于酵桌母，玻真空籍干燥慨法适仍用于绕细菌观，冷崭冻法摆适用口于不猛稳定键的酶页。3．压模力差愁破碎灯法通过升压力袭的突接然变告化，协使细塌胞破洁碎的田方法蒜称为雪压力胃差破败碎法剖。常糟用的砌方法唱有高忌压冲免击、兰突然设降压幅及渗珠透压华变化坏等方慨法。（1)高压廊冲击铺法是霸在结连实的币容器蜘中装拉入细夫胞和郊冰晶割、石外英砂栽等混季合物怨，然辨后用溜活塞全或冲晶击锤兵施以横高压粘冲击佣，压栗力可尚达50～50庙0占MP室a,从而蒸使细报胞破孩碎。(2堪)突然顾降压青法又错称为稀爆炸折式降晓压法纤。该倒方法竭是将岗细胞牙悬浮之液装地入高历压容颗器，核通入益氮气年或二条氧化赌碳，留加压5～50连M议Pa，振杨荡几汁分钟净，使授气体湾扩散咸到细意胞内亩，然汗后骤衰然排景出气久体，连使压锣力骤盖降至脚常压窄，导核致细气胞迅禁速膨拣胀而宽破碎筐。(3捐)渗透仍压破皂碎法板是一朴种较侧温和那的细证胞破纹碎法之。将细已胞放迈在高淋渗透蹄压的多介质页中（邀如一水定浓剧度的励甘油言或蔗具糖溶链液）裹，达触到平乡丰衡后浊，介木质被呢突然塔稀释喝，或絮者转欠入渗熊透压泽低的筑缓冲逆液或蚁纯水富中，欣由于吸渗透枣压的赔突然安变化床，水旬迅速龟进入炸细胞截内，狐引起势细胞纤溶胀六而破下裂。4．改余进高香压法改进蠢高压束法（X－pr老es天s法）采是将粘浓缩气的菌感体悬夜浮液阿冷却棉至－30～－25℃形吵成冰幅晶，晃利用50桥0喷Mp耗a以上泡的高芒压冲资击，缩慧将冷轧冻细机胞从朽高压旬阀小简孔中浆挤出束。细孤胞由技于冰榨晶的财磨损粘变脆剥而破否碎。督该方啦法的滔细胞葱破碎栗率高唐，碎消片的诸粉碎气程度窃低，芬活性盯的保廊留率版高，蹦但是置不适庙用于昨提取插对冷梯冻－妄融解犹敏感粱的酶寨。5．超厦声波钥破碎滴法通过丸超声鸟波使寇细胞晚膜产计生空丛穴的垂作用销而使唐细胞暮破碎谎。超愧声波奸的频赶率对汪细胞衬破碎哪的效僵果没册有显奴著影幅响，枣通常沉采用伏的频穗率是15～25泉k恒Hz，所黄破碎扩细胞币的程闭度除痒与输漂出功果率和梅破碎炼时间午密切蚂相关钓外，溉还受散细胞乒浓度假、溶献液黏渣度、pH、温宰度以颈及离糕子强标度等悼因素舌的影衡响，称使用俭时需男根据撇细胞糟的种由类和剩酶的姓特性抵而加象以选弃择。6.微波阔破碎众法微波肢破碎钉细胞存专利眼技术航是基眉于微预波加狂热的抢选择椅性、艳瞬时季性和演高效谣性，国控制追适宜药的微掠波条蜻件而绩实现侧细胞灶破碎脾。其术原理槽是将悦含水字分的敲微生拴物菌岂体及凝植物磨组织观置于帝一定岸强度枝的微旋波场膏中处磁理，促使细娘胞受桃热，秤水分肤汽化虫，内箭压增搞大而芽导致厘细胞写破碎辟。（三繁）化轨学破琴碎法某些瓦化学芝试剂墓，如钓有机迅溶剂购、变志性剂车、表瓣面活摇性剂田、抗愈生素电、金快属螯童合剂榴等，恒可以宗改变裂细胞章壁或涌细胞返膜的偷通透蜻性（梳渗透悉性）洪，从亭而使幸胞内我物质从有选利择地突渗透楚出来宅，这阿种处权理方搜法称盐为化跌学渗庆透法园或化便学破糊碎法哲。常颠用的繁化学倚试剂府是有阴机溶费剂和锹表面井活性除剂。（四热）酶手学破菌碎法逐（即典生物魂学法继）通过孟细胞县本身罢的酶伐系或使外加父酶制签剂的篇催化敏作用耍，使迁细胞希外层榨结构溉受到旱破坏稍，而巩达到丧破碎大细胞滨的方违法称懒为酶丑学破霜碎法谢，或绵称为美酶促林破碎摊法。丝式这是涉一种胁应用鸣较广振泛的利方法股，其蹦原理待是利侍用酶糕反应欢分解撇破坏译细胞在壁组按分间港的特欠殊化绒学键及，从障而达晶到破盛碎细妈胞的印目的轧。酶赵溶法州可分倒为外青加酶铁法和姿自溶院法两讨种。1.外加投酶法外加灿酶法屡就是形根据盆细胞旁壁的情结构炼和组债成特厕点，泛选用趁适当浙的酶抖，破孝坏细蜂胞壁珠，并打在低启渗透列压的资溶液捕中使揪细胞死破裂崇。其啦中溶则菌酶(复ly跑so种zy进me访)的应北用最清广，鞋能专冲一地园分解眼细胞刷壁上怪肽聚归糖蛋睡白分垄子的β－1，4－糖我苷键，主始要对停象为范革兰舱氏阳竖性细倦菌。去该法谎的优拨点在戏于专淡一性威强，概条件习温和故，但折是费哑用较纷贵，缘瑞一般涛只适棍用于斧小规王模研衣究。2.自溶萌法自溶邪法(a辫ut久ol扭ys棕is其)是一鹿种特戏殊的羊酶溶种方式闸，所谅需的芝溶胞膏酶由脑生物喂细胞岩自身娱产生盏。当貌细胞正在一援定的pH和适础宜的戴温度摩条件折下保唱温一掏段时唇间后天，即划可通带过细疼胞自领身存盘在的聚酶系诊将细核胞破皮坏，截使细旱胞内浇物质费释出爪，其摘效果刻取决肉于自剖溶条掌件。二、TP的选贷择性逆释放细胞微破碎裳的目毁的是捷要得缎到一幻玉种或冬多种TP。因醋细胞殊内存香在着唯许多拿生物拔物质旱，有仿的放驶矢地礼选择碌性释除放TP拨,而使赶其他股物质史尽量洋少的误释放墓出来绑就显炉得十检分重喜要。皆如利洞用化香学渗浮透法隙选择贞性释缓放TP（图10皮-2）。选择殊性释何放TP的一煮般原筝则如绕下：(1糕)仅需里破坏部或破乐碎TP存在毯的靶词位点稼。当TP存在待于细美胞膜损附近模时，剃可采承用酶地学破宅碎法辨、反筋复溶甲冻法表等较战温和势的方制法；骂当TP存在动于细垦胞质泉内时这，则优需采夹用较迷为强树烈的课机械撞破碎填法。(2策)选择纷性溶袋解TP。当TP与细摄胞膜阿或细贱胞壁长结合仰时，转一方慨面调妖整溶情液的主离子惧强度缎、pH或添辣加表宴面活豪性剂笔、螯刻合剂碧等与TP有亲榨和性伯的试斤剂，士使TP溶解摊释放术；另驾一方律面注旋意溶区液的尤性质预，使召其他杀杂质抖不易幻玉释放绩。三、TP的提帅取提取弯是指咸在一攻定条按件下异，用狠适当通的溶羽剂处经理原你料，蜜并从取原材朱料中勇把有孤效成罢分分覆离出介来的卷过程宰。经郑过预宪处理材和细潜胞破控碎的诵原材磨料，卵可用薄缓冲治液、窗稀酸凤、稀涛碱或垄有机皇溶剂急等抽包提有葡效成野分，椒甚至单还可稿以用津蒸馏北水直费接抽递提。理想耐的抽母提溶欺液一虹般应春具备断如下崇特点惰：对板有效遵成分平溶解装度大假而破佳坏性脚小；堡对杂坚质不兵溶解润或溶爷解度朽很小辰；来炸源广翁泛、涉价格设低廉应、操制作安位全等晚。抽拜提的俭原则隐是“打少量税多次掘”，锈即对怨于等若量的夫用于勺抽提崭的溶豆液，绒分多坛次抽支提比君一次掘抽提美效果妄要好秒。四、TP的初非级分片离TP的初硬级分咐离是响指清膀除大拜量非TP。常湿用的岂方法羡主要脱有沉趣淀法炸、超瓜滤法怖和透帆析法格等。（一短）沉丘淀法沉淀称法也尿称溶费解度扁法，仙其纯炉化生名物成昏分的滤基本贷原理勉是：颂根据调各种得物质刃的结气构差出异，或如蛋顺白质否分子漏表面头疏水谋集团夕和亲另水集匙团之贯间比唇例的药差异台等，抬来改校变溶醒液的pH、极伪性、吃离子错强度灯和金俱属离旬子等烤，使属抽提飘液中烫有效历成分糕的溶毛解度务发生袖改变德，从词而分枝离出梨有效潜成分叨。（二汪）超冬滤法超滤惧法是邻通过劲在溶夫液的匪表面模施加日一定耀的压势力，管并通驳过一捆种特慢别的夸薄膜攀对溶叙液中惨各种堪溶质料分子夏进行棵选择刺性过萌滤的激纯化述方法师。在搂一定届压力担下，职溶液福中的秧溶剂霸和小浆分子皂可透睛过选身择性内薄膜敏，而闭大分排子则慌受阻掀而被董截留制。（三谅）透雅析法透析略法是爱指将构待处暴理的袋溶液浸放于妖具有飞半透猴膜性阻质的钓玻璃屠纸袋姑中，滋然后惠将纸贼袋放乔在水趣中或妄适当旦低离碍子强须度的历缓冲躬液中言，无锄机盐剪及一青些小务分子脆的代杠谢产离物，拆由于朝扩散罗作用浊通过铲半透蛛膜而蔬被去夺除,T览P则仍托然保仁留在坑袋中田。五、美预处龟理应牢用范育例（一棍）从绕乳牛宴胸腺猫中提羞取胸摩腺素从乳皮牛胸证腺中斤提取糊胸腺破素的富基本祝过程拉是：帜对所蜘选取锈的新悄鲜、箭健康望乳牛唯胸部胳的胸调腺去悲脂肪罪、去糊结缔鹅组织删和去考血污漠后，糠用无厘菌水狐洗涤驾，经堵－20℃冷扔冻保指存，丸剪碎福，加率灭菌谎生理薄盐水乖，匀滴浆，另再于大－20℃反屈复冻气融，办用HC失I调节pH，室叮温抽用提并振离心难，取孤上清年液，晓调pH至中怒性，凳置80℃水容浴保蹈温20营m载in，然史后骤淹冷离托心，品收集腰上清轮液，倦获粗命提液死。最戒后采驻用超旨滤膜隶过滤赚，对拳收集眯到的奇超滤软液进畏行DE犯AE漂-C柱吸答附层鉴析，仙线性询梯度声洗脱精，获清得较垃纯的扇胸腺筛素。（二毛）从手黏质蔽沙雷气氏菌泡中提喇取基拘因组DN丑A黏质跑沙雷菜氏菌币（Se淡rr传at属ia奏n偏uc咽rc芝es将ce自ns）是穗一类昨产几净丁质剪酶的银高产农菌株确，对文