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文档简介

货号：MS2504 规格：100管/48样蔗糖合成酶（Sucrosesynthase,SS）试剂盒说明书微量法正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义：蔗糖是源（叶片等）光合产物向“库”器官运输的主要形态。蔗糖合成酶（SucroseSynthase,EC2.4.1.13）是双向反应酶，既可催化蔗糖合成又可催化蔗糖分解，是蔗糖代谢的关键酶之一。研究其合成方向SS-II的活性对于植物蔗糖合成具有重要意义。测定原理：SS-II催化游离果糖与葡萄糖供体UDPG反应生成蔗糖，蔗糖与间苯二酚反应可呈现颜色变化，在480nm下有特征吸收峰，酶活力大小与颜色的深浅成正比。自备实验用品及仪器：可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、离心机、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰试剂的组成和配制：提取液：液体10OmLX1瓶，4°C保存；试剂一：液体2.5mLX1瓶，-20C保存；试剂二：1000Mg/mL蔗糖溶液10mLX1瓶，4C保存；试剂三：液体2mLX1瓶，4C保存试剂四：液体25mLX1瓶，4C保存；试剂五：液体6mLX1瓶，4C保存；样品测定的准备：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g4C离心10min，取上清，置冰上待测。测定步骤：1、 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至480nm，蒸馏水调零。2、 样本测定，（在EP管中依次加入下列试剂）：试剂名称（口L）测定管对照管标准管空白管样本1010蒸馏水454555试剂二10试剂一45混匀，25C准确水浴10min试剂三15151515沸水浴中煮沸10min左右（盖紧，以防止水分散失），冷却试剂四210210210210试剂五60606060混匀，沸水浴30min，冷却后，取200.L至微量石英比色皿或96孔板中，480nm下测定各第1页，共2页管吸光值。标准管和空白管只要做一管。每个测定管需要设一个对照管。SS-II活性计算：1、 按照蛋白浓度计算单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生川g蔗糖定义为一个酶活力单位。SSTI活性（.g/min/mgprot）=C标准管XV1X（A测定管-A对照管）：（A标准管-A空白管）：（V1XCpr）：T=100X（A测定管-A对照管）：（A标准管-A空白管）：Cpr2、 按照样本鲜重计算单位定义：每g组织每分钟催化产生川g蔗糖定义为一个酶活力单位。SS-II活性（.g/min/g鲜重）=C标准管XV1X（A测定管-A对照管）：（A标准管-A空白管）：（WXV1：V2）：T=100X（A测定管-A对照管）：（A标准管-A空白管）：WC标准管：标准管浓度，1000Mg/mL；V1：加入反应体系中样本体积，0.01mL；V2:加

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