蔗糖合成酶说明书_第1页
蔗糖合成酶说明书_第2页
蔗糖合成酶说明书_第3页
全文预览已结束

下载本文档

版权说明:本文档由用户提供并上传,收益归属内容提供方,若内容存在侵权,请进行举报或认领

文档简介

货号:MS2504 规格:100管/48样蔗糖合成酶(Sucrosesynthase,SS)试剂盒说明书微量法正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义:蔗糖是源(叶片等)光合产物向“库”器官运输的主要形态。蔗糖合成酶(SucroseSynthase,EC2.4.1.13)是双向反应酶,既可催化蔗糖合成又可催化蔗糖分解,是蔗糖代谢的关键酶之一。研究其合成方向SS-II的活性对于植物蔗糖合成具有重要意义。测定原理:SS-II催化游离果糖与葡萄糖供体UDPG反应生成蔗糖,蔗糖与间苯二酚反应可呈现颜色变化,在480nm下有特征吸收峰,酶活力大小与颜色的深浅成正比。自备实验用品及仪器:可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、离心机、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰试剂的组成和配制:提取液:液体10OmLX1瓶,4°C保存;试剂一:液体2.5mLX1瓶,-20C保存;试剂二:1000Mg/mL蔗糖溶液10mLX1瓶,4C保存;试剂三:液体2mLX1瓶,4C保存试剂四:液体25mLX1瓶,4C保存;试剂五:液体6mLX1瓶,4C保存;样品测定的准备:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g4C离心10min,取上清,置冰上待测。测定步骤:1、 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至480nm,蒸馏水调零。2、 样本测定,(在EP管中依次加入下列试剂):试剂名称(口L)测定管对照管标准管空白管样本1010蒸馏水454555试剂二10试剂一45混匀,25C准确水浴10min试剂三15151515沸水浴中煮沸10min左右(盖紧,以防止水分散失),冷却试剂四210210210210试剂五60606060混匀,沸水浴30min,冷却后,取200.L至微量石英比色皿或96孔板中,480nm下测定各第1页,共2页管吸光值。标准管和空白管只要做一管。每个测定管需要设一个对照管。SS-II活性计算:1、 按照蛋白浓度计算单位定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生川g蔗糖定义为一个酶活力单位。SSTI活性(.g/min/mgprot)=C标准管XV1X(A测定管-A对照管):(A标准管-A空白管):(V1XCpr):T=100X(A测定管-A对照管):(A标准管-A空白管):Cpr2、 按照样本鲜重计算单位定义:每g组织每分钟催化产生川g蔗糖定义为一个酶活力单位。SS-II活性(.g/min/g鲜重)=C标准管XV1X(A测定管-A对照管):(A标准管-A空白管):(WXV1:V2):T=100X(A测定管-A对照管):(A标准管-A空白管):WC标准管:标准管浓度,1000Mg/mL;V1:加入反应体系中样本体积,0.01mL;V2:加

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等,如果需要附件,请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸,网页内容里面会有图纸预览,若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑,并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

评论

0/150

提交评论