芳酸及其酯类药物的分析

芳酸及其酯类药物的分析第一页，共四十一页，编辑于2023年，星期一基本要求

一、掌握水杨酸类、苯甲酸类药物的鉴别和含量测定的基本原理与方法。二、熟悉其他芳酸类药物鉴别和含量测定的基本原理与方法。三、了解本类药物的体内分析方法。典型药物鉴别试验含量测定体内药分练习与思考杂质检查第二页，共四十一页，编辑于2023年，星期一苯甲酸（钠）一、苯甲酸类甲芬那酸丙磺舒典型药物分类与理化性质羟苯乙酯第三页，共四十一页，编辑于2023年，星期一阿司匹林水杨酸双水杨酯对氨基水杨酸钠贝诺酯二、水杨酸类第四页，共四十一页，编辑于2023年，星期一三、其他芳酸类

氯贝丁酯布洛芬酸性较弱第五页，共四十一页，编辑于2023年，星期一主要理化性质1.溶解性:

游离型芳酸或酯类不溶于水。2.UV和IR特性：具有苯环，用于鉴别或含量测定。3.酸性：pH3-6，受取代基的影响。其它芳酸类酸性较弱pKa=2.95pKa=3.49pKa=4.26第六页，共四十一页，编辑于2023年，星期一一、与铁盐反应二、重氮化-偶合反应三、氧化反应四、水解反应五、分解反应六、紫外分光光度法七、红外分光光度法八、TLC和HPLC

第二节鉴别试验第七页，共四十一页，编辑于2023年，星期一

与三氯化铁反应1.水杨酸类：2.苯甲酸类：第八页，共四十一页，编辑于2023年，星期一3.其它芳酸类：a）氯贝丁酯b）布洛芬第九页，共四十一页，编辑于2023年，星期一药物类型反应条件鉴别要点水杨酸（盐）中性、弱酸性（pH4-6）紫色配合物苯甲酸盐中性或碱性赭色沉淀丙磺舒少量NaOH，溶解米黄色沉淀布洛芬高氯酸羟胺+DDC，加热20min紫色羟肟酸铁配合物氯贝丁酯盐酸羟胺+KOH，加热，+HCl紫色羟肟酸铁配合物第十页，共四十一页，编辑于2023年，星期一凡是分子结构中含有芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物均可反应。重氮化-偶合反应第十一页，共四十一页，编辑于2023年，星期一1.直接反应：对氨基水杨酸钠2.水解后反应：贝诺酯具有潜在芳伯氨基，酸水解后再重氮化第十二页，共四十一页，编辑于2023年，星期一

+K2Cr2O7

深蓝色

棕绿色甲芬那酸+H2SO4

黄色

绿色荧光△氧化反应第十三页，共四十一页，编辑于2023年，星期一

1.ASA酸水解生成SA和CH3COOH：SA的mp为156℃～161℃。

2.双水杨酯水解生成SA：SA的mp为158℃。水解反应第十四页，共四十一页，编辑于2023年，星期一

1.苯甲酸盐加热分解生成苯甲酸升华物，可用于鉴别。

2.丙磺舒与NaOH熔融分解成Na2SO3,经硝酸氧化成Na2SO4。

3.丙磺舒加热分解，生成SO2气体，有臭味分解产物反应第十五页，共四十一页，编辑于2023年，星期一

1.测定λmax；λmin。

例如：布洛芬用0.4%NaOH溶液制备0.25mg/ml；λmax:265nm,273nm;λmin:245nm,271nm。

2.在λmax处测定一定浓度供试液的吸收度A。

例如：羟苯乙酯，5μg/mlλmax=295nm;A=0.48

3.在λmax处测定供试液的百分吸收系数。

例如：贝诺酯在λmax=240nm;E1%1cm=730~760

紫外吸收光谱法第十六页，共四十一页，编辑于2023年，星期一

4.在规定的波长测定吸收度比值（即双波长吸收度比值法）

例如：对氨基水杨酸钠10μg/ml;A265/A299=1.56~1.56

再例如：甲芬那酸14μg/ml;A278~280/A348~352=1.15~1.30

第十七页，共四十一页，编辑于2023年，星期一七、红外吸收光谱法水杨酸的红外吸收图谱3300~2300cm-1N-H、O-H1660cm-1C=O1610,15701480,1440C=C775cm-1Ar-H第十八页，共四十一页，编辑于2023年，星期一3700~29001640N-H1580cm-11500cm-1C=C1300cm-1C-N1188cm-1C-O对氨基水杨酸钠的红外吸收图谱第十九页，共四十一页，编辑于2023年，星期一一、阿司匹林中特殊杂质的检查第三节特殊杂质检查1.合成工艺第二十页，共四十一页，编辑于2023年，星期一2.水杨酸——反应中间体与水解产物，利用SA可与高铁盐呈紫堇色，而乙酰水杨酸不含游离酚羟基，不与高铁离子反应。取一定量样品和水杨酸对照品与硫酸铁铵反应，用比色法检查。3.易炭化物检查主要检查ASA中能被硫酸炭化显色的低分子有机杂质。采用与标准比色液比色的方法检查。1.溶液的澄清度——检查原料（苯酚）和副产物（苯酯），利用这些物质不溶于Na2CO3的性质。2.检查第二十一页，共四十一页，编辑于2023年，星期一1.间氨基酚——反应中间体和降解产物，并且容易进一步氧化，颜色加深。二、对氨基水杨酸钠中特殊杂质的检查2.检查方法：1）双相滴定法：（Ch.P）间氨基酚溶于乙醚，对氨基水杨酸钠不溶乙醚；乙醚提取加适量水和指示剂，盐酸滴定，生成物在乙醚中不溶于是转移到水相中。2）HPLC法：采用内标法，以磺胺作内标（USP）

第二十二页，共四十一页，编辑于2023年，星期一

甲芬那酸是以邻-氯苯甲酸和2，3-二甲基苯胺在Cu的催化下缩合而成，因此成品药物中要检查铜盐及有关物质。分光光度法：利用Cu2+与Na-DDC呈色后测定A

1.铜盐检查法

原子吸收分光光度法：BP（2000）

2.有关物质的检查主要检查的是酰胺、二甲基苯胺和邻氯苯甲酸各国药典均采用TLC法中的自身高低浓度对照法。三、甲芬那酸中特殊杂质的检查第二十三页，共四十一页，编辑于2023年，星期一四、氯贝丁酯中特殊杂质的检查

主要检查成品药物中残留的对氯酚原料和挥发性杂质GC-FID法HPLC法：以对-羟乙基酚作内标，用正相HPLC2.挥发性杂质的检查方法

GC法1.对氯酚检查返回第二十四页，共四十一页，编辑于2023年，星期一（一）直接滴定法——基于此药物酸性较强酸碱滴定法：水杨酸类1.原理：2.条件：在中性乙醇中，以酚酞作指示剂；。摩尔比为1:1。3.注意事项：1）乙醇对酚酞显酸性使结果偏高，所以乙醇在使用之前需用NaOH中和至对酚酞显中性；2）滴定时振摇要快，防止局部碱液浓度过高使酯键水解；3）专属性差，易受降解产物水杨酸和醋酸的干扰，所以不适合降解产物含量较高的样品测定。一、阿司匹林第二十五页，共四十一页，编辑于2023年，星期一（二）水解后剩余滴定法（USP、JP）原理：条件：水溶液第二十六页，共四十一页，编辑于2023年，星期一（三）两步滴定法（Ch.P用于阿司匹林片的测定）

原因：片剂中有稳定剂酒石酸或枸橼酸，此外工艺中可能产生水杨酸和醋酸，不能采用直接滴定或水解后剩余滴定。第一步：用NaOH中和所有的游离酸，不计量

第二步：水解与测定，采用剩余滴定法

第二十七页，共四十一页，编辑于2023年，星期一

对氨基水杨酸钠有芳伯氨基,在HCl中与NaNO2发生重氮化反应Ar-NH2+NaNO2+2HClAr-N2Cl+NaCl+2H2O

因此可用亚硝酸钠滴定法测定其含量，此法在下章重点讨论。（二）亚硝酸钠滴定法第二十八页，共四十一页，编辑于2023年，星期一

（三）双相滴定法：（苯甲酸钠）

这是有机酸碱金属盐类的常用测定方法，在水和与水不相混溶的有机溶剂（乙醚）中用标准酸进行滴定。

生成的苯甲酸不溶于水，终点pH突跃不明显，不易观察。苯甲酸在乙醚中易溶，在水相中加入乙醚将滴定中产生的苯甲酸萃取入醚层。因此用双相滴定可使反应完全终点明显。第二十九页，共四十一页，编辑于2023年，星期一（一）直接紫外分光光度法

贝诺酯的含量=CxD/m=紫外分光光度法第三十页，共四十一页，编辑于2023年，星期一（二）离子交换-紫外分光光度法氯贝丁酯及其制剂USP(2005)采用酸碱滴定法。含有酸性杂质对氯酚时，可采用强碱性阴离子交换树脂吸附酸性杂质后紫外测定（USP（29））阴离子交换树脂是在分子中含有碱性基团的离子交换树脂。在水或极性溶剂中能溶胀,在水中具有碱性,能以其氢氧根离子或非金属离子交换溶液中的阴离子。含有氢氧根离子的树脂,根据电离常数的大小,可分为强碱性、中等碱性和弱碱性三类。强碱性阴离子交换树脂,主要是分子中含有季铵基-N(CH₃)3OH的树脂。弱碱性阴离子交换树脂,有间苯二胺-甲醛树脂、三聚氰胺-胍·甲醛树脂等。第三十一页，共四十一页，编辑于2023年，星期一第三十二页，共四十一页，编辑于2023年，星期一（三）柱分配色谱-紫外分光光度法

USP(29)采用此法同时测定ASA胶囊中ASA和SA。

1.SA的限量测定

色谱柱的制备；对照品溶液的制备；供试品溶液的制备。第三十三页，共四十一页，编辑于2023年，星期一供试品液：CHCl3液洗脱液1：CHCl3洗脱液2：HAC-

乙醚硅藻土，FeCl3-尿素玻璃棉硅藻土，Na2CO3供试品液：CHCl3-HCl液洗脱液1：HAC-CHCl3

(1:10)10ml洗脱液2：HAC-CHCl3(1:100)85ml

1-杂质先洗脱2-SA后洗脱max=306nmAu＜As1-杂质先洗脱2-ASA后洗脱max=280nmASA(mg)=C(Au/As)第三十四页，共四十一页，编辑于2023年，星期一

2.ASA的含量测定色谱柱的制备；对照品溶液的制备；供试品溶液的制备。第三十五页，共四十一页，编辑于2023年，星期一

Ch.P(2005)ASA的胶囊剂的含量测定采用此法。

USP（24）ASA片、对氨基水杨酸钠、甲芬那酸、布洛芬、丙磺舒等及其制剂，采用此法。五、HPLC法第三十六页，共四十一页，编辑于2023年，星期一

一、血清中ASA和SA浓度的HPLC法

色谱条件：色谱柱为ODS-C18(150mm×4.6mm,5μm)

流动相为甲醇-水-正丁醇(30:20:1)检测波长为237nm；内标物为苯甲酸。

血清样品预处理

血清100μl+HClO450μl+不同浓度ASA和SA+内标液涡旋混合2min离心5min取上清液20μl进样。

第五节

体内药物分析第三十七页，共四十一页，编辑于2023年，星期一回归方程：以峰高比（H标/H内）对浓度回归ASA的回归方程：Y=5.8×10-3+5.29×10-2Xr=0.9996SA的回归方程：Y=6.0×10-3+8.33×10-2Xr=0.9981ASA和SA的线性范围分别为：1～20μg/ml;2～30μg/ml回收率：空白血清+五种不同浓度测定，ASA为96.0%～106.0%;SA为92.0%～119.5%;（五种不同浓度均应在线性范围内）第三十八页，共四十一页，编辑于2023年，星期一色谱条件：色谱柱为LiChrospher100RP(125mm×4mm,5μm)

流动相为25%乙腈溶液-醋酸缓冲溶液梯度洗脱。检测波长为254nm；内标物为依他尼酸。尿样品预处理：C8固相萃取柱，100mg填料/ml用甲醇1.0ml,然后用0.5ml蒸馏水活化。2.0ml尿样+内标300μl(10μg/ml)上柱1.0ml水洗脱生物杂质再用甲醇0.5ml洗脱保留在柱上的丙磺舒和内标。洗脱液0.45μm浸滤膜滤过，取5μl直接进样分析。