菊花的组织培养经典

菊花的组织培养经典第一页，共四十二页，编辑于2023年，星期二第二页，共四十二页，编辑于2023年，星期二菊花的组织培养第三页，共四十二页，编辑于2023年，星期二有丝分裂受精卵细胞分化

在个体发育中，由一个或一种细胞增殖产生的后代，在形态、结构和生理功能上发生稳定性差异的过程。1、细胞分化的概念知识回顾（一）第四页，共四十二页，编辑于2023年，星期二

黑色素细胞在体外培养30多代后仍能合成黑色素；离体培养的上皮细胞，始终保持为上皮细胞，而不会变成其他类型的细胞。2、稳定性3、不可逆性细胞分化发生在整个生命进程中。1、持久性2、细胞分化的特点

造血干细胞原红细胞早幼红细胞中幼红细胞晚幼红细胞成熟红细胞死亡4、普遍性第五页，共四十二页，编辑于2023年，星期二

细胞分化是否意味着细胞中遗传物质的改变？

遗传物质没有改变，不同组织的细胞共同来源于受精卵，经有丝分裂产生。第六页，共四十二页，编辑于2023年，星期二3、细胞分化的实质ABDCEEDCABEDCABEDCABEDCAB基因在个体发育过程中，不同细胞中遗传信息的执行情况不同即基因的选择性表达的过程第七页，共四十二页，编辑于2023年，星期二

红细胞合成血红蛋白

(不合成肌动蛋白)肌细胞肌动蛋白基因开启合成肌动蛋白

(不合成血红蛋白)肌动蛋白基因关闭血红蛋白基因关闭血红蛋白基因开启试一试:现在你能解释这些现象了吗?4、细胞分化的结果细胞产生了不同种类的蛋白质即出现了不同的结构和功能第八页，共四十二页，编辑于2023年，星期二愈伤组织胚状体1958，美国，斯图尔德

植物组织培养离体回顾知识（二）第九页，共四十二页，编辑于2023年，星期二（一）、植物组织培养概念关键词：外植体、脱分化、再分化、愈伤组织

在无菌和人工控制条件下，将离体的植物器官、组织、细胞，培养在人工配置的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其脱分化产生愈伤组织再分化形成丛芽，最终形成完整的植株。又称：植物离体培养第十页，共四十二页，编辑于2023年，星期二脱分化（或去分化）：由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程。再分化：脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官的过程。外植体：用于离体培养的植物器官或组织片段。愈伤组织：细胞排列疏松、无规则、高度液泡化的无定形的薄壁细胞。第十一页，共四十二页，编辑于2023年，星期二切取形成层无菌接种诱导愈伤组织的形成试管苗的形成培养室移栽脱分化再分化（二）、植物组织培养的基本过程第十二页，共四十二页，编辑于2023年，星期二植物组织培养过程:离体组织或细胞植物体脱分化细胞分裂素≈生长素愈伤组织芽根细胞分裂素>生长素细胞分裂素<生长素再分化植物细胞培养不需要光需要光第十三页，共四十二页，编辑于2023年，星期二（三）、植物组织培养的理论基础---细胞全能性概念：高度分化的植物细胞，仍然具有发育成完整个体的潜能。基础：生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质。表达条件：离体条件无菌操作适宜物质的诱导和调节（植物激素）适宜的营养物质温度、酸碱度、光照等条件的控制第十四页，共四十二页，编辑于2023年，星期二思考这个试验说明了已经分化的细胞核具有什么特性？高度分化的动物体细胞的细胞核有发育成完整个体的潜能多利羊的诞生动物细胞有没有这种能力？第十五页，共四十二页，编辑于2023年，星期二已经分化的细胞，仍然具有发育成完整个体的潜能。细胞全能性思考为什么已经分化的细胞具有全能性呢？高度分化的细胞含有保持物种发育所需要的全套基因植物组织培养技术动物的克隆技术第十六页，共四十二页，编辑于2023年，星期二1、培育无病毒植株2、大规模培养愈伤组织（提取紫草素，治疗烫伤和割伤的药物以及染料和化妆品的原料）4、基因工程中亦需用到植物组织培养的方法（受体细胞为植物细胞）（四)、植物组织培养的应用：

3、人工种子（解决有些作物品种繁殖能力差，结子困难或发芽率低等问题）第十七页，共四十二页，编辑于2023年，星期二三、影响植物组织培养的因素（1）材料的种类、年龄及保存时间长短等（2）营养（3）植物激素（4）PH、温度、光照等条件第十八页，共四十二页，编辑于2023年，星期二（1）植物材料的选择---直接关系实验的成败烟草和胡萝卜的组织培养较为容易枸杞愈伤组织的芽诱导比较难材料的年龄、保存时间的长短菊花的组织培养一般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝注意：外植体的选取

不同植物的组织培养难度不同同一种植物的不同组织培养难度不同第十九页，共四十二页，编辑于2023年，星期二（2）营养---MS培养基主要成分包括：A、大量元素:N、P、S、K、Ca、Mg等B、微量元素:B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、

I、Co等C、有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等

D、植物激素：生长素、细胞分裂素、赤霉素等第二十页，共四十二页，编辑于2023年，星期二讨论：你能说出各种营养物质的作用吗？同专题2中微生物培养基的配方相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？答：微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需的无机盐；蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞的渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不同，MS培养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。

第二十一页，共四十二页，编辑于2023年，星期二常用的植物激素：生长素、细胞分裂素和赤霉素生长素、细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素在生长素存在的情况下，细胞分裂素的作用呈加强的趋势激素的使用顺序、使用的量及比例影响植物细胞的发育方向（3）植物激素的影响第二十二页，共四十二页，编辑于2023年，星期二使用顺序实验结果先使用生长素，后使用细胞分裂素有利于细胞分裂，但不利分化先使用细胞分裂素后使用生长素细胞既分裂、也分化同时使用分化频率高使用比例实验结果生长素细胞分裂素>生长素细胞分裂素<生长素细胞分裂素＝有利于根的分化有利于芽的分化，抑制根的分化促进愈伤组织生长第二十三页，共四十二页，编辑于2023年，星期二思考：以下培养基出现的现象反应了什么问题？生长素/细胞分裂素高利于根的形成适中利于愈伤组织的形成第二十四页，共四十二页，编辑于2023年，星期二供参考的配方1、诱导菊花愈伤组织：在MS培养基中加入BA和NAA，质量浓度均为0.5mg／Ｌ２、诱导菊花从芽：在MS培养基中加入BA和NAA，质量浓度分别为2---3mg／Ｌ和0.02—0.03mg／Ｌ3、诱导菊花生根：在MS培养基各成分用量减半，并添加入NAA或IAA，质量浓度均为0.1mg／Ｌ第二十五页，共四十二页，编辑于2023年，星期二(4)、pH、温度、光照（菊花组织培养为例）

pH=5.8

温度控制在18—22℃

每日光照12h第二十六页，共四十二页，编辑于2023年，星期二制备MS固体培养基外植体消毒

接种

培养栽培四、实验操作

移栽冲洗—酒精—无菌水冲洗—氯化汞—无菌水冲洗至少三次之上配制各种母液配制培养基灭菌第二十七页，共四十二页，编辑于2023年，星期二（一）制备MS固体培养基MS培养基包括20多种营养成分，实验室一般使用4℃保存配制好的培养基母液来制备1、配制各种母液①无机物中大量元素浓缩10倍，微量元素浓缩100倍，常温保存②激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按1mg/ml的质量浓度单独配制成母液③用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量第二十八页，共四十二页，编辑于2023年，星期二2、配制培养基分装到锥形瓶中，每瓶分装50ml或100ml①配制培养液②调PH③培养基的分装由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此不必添加植物激素3、灭菌分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌第二十九页，共四十二页，编辑于2023年，星期二1、选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝（二）外植体消毒2、消毒①流水冲洗菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左右②酒精处理用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积分数为70％的酒精中摇动2－3次，持续6－7s，立即将外植体取出，在无菌水中清洗③消毒液处理取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入质量分数为0.1％的氯化汞溶液中1－2min，取出后在无菌水中至少清洗3次，漂净消毒液第三十页，共四十二页，编辑于2023年，星期二（三）接种污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室消毒是至关重要的。用70％的酒精喷雾使空气消毒，酒精或新洁尔灭搽洗工作台并用紫外线照射20分钟1、接种室消毒2、无菌操作要求操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后，都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。3、材料的切取和接种第三十一页，共四十二页，编辑于2023年，星期二第三十二页，共四十二页，编辑于2023年，星期二4、接种注意事项①每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为70％的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧一遍，冷却后再接种②外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜3－4块，菊的茎或叶6－8块，也不要太少，以充分利用培养基中的营养成分和光照条件③插入时应注意方向，不要倒插。茎段、茎尖基部插入培养基利于吸收水分和养分第三十三页，共四十二页，编辑于2023年，星期二正常苗污染苗第三十四页，共四十二页，编辑于2023年，星期二1、外植体带菌2、培养基及接种器具灭菌不彻底3、接种操作时带入4、环境不清洁污染途径第三十五页，共四十二页，编辑于2023年，星期二思考：你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？答：每种材料或配方至少要做一组以上的重复。设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。第三十六页，共四十二页，编辑于2023年，星期二（四）培养接种后的锥形瓶最好放在无菌箱中培养，培养期间应定期消毒培养温度控制在18-22℃每日用日光灯光照12h第三十七页，共四十二页，编辑于2023年，星期二（五）移栽

移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日1、打开封口膜2、清洗转移

用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间3、移栽幼苗长壮后，移栽到土壤中第三十八页，共四十二页，编辑于2023年，星期二固体基质型，含水量高、蓄水性强、透性好，适合栽培珍珠岩

,珍珠岩是一种火山喷发的酸性熔岩，经急剧冷却而成的玻璃质岩石，有弧形或圆形裂隙，如珍珠的结构，所以被命名为珍珠岩。蛭石是一种天然、无毒的矿物质，在高温作用下会膨胀的矿物。它是一种比较少见的矿物，属于硅酸盐。第三十九页，共四十二页，编辑于2023年，星期二（六）栽培

幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生