2022临床标本中结核分枝杆菌抗原蛋白鉴定的研究进展（全文）

2022临床标本中结核分枝杆菌抗原蛋白鉴定的研究进展(全文)(Mycobacteriumtuberculosis,MTB)抗原检测试剂盒的敏感度和特异度MTB抗原蛋白鉴定血清样本中鉴定出一些有意义的MTB蛋白抗原。Banerjee等利用TAC分3B(BJS-G3B)。这两种组分显示出与MTB体外释放的排泄-分泌抗原法制备了循环结核抗原蛋白9(CTA-9),应用聚丙烯酰胺凝胶电泳例如43kDa。综上认为，虽然对血清中MTB抗原蛋白的鉴定有了一定进展，一方面限制了MTB感染扩散，另一方面也使其成为结核病慢性进程中的关抗酸染色效果产生不利影响。Goel和Budhwar利用MTB38kDa抗原的单克隆抗体对肉芽肿中的MTB进行免疫组织化学染色(IHC),结果显示，在Mustafa等比较了MTB感染的肺组织和淋巴结组织中的抗原表达水平，发现肺组织中的大多数MTB的分泌抗原(如MTP32、MTP46、MTP64等)可经IHC染色观察到，这可能是由于肺部形成保护性组织肉芽肿的能力有MPT57)的存在也可证明淋巴结结核持续感染的存在；另外，通过IHC方法还确定了15例具有硬化结节和空洞等影像学表现的肺结核患者。而对于在的Ag85A和分枝杆菌结合DNA结合蛋白1(MDP1)加以佐证。除了蛋白抗原外，甘露糖基化脂原甘露聚糖(ManLAM)是目前研究较多的MTB抗原，在病变组织中含量丰富。LAM是MTB细胞壁上的重要成分，能够随MTB的增殖代谢不断地释放出来。Zhou等研究证明了LAM存在于病变组织中，并将基于ManLAM适配体的IHC检测技术用于结核病以上研究均说明了组织和肉芽肿中结核蛋白和脂类抗原的发现和痰液标本中找到MTB是诊断结核病的可靠手段，但其阳性率低(50%(HspX)是MTB的主要抗原，用于稳定细菌的蛋白质和细胞结构、提高细菌是活动性结核病公认的生物标志物。Pelaáez等也开发了一种无标记表面等离子共振(SPR)生物传感器，用于HspX的床旁检测。这种基于EG硫醇部MTB分泌抗原蛋白的高表达，一些研究针对MTB分泌蛋白MPT64作为TBM。MTB侵入中枢神经系统造成的脑损伤和神经炎症是TBM的始动环了急性起病的TBM患者第1～4周脑脊液单核细胞的MTB早期分泌性靶明EAST6是TBM患者早期诊断的有效抗原。在TBM患者中发现的另一存在的Ag85A和Ag85B两个蛋白均属于MTB的主要分泌蛋白—Ag85复合群蛋白。有研究表明，Ag85复合群蛋白参与MTB的细胞壁生物合成热休克蛋白，Mudaliar等应用TB-60mAb在TBM患者中检测到65kDa蛋白的存在，并建立了间接ELISA方法用于TBM患者的血清学抗原诊断，显示出84%的敏感度和90%的特异度，但有8%的化脓性脑膜炎患者和10%蛋白是一种确认MTB现症感染的重要诊断手段，在TBM诊断方面具有光在免疫缺陷群体中更高，如HIV感染患者，这可能MTB负载量更大，进入尿液中的MTB抗原更多有关。早在2002年，Choudhry和Saxena就对培养滤液蛋白10(CFP10)在尿液标本中诊断结核病的应用价值进行了评估，他们使用纯化的CFP抗体进行夹心法ELISA检测，发现75%抗原(BETA)检测技术进行初诊结核病患者的血清和尿液样本中的CFP10液中CFP10的含量可能要比血清更高，提示当以CFP10为靶标时，尿液样另一个被确定出现在尿液中的经典MTB抗原是LAM,由Hamasur尿液进行夹心法ELSA分析，证实了尿液中有LAM存在。Dahiya等认为尿液中的LAM和CFP10的一种存在形式是细胞外囊泡(EVs),通过EVs这运输与代谢。他们利用免疫聚合酶链式反应(I-PCR)对尿液中的LAM和CFP10进行检测，结果显示I-PCR的检测限低于ELISA方法106倍。但尿液LAM检测的敏感度在不同患者人群中存在较大异质性，如低CD4+T淋巴细胞计数的患者(例如HIV合并MTB感染者)对LAM检测的敏感度(67%～85%)明显高于HIV阴性的结核病患者(13%～51%)。尿液中的LAM,但其目前的应用范围较窄，仅用于HIV合并MTB感染者，性患者中诊断结核病的敏感度为35%;在具有结核病临床表现的HIV阳性患者中诊断结核病的敏感度为42%,这可能是HIV阴性患者尿液中LAM浓一项Meta分析发现这两种试剂盒对HIV阳性的疑似结核病儿童患者检测笼有效地隔绝了基质蛋白的干扰，提高了尿液中LAM的检出能力。De等认为这可能是由于体内分离获得的LAM与体外培养获得的LAM在结构从C3HeB/FeJ小鼠感染模型的肺脏和HIV阴性结核病患者尿液中分离纯化获得的LAM进行了抗原表位的差异分析，发现来自肺脏的LAM的非还导，而尿液来源的LAM虽也以高丰度的Ara4和Ara5末端基序为主导，但严重缺乏支链6阿拉伯呋喃糖苷(Ara6)缀连的甘露糖末端基序，这说明LAM结构上的差异可能会直接影响LAM与抗体的亲和力，从而影响检测Pollock等在2例肺结核患者的尿液中发现了一个独特的MTB多肽序列：TBCG03312,经过BLAST分析，发现该肽段与不同的MTB临床分离株高度同源，与来自MTBC菌株的TBCG03312和来自MTB423菌株的问题是除去患者体液中高丰度的非MTB抗原蛋白，避免其对低丰度MTB抗原的掩盖，Young等使用了50kDa分子截留过滤器(MWCO)去除尿液中了10种仅出现在结核病患者尿液中的分枝杆菌蛋白。MTB抗原蛋白鉴定与检测的发展历程与目前存在的问题早在1987年的一项研究中，科研人员就利用放射免疫技术(RIA)观察到TBM患者脑脊液中的MTB特异性抗原(TB-Ag)和特异性抗体(TB-Ab)诊断意义。随后越来越多的科学家开始关注到MTB抗原检测，根据所检测MTB抗原蛋白基因结构的认识与发展，MTB抗原鉴定逐渐向分子生物学水平靠近。分泌蛋白EAST6和CFP10的分离与表征是MTB抗原蛋白鉴定的重要突破。Sorensen等在MTB培养滤液中发现了一种由95个氨基酸组成的多肽序列，经DNA序列翻译后比对和N段系列分析，发现其具有刺激T细胞分泌y-干扰素的能力，而并非污染蛋白，EAST表的MTB培养滤液蛋白抗原的发现。随后，Berthet等鉴定出了与EAST6共同转录的新基因：lhp,该基因的产物是来自MTB培养滤液的低分子量蛋白质CFP10,这两个低分子量蛋白目前仍旧是MTB抗原研究领域的焦点，但EAST6和CFP10目前也仅用于结核分枝杆菌潜伏感染的筛查和肺外结血清、尿液、脑脊液标本中鉴定出了多种具有意义的MTB抗原蛋