细胞生物学实验指导目录

前言本实验指导是在龚宁所编《细胞生物学实验指导》（2003年2月）的基础上修订而成，此次修订是根据实验内容的变化进行的，删除了已经纳入《生物技术大实验》的内容，增设了微分干涉差显微镜的使用、电子显微镜演示、细胞凋亡等内容。本实验指导编写过程中参考了杨汉民主编《细胞生物学实验》（1997年7月第二版）、李素文主编《细胞生物学实验指导》（2001年10月第一版）和中国农业大学生物学院所编《细胞生物学实验指导》（2000年4月），设置了15个实验，使用时可根据当时的具体情况选作10个。由于编者的水平有限，本指导中难免错漏之处，恳请使用本指导的师生提出批评和建议，以便及时修改。编者2007年1月3日潮细胞者生物僵学实狸验指闹导目兴录窗实验斯一蹈扰细隔胞形弄态结切构的清观察党及大衬小测全定岛……择……廉……觉……找……开……鹊…枯1滩实验之二趟扰逮微分储干涉公差显木微镜蚁的使雪用瞒……稳……桨……片……计……涉……眼……背……但2惊实验俘三书扣口搞腔上怕皮细镜胞的兽荧光棵观察犁……桌……即……舌……哑……球……愁……忠……签4凭实验咱四愈只叶阶绿体滥的提蹲取冻……蜘……陡……饰……掘……捐……侧……遵……辟……杂……膛…巡5凝实验馅五月粗植威物材乱料中屠DN算A的兆提取未……鸽……坏……师……磁……拴…敢……顺……杠……雁6远实验略六疯崇探细胞疲膜的摩渗透苦性葛……窗……殖……型……陵……梁……绳……棕……穴……狭……忽8垫实验堆七概们墙光镜肾下植屿物细延胞骨洞架的井制片全技术舱及观扭察躬……缎……华……馋……霞……象10秃实验顷八泰镰土线粒割体和互液泡蜜系的客超活世染色汽与观羽察康……趟……季……虏……咱……插…川1鹿1粱实验紫九显DN待A的踪细胞好化学颠反布应区——禽Fe诵ul户ge篮n反脆应捷……秃……定……叙……执……恒1华3句实验打十近RN签A的阳细胞间化学限反应哀——叛Un榨na非纲反应亚……础……界……外……杰……井…像15亭实验卵十一尚小白怒鼠腹白腔巨钩噬细介胞吞疼噬活队动的碌观察将……呀……望……曲……随……拔…掘17汇实验迫十二封联会菊复合武体的斯染色暂与观晌察妨…无……邪……拿……坦……姨……读……漫……油…棍18市实验堵十三亿去壁石低渗稿法制绍备植姓物染妙色体剥标本扔……盘……箱……摄……晓……照……再…桃19堤实验茧十四梨风细胞虎凋亡抱……判……业……蔽……漏……笨……口……协……蠢……存……组……亚…蒜22纸实验湾十五批用透射葵及扫首描电奋镜演栗示实崖验者……烘……骨……蜜……赞……娇……关……站……光23醉实验垄一椒拳细乏胞形誓态结稠构雷的露观察校及大慰小测趣定陈一、脉实验偷目的欣：益1、缸观察回几种张细胞榜的形气态结感构亭2、民掌屋宅用测识微尺肿测定顾细胞共大小社的原智理和叔方法闯二、哗实验超原理率：纪测微突尺分已物镜藏测微举尺（恩简称欲物微孟尺或膊台微演尺）况和目留镜测品微尺粉（简烤称目膨微尺插），款两者仆配合唇使用买，可绪以测落量细氏胞大疲小。讯目微夺尺是卖一个池可以以放在蔬目镜或内的岔特制胆玻璃燃园片渡，园足片中震央刻茎有一东条直击线，超此线旨分为零若干效格。允物微荒尺为该一载咸玻片潜中央顺封固结的小俘尺，氧长悼1m池m征，被住等分滴为盟10继0暂格，访长为兰0.锐01歌mm营(1膏0扑μ议m)趟。当妥测量垃细胞宫大小妇时，震不能撞用物伏微尺纹直接耻测量避细胞答，而百只能舍使用仿目微隆尺。每因目僵微尺城测量月的细缩胞是访经物坊镜放悔大后值的像彻，而假它每吉格所犬代表樱的实疼际长春度随更物镜顾的放软大率家而变拔，在蛋测量捉时需安要先束用物拥微尺柄来标任定，测求出识某一户放大暮率时扭目微游尺每零格所范代表乖的实张际长堂度，社然后膜再用部以测层定细搁胞大当小。果将物婆微尺帽放在薪显微捕镜的吹载物蓄台上亮，小骗心转探动目坏镜测列微尺岸，移炮动物阵微尺茄使两乔尺平错行，吩起点稿线重怒合，辰然后瓦找出海另一栽处两浊尺刻值度重骑合处再，记及录起双点线准到重太合线杯之间忙的各含尺的问刻度栽数（日格数映），泰按下泽式计丘算，唇在该建放大矿系统灶下目幼微尺葵每格玻所代缺表的件实际画长度时：晨物微走尺格输数伤目微凭尺每承格所遥代表醒的实悟际长丙度缎=怖朱声唤塘魂怠趁握惯信╳马1妨0紧μ处m制目微溪尺格秧数斜例如疗：目抱微尺煎是桶10通0瞒格，绑其对宝应的五物微私尺是宵80魔格，过则目拾微尺罗每格氧所代尤表的庄实际太长度勇为植80神/1淡00掏╳锦10弟=8缘μ桌m躺。醋测量华某一旷细胞辩时，前如果岭目微脆尺测新得其舒横径搬为佳5验格，摊则此肌细胞懂横径狂为榜8庄╳硬5=而40丝μ萍m毒。毛三、诵实验卧用品畜：缸普通尤光学蒜显微前镜汗载玻艇片韵盖玻巴片茅镊子扛消毒巴牙签希烧杯录吸管雁0.灯9%特生理数盐水匙蒸馏反水顷吸水育纸。洞四、扔实验辜材料在：游口腔钟黏膜鹿上皮纺细胞沸；洋贯葱斧内表棍皮宾；葫丰芦藓轨叶片连；赏保存冒于阿粘氏液迎中的虾鸡血灵；甜喊椒荡五、刺方法宪步骤痕：枝（一盾）、镰细胞呆形态厘结构百的观朋察：顾1属、莫人遵口腔舰上皮秃细胞纠的羡观察绿：凑1歉）、艘在洁让净的园载玻导片中逃央，分滴一晋滴生市理盐桥水。私2赔）、盗用消蛛毒牙克签的冻一端贞，在仪漱净强的口标腔侧燥壁上茎轻轻缩地刮瓶几下糊。疗3国）、像把牙许签上趟附有评碎屑黎的一留端，吧放在解载玻腰片上凑的生挺理盐剩水滴耳中涂祥抹几港下。占4露）、种用镊舌子夹糕起洁壶净的帜盖玻听片，吴将它属的一迟边先具接触抹载玻常片上卸的生老理盐兆水滴彻，然椅后，愁轻轻丝地盖知在水搜滴上户。轨玻5艘）、淹用显横微镜弊观察财细胞滤形状源，伤细胞友呈扁辅平鳞菠状寇。配2、志取洋千葱内两表皮电，许同上图法忧制作搜临时绞装片地（将凭生理纵盐水痛换成桶蒸馏凤水）对，用苗显微塑镜观换察，汤可见助长条拐状的凉洋葱蓄内表辞皮细播胞喉3、逮取裁葫芦吊藓叶设片，决制作然临时祖装片嫩（制丙作方羽法同讯洋葱摔内表秆皮）晶，冲用显愈微镜屠观察旬，可怨见内寺含许菠多叶宗绿体尼的叶链细胞罩，细盈胞呈炕什么府形状革？束4、揉制作香鸡血交涂片族，用涂显微册镜观皱察红徐细胞宽5、杰取甜悄椒一探片，货用刀挨片刮骗去果盆肉，亮将表王皮制满成临拆时装铜片，店用显宅微镜闸观察尸表皮昏细胞敌，能告看见值胞间泽连核丝吗呀？则（二兰）、东细胞罪大小便的测腹定：笋1、想将目验微尺较放于陆目镜躁内桂2、深将物亦微尺辈放在址显微宋镜的拉载物悦台上仔3、讽小心吵转动誓目镜环测微凑尺，隆移动彩物微寇尺使困两尺索平行说，起净点线暮重合抬，然苏后找灰出另北一处廊两尺改刻度代重合咏处嫌4、物记录饭起点臣线到孙重合股线之课间的弊各尺熟的刻蠢度数吓（格那数）喂，按灵下式祸计算摧，在脉该放桃大系帜统下绑目微妄尺每鹊格所炉代表内的实畜际长纠度：响物微洞尺格晒数趟目微青尺每样格所耕代表锹的实荡际长秒度能=毛策眉喜月况剧戚涌颠含╳鱼1保0彻μ胃m晨目微姜尺格坡数煤5、睡将制据作的坡各种挤细胞浑临时阔装片车置于贩载物性台上县，测训定细锡胞的支大小框（包槽括长水径和绩短径饶）弊。眠六、白注意爸事项游：创1、坦制作份临时粮装片潮时避娱免产故生气跨泡预2、向用物先微尺泄标定呼的目菌微尺胆每格饱长度葬的数耍值代俗表在时某一锹放大趣系统鞠下的心情况叠，这俩一数件值会任随物录镜的恢放大碌率而爹改变南，因体此，穗在什毕么放不大倍印数物居镜下芝标定你的目最微尺悬只能剥在同淹一放残大倍坡数的高物镜漫下测光定细乌胞的泰大小酬。梁七、松作业诉：婶1、掏绘控出垒你所尊观察星到的葬洋葱假表皮怨细胞梯和葫励芦藓笼叶细允胞图负，指祸出各谱部分恭的名牙称。氏2、煌列表识说明逢你所恋测出拔的几踪种细颂胞的马大小输。克实验孕二择耍微泽分干腊涉差地显微献镜的堂使用显——攻用微猫分干恳涉差佛显微提镜观低察口迷腔上榆皮细援胞虽一、殃实验絮目的炮：华1.跟了解执微分鸡干涉伶差显石微镜扛观察拢活细降胞的榨原理捏2.劳了解贩微分幻干涉瞒差显柴微镜浙的特攀殊组琴件和被位置叶3.滨掌握篇微分方干涉守差显图微镜香的基小本操蹈作步药骤壳二、口实验妈原理物：趋微分点干涉简差显讲微镜孕是根慌据通预过物臣体内枯只分论开1爸um拨或者壮更短嫌距离才的2粘束相变干的嫁光之外间的舅相位研差设蓄计的胜，使津标本捷内邻床近2尸点的阶光程出差被桂显微买镜中管特殊耳的光像学系垮统转学变为碌振幅皱（光附强度他）的转变化替。从份而可融以观插察到挥标本煌内细啦微的搜结构随，所牵以称掌为微遇分干坟涉差奋显微麦镜。辞根据谋照明腔方式询，微膀分干扎涉差韵显微倾镜分血为落朱射式联和透平视式秩2种握，生顺物学蓬和医辆学观韵察中礼多采锅用透功射式备微分究干涉剑差显戚微镜缩。锤微分哭干涉谋差显拥微镜关包含价2块甜正交捞的偏远光镜保：一帮块靠吧近光底源，顶称为疼起偏共镜：次另一拣块靠罗近目再镜，催称为柴检偏瓶镜。少在起坝偏镜在和聚感光镜抱之间列放置衰第一帮块渥氏氏棱刊镜，饶在物币镜和乳检偏西镜之驼间放芒置第骡二块郊渥氏膛棱镜丛，这薄就是掀微分三干涉煌差显腿微镜盗的基钓本结性构。津其基迹本原该理是戏：来赚自瞧光源简的自屠然光纷经过它起偏出镜后活成陆为线竖偏振寺光，吼以4补5度扯方位凭角（秒入射烈光偏搞振方锡向与陡晶体仗光轴亲之间狼的夹磁角）薄垂直拴入射薯到第帮一块恳渥氏漫棱镜障，这企时入青射偏短光分秃解为隐振动徐方向不互相壁垂直猴、传聪播方订向一笔致的唉O光啊和E薄光，雨穿过槐第一杂块渥午氏棱虎镜的挑中心探点后鹿，由凡于晶产体光淘轴方狭向的椒改变启，O馒光和以E光配从中酷心灭点盒散发块开一脊个很业小的误角度烂，经撕过聚迟光镜栽后产沃生出包间隔辆只有欣1艰um谜甚至旋更短粱些的便平行作光，摊穿过燃样品痰的2恼个点挣。由茎于光妨线通丢过标薄本的判2个京点的豆光程迁长度规不同激，2少束光脱线的叶相位搭都发调生了词变化远，带陕有标晋本2迎个邻柄近点蚀的相凤位差朗信息逮的这耽2拦束识线偏渐振光束通过心物镜蛋后，橡会聚敏在第裙2块坝渥氏就棱镜舌的中脖心点帆，组骆合在贺一起坝的这参2束丛线偏狡振光抹相位苍差不辉同，与偏振他方向气互相涝垂直怎，不伙能直庄接干音涉成燃像。芒当它夕们通冠过检景偏镜圈后成浊为振泽动面朽相同歼、频郊率相攀同且咸具有际一定改相位面差的村相干搭光束倡，因菌而在捆中间拳像平键面上辱形成雹干涉令的物栋像。立三、点实验畅用品掘：租微分税干涉纠差您显微混镜与载玻针片锐盖玻晋片希镊子帅消毒顺牙签幸烧杯烟吸管棉0.堪9%厅生理波盐水芦吸水葛纸。造四、栽实验陕材料漆：疗口腔触黏膜撤上皮晨细胞廉五搅、奸方法移步骤币：看（崇一朵）惑、制殃作人胶的口补腔上芹皮细慈胞的券临时赤装片塘1.语在洁盐净的价载玻勤片中惭央，世滴一货滴生荷理盐拼水。础2.探用消香毒牙蜂签的植一端判，在委漱净触的口集腔侧拆壁上蜓轻轻家地刮虎几下伪。米3.烂把牙腊签上捏附有圾碎屑伪的一帅端，犁放在搭载玻馋片上态的生贴理盐孟水滴亮中涂礼抹几肆下。叼4.章用镊画子夹站起洁折净的棍盖玻酱片，震将它敌的一膊边先催接触宝载玻都片上筑的生融理盐限水滴丽，然欠后，文轻轻午地盖严在水颂滴上娃。皂（吹二严）务、用富微分世干涉围差阴显微准镜观真察人症的口废腔上车皮细奸胞著1.咏将1盛0硬×逝微分很干涉盏差物握镜旋雄入光浮路，泽并调浮入相巾应的友渥氏穿棱镜堡即N谣1傻。调贼焦距厦和起苏偏镜抚使其殃与检棉偏镜蛾正交泥，产揪生最陵好的茶图像们，并督观察喉细胞恢的结烟构。蹈2.亲将4它0央×仙微分渡干涉返差物穴镜旋绢入光迟路，贡并调昏入相辞应的部渥氏更棱镜啄即N泼乱2飘。调厘焦距柏和起糊偏镜陕使其圣与检摸偏镜疯正交倡，产姓生最泼好的判图像听，并搜观察学细胞围结构助。洞六顾、矛注意军事项宫：故1.海选取沈的载浊玻片射的厚仇度在记1m锁m左岭右，恼不要结太厚夸；要胀清洗晌干净西。华2.妨样品贿制备聪时，娇防止艺产生岸气泡鸭。个七超、始作业棍:拒1.块根据壤所观鉴察到熄的细预胞，粪画一情个口利腔上饿皮细换胞图蜂，并宵且注渡出各狂部分模的名糖称谨.络实验行三次、口肿腔上扒皮细茶胞的喷荧光柔观察持一、猾实验箩目的瓶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稍处理止的材规料,母可用型两种弊方法并制备模染色掘体标乒本弦1）浙、外第一倦种方纷法,佳涂片海法:阶（演1）正固定傲：将翼后低需渗好娃的材敌料，饭直接榜用甲黑醇：阵冰醋斧酸（丢3：英1）院固定抛液固赵定3接0分容钟以女上铺（抽2）带涂片务：将殃材料捐放在肿预先赛用蒸扛馏水姓浸泡嗓并冷擦冻的耗清洁抢载玻虾片上贷，加针1滴剥固定减液，脆然后翻用镊挡子迅子速将笋材料证夹碎粒涂布川，并享去掉洗大块庙组织控残渣程（密3）购火焰恒干燥手：立筐即将抚载玻乏片在年酒精返灯火茂焰上芽微微崇加热屯烤干组（奔4）蹈染色或：经剑干燥榜的玻稼片标脊本，梯用似Gi寻em岛sa奏染色乞液染逐色3系0分估钟，担然后瞒用自鬼来水虑细流贸冲洗届，甩层干水赛珠空突气干没燥。过2）图、第玉二种事方法趟，悬惯液法千：津（1期）制升备细绕胞悬糠液：厉倒去叠双蒸随水，炸用镊形子立锅即将太材料蛛夹碎叛形成巨细胞处悬液情（2炉）固碧定：厘向细墙胞中尽加入邀新配千制的惧甲醇翅：冰叮醋酸且（3驴：1晌）固见定液佳1-缓2m矛l，冤使成使细胞谣悬液冷（3串）去京沉淀潮：静兰置片址刻使材大块狗组织棍沉淀躁，然希后取监上层伐细胞织悬液参于另愈一个夹小瓶变中。福（4济）去易上清著夜：评将上责层细茎胞悬封液静坏置3房0分探钟左敬右，杨即可荐见细殖胞沉佳淀，权用吸匆管轻目轻吸跟去上疑清夜惭，留敬约0倚.5欲ml增左右钟细胞锹悬液攀置备脖标本绿(5照)标透本制反备:客在一膝张经黎过充播分洗聚净脱衬脂,北并预嗽先在谦蒸馏助水中作冷冻内的清海洁载杂玻片夏上,娇用吸弯管滴槐2-络3滴透细胞康悬液涉,立承即将蒸载玻你片一探端抬榨起,昏并轻祥轻吹泻气，浩使细稀胞迅伪速分字散，辟然后脾在酒泥精灯闭火焰闯上微宾微加喝热烤乞干。俩（6妹）染钳色：废同涂骡片法搜（4喉）鸟7、培在显露微镜黄下寻议找典柿型的滥中期青染色搂体，侮注意纽观察混中期泰染色泻体的陡长臂芝、短洋臂和廊着丝杏粒位搬置，被并尽押可能务找到汗具随条体染帐色体民。凶实验搅步骤料流程椒如下银：取材绿预处铅理破前低厌渗毯固定减穴这顾拣腰烘致冲洗辽温漠胶支医尚抱酶钞解去胜壁早酶解涝去壁汗后低档渗拜涂片稻法核悬液丙法制霉备细投胞悬性液畏淘岸贸闭灵脖最中齐决隶句醒亩固厨定疮固定已去沉弹淀卡浑遵刃缎曲止招侧谨睁击按品会涂贷片扰细胞暗悬液膊去上伴清送遇倡夫状叫赶环界冒凤陵郑屡锹火喝焰干业燥流火焰做干燥进制片屯请哨架制诞盈乒锈就扰谅猾语伙G荐ie获ms续a染距色黑Gi系em做sa屯染色长秆瑞政看煌族库榨趣粒绿换偿缎冲滤洗填冲洗塞届接牧蜘旱财哨售魄绵钞彻铸花空朴气干励燥店空气码干燥弄扰招欠野笨抹膊映鱼嫁党隶接与镜币检蓝镜检用六、航注意粱事项陕：符1、历预处算理是险很重之要的找一个垫步骤勇，必雅要时怪可将坦预处烂理药筋品直蛇接加述到培嚼养皿独内进趟行活刃体处赔理3剃—筛4小手时，朗以便码获得丰更多湾的中等期分材裂相桐。喊七棵、作蜜业：县1、我中期券染色魂体具论有哪鹅些形饭态特智征？牺2、保绘制愚一完取整细恰胞并婚带有桶随体急的中放期染家色体虏图娱实验敞十四堵、忍细胞例凋亡雅一、上实验臭目的知：列1、坑掌屋乡凋亡逗细胞册的形个态特族征沸2、苹学会抢用荧竹光探柴针对门细胞乱进行将双标豪记来伍检测臣正常书活细轧胞、迎凋亡性细胞蒜和坏同死细池胞的束方法咱二、朴实验看原理混细胞愁死亡院根据授其性钩质、贩起源控及生羞物学执意义周区分倒为凋奥亡和狮坏死何两种奉不同而类型挨。凋姓亡普胡遍存唯在于留生命仁界，持在生顷物个蚕体和偶生存振中起稍着非女常重翁要的拆作用勾。它窑是细乞胞在猛一定铅生理每条件蜂下一鼓系列至顺序惹发生惕事件讨的组贯合，哀是细容胞遵倾循一杠定规犯律自阵己结唐束生脚命的尘自主陆控制臭过程畏。细种胞凋剩亡具统有可卖鉴别剑的形砍态学庙和生严物化鲁学特匠征。庸在形郑态上顶可见辟凋亡处细胞揪与周政围细侧胞脱批离接谁触，查细胞仿变园锄，细逃胞膜削向内涨皱缩笋、胞圣浆浓删缩、配内质艰网扩乳张、幻细胞继核固候缩破首裂呈认团块变状或革新月船状分乘布、桌内质厅网和暴细胞珠膜进扎一步凯融合件将细叉胞分评成多姨个完暑整包锦裹的杆凋亡纤小体圾，凋使亡小叙体最膏后被驻吞噬瘦细胞修吞噬尝消化补。在执凋亡迟过程孤中细接胞内扑容物母并不巧释放爆到细兆胞外印，不漠会影窄响其沃它细交胞，么因而炎不引仙起炎屋症反秩应。兆在生殖物化宗学上伙，多样数细缝胞凋盛亡的熊过程庸中，法内源马性核难酸内嫂切酶秘活化岸，活迅性增悼加。畏核D久NA笨随机俭地在豪核小宽体的稼连接引部位豪被酶陵切断泄，降严解为盲18拐0-你20烘0b宴p或昌它的梨整