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文档简介
11.220
41DB22
22/T
3111—2020
RT-PCR
Detection
quantitative
calicivirus
2020
2020
吉林省市场监督管理厅
DB22/T
2020前 言
20001.4-2015
DB22/T
2020猫杯状病毒检测
实时荧光
RT-PCR
法
范围
规范性引文件
GB
19489 实验室
GB/T
27401
缩略语Ct
Cdna （Complementary
acid）DMEM
Eagle's
Reading
Frame）
RT-PCR （Reverse
chain
原理进入延伸阶段时，Taq酶发挥5’→3’的外切核酸酶功能，将探针降解。探针上的荧光基团游离出来，
试剂和材料
试剂
DB22/T
2020除有特殊说明外，所有实验试剂均为分析纯。实验水应符合
GB/T
6682
DMEM
阳性对照，为猫杯状病毒的细胞培养物或非感染性体外转录
RNA。
RNA
water）。
材料
离心管，1.5
mL、15
mL
50
mL。
吸头，200
L～1
L、20
L～200
L、2
L～20
0.5
L～10
L。
RNA
L～1
L、20
L～200
L、2
L～20
0.5
L～10
L。
RNA
1.5
5.3
引物和探针引物及探针时配制成表
℃保存，6
个月。表1
引物序列和浓度
仪器设备
℃。
高速冷冻离心机，12
000
r/min
可调移液器，200
L～1
L、20
L～200
L、2
L～20
0.5
L～10
L。
天平，感量
0.01
g。
荧光定量
PCR
扩增仪。
样品7.1
样品的采集
DB22/T
2020
7.2
样品的处理7.2.1
口鼻拭子的处理
r/min
500
RNA
7.2.2
组织处理采取少于
500
1.5
mL
RNA
试验步骤8.1
模板的制备
RNA
cDNA
8.2
反应体系
表2
反应体系8.3
反应程序
将荧光定量
PCR
PCR
DB22/T
2020表3
反应程序
结果判定9.1
结果分析条件设定9.2
质控
9.3
结果描述及判定9.3.1
阴性判定
Ct
9.3.2
阳性判定
Ct
值≤35，出现特定的扩增曲线，表示样品中存在
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