细胞生物学试验篇

实验篇实验一细胞的形态观察及其大小测量【实验目的】1、通过对原核和真核各种形态细胞的光学显微镜观察，了解细胞的形态及其显微结构；2、学习显微测量的方法，对细胞的大小有一直观认识。【实验用品】普通光学显微镜;目镜测微尺;镜台测微尺;载玻片;盖玻片等。【实验材料】小白鼠肝细胞切片;鸡血红细胞;蚕豆叶片横切片;洋葱。【实验内容和方法】(一)细胞形态观察l、动物细胞的观察（1）人肝细胞切片：在显微镜下仔细观察肝细胞的形态构造。注意肝细胞之间的界限、细胞的形状、细胞核的形状和数量、核仁的形状和数量、细胞质的形态构造以及细胞质和细胞核染色的区别。（2）鸡血细胞涂片的观察：注意观察血细胞的组成；红细胞、白细胞、血小板的形态特点。2、植物细胞的观察（1）取蚕豆叶片横切片的观察：注意表皮细胞和叶肉细胞的基本结构。（2）洋葱表皮细胞的形态观察：用镊子撕取洋葱表皮，滴一滴蒸馏水，盖上盖玻片。在显微镜下观察的形态和结构。（二）细胞的大小和测量无1、上测微浇尺的援使用猜目镜土测微萝尺是争一块芒圆形原玻片后，中净心刻亚有一漂尺，榜长5惹～1宋0m荡m，粉分成石50山～1钥00川格。闭每格挥的实顺际长摩度因纵不同铸物镜叨的放丑大率丛和不近同镜袍筒长躺度而俩异。缓镜台畅测微道尺是嫂在一目块载瓜玻片套中央颤，用块树胶菊封固矮一圆迹形的减测微势尺，董长继1m渡m守或嗽2m舞m逆，分钓成1夹00绕格或瑞20揪0格妥，每偶格的索实际鱼长度仪0.及01柄mm烛(1市0古μ压m)咱。当你用目膊镜测性微尺浑来测诵量细样胞的尺大小集时，叮必须石先用链镜台瓶测微哪尺核国实目绢镜测询微尺曲每一横格的降长度篇。方苦法如雨下：欣(1戏)卸小下目叫镜的汉上透霜镜，仇将目园镜测肢微尺孩刻度录向下疯装在萄目镜候的焦断平面赚上，乱再旋稼上目牙镜的哀上透棒镜。肢(2复)将兵镜台晒测微湖尺刻福度向屿上放寇在镜类台上邀夹好扇，使袍测微提尺分躺度位俱于视脂野中墨央。牵调焦鼻至能碑看清恰镜台木测微莫尺的左分度打。仰(3竭)小恼心移熄动镜幕台测赔微尺铜和转景动目疲镜测兄微尺筒(如残目镜袄测微诉尺分摊度模茄糊，挨可转川动目依镜上挨透镜值进行速调焦喉)，遥使两毫尺左舌边的筑一直尺线重笛合，歉然后草由左挑向右笛找出肯两尺蜓另一授次重仗合的天直线贼(如扩图所先示)断。钓(4胳)记听录两链条重待合线就间目敢镜测拾微尺虑和镜婆台测捡微尺圾的格践数。菊按下垂式计碑算目绣镜测白微尺白每格内等于辱多少送μ抗m：蔬诚间0粱1笨2白3肯测定晶目镜评测微个尺每奋格实酷长的诊图解堪上尺词：目穗镜测响微尺迁；下颂尺：如镜台孟测微碰尺挖镜台晓测微碰尺的纪格数延夏目镜雪测微秤尺每悔格的礼微米椅数=适你——户——列——陷——窜—×狗10劝柳柄孕破撞蜘例猴卫节采电目镜淡测微母尺的穷格数搭例如颈，图盏中镜阿台测切微尺震1格形=目呆镜测枯微尺嘴6格闯，代烛入公漂式得君：悼目镜背测微蚕尺每线格=炮1／炭6巩×叉10次μ梢m=拥1.艳66管μ哥m革(塔5)非取下朴镜台恢测微愚尺，溉换上州需要油测量匀的玻陷片标鸣本，从用目抱镜测内微尺同测量砍标本守。寄2、扛计算荣：根多据测币量结库果计续算各辉种细不胞及丰细胞析核的贿体积打。努椭球鹊形：列V=乒4跳π聚ab法2／梨3吴谷a签-长缸半径习科b-穗短半油径岛圆球具形：玻V=合4／怕3献π皇r3糕绸而r颤-半品径齿圆柱寿形：保V=面π疼r2疯h往缎葬流r馒-半投径州才h从-高输【早作业隶与思好考】撕1、营血细坟胞分崖为哪阵几大警类？洪分别文描述骗你看叶到的耳不同辟血细搜胞的昌形态押，并衣阐述络其功颠能。滩绘图流。样2、冤任意灵选择盘你所龄看到矮的动都物细滔胞和与植物政细胞石各一佳个，聋绘图蚕并进云行适鞭当标宵注，岁测量握其大近小，谈并比昆较动稿植物僚细胞亿大小咐的差泉异。圾3、臭在不曾同的贱放大馋倍数禾下，耐所测敢得的嚼细胞白大小烟一致腔吗？晃你认介为在痰哪个初放大乖倍数防下测够定得辩比较离准确勺？为很什么遮？贵实验炎二阶猴PA位S描（勉Pe琴ri颈od章ic堤A牢ci翁d沙S钩ch倚if委f）敞反应抄显示岔糖原呜和其决它多富糖物区质兵【发实验毁目的哈】款1、季熟悉简PA键S法立原理主及操裤作步扶骤；于2、猾观察棍PA吨S反杏应的苹染色摔结果订，并纱观察宜多糖钻在组锄织细惕胞中痛的分旗布。印【吐实验姑原理沟】针多糖膝(p专ol僚ys赛ac买ch兴ar番id斤e)妨是由砖多个裙单糖薄分子愉缩合催脱水啊而生绪成的君化合救物。丑广泛旋分布展于动秧、植完物界伪。一姑些不引溶性辣的多米糖构阶成植失物和划动物黎的骨携架，贿如植瓦物的娇纤维叙素和帅动物章的甲约壳素缠，一慈般称哪为结迎构多尊糖。窜另一才些多顺糖在零生物让体内果作为故能量库贮存朋，如蓬淀粉籍（植恭物）终和糖叉元（漏动物饲），猛在需察要时暂可以族通过陷生物等体内遍酶系贫统的哄作用碌分解浩，释刚放出松单糖扬。还洒有许敌多多雹糖具桌有更挖复杂嚼多样披的生暮理功邪能，蛾如粘跟多糖浆、血谁型物某质等衫，它历们在侄生物馆体内傻起着宪重要日的作驾用。化酒淀粉集和糖奏原均虾由D冲－葡绑萄糖痰的分势支或磁直链肆组成牙，过受碘酸粗是一驰种强衬氧化烤剂，余能将丽葡萄骨糖中摆的乙淘二醇岩基(丢CH棒OH预-C母HO键H)趁氧化虫成两槽个游渐离的落醛基气(-团GH伞O)劫，游龄离醛戴基与袍Sc怖hi撕ff统试剂授反应静生成希紫红环色产拔物。浇厉【问实验伤用品自】烛(一贴)试街剂：碧1、碍过碘油酸酒跳精溶享液：阀取过货碘酸晃（H闸IO加4敌·衫2H划2持O）但0.拦4g租溶于籍35仆m怀1纯泽酒精胞中高，加探入个5扰m绪1淡的逢0.幅2M食醋酸虑钠（匆醋酸袄钠淘2.举72贺g裹溶于童10那0火m拦1蒸黄馏水睁中）唯，再板加入欧15阴ml赛蒸馏拘水。暖溶液艇配好屯后保解存在情0润℃泄～德4锋℃壳的冰敏箱内艰，并箩加黑们纸保堡存，拆此液谎如显贱黄色脊即失好效。脑2.红Sc这hi舰ff临试剂刘：将宽0.肺5安g让碱性谦品红己加入票10筑0m施1煮喊沸的渣蒸馏斤水中话，时岸时摇诱荡玻哭璃瓶除或者著搅拌崭，煮盾5m薄in倦，使辟之充受分溶股解；粮然后穷冷却根至发50资℃值时过示滤到英具有刊玻塞武的棕贱色试埋剂瓶乌，加洁入1府0m词l的委lm荷ol葡／L话的H脾Cl画，冷懒却至高25淘℃属时加煤入基0.喘5g时偏重器亚硫睛酸钠维，在伏室温佩黑暗泼条件壤下静关置2兰4h挽，其别颜色碗呈褐婚色或奔淡黄闯色，轮加活剂性炭根0.闸5g妙剧烈走振荡柴摇匀董1m曲in神；过龟滤，睁滤液桂为无灵色。淹置棕访色瓶表密封如，外禽包黑悦纸，冤4弊℃挪保存母。本遇试剂哭可提格前一冰天准盈备，泰此液和必需乘保持探清澈孝透明介、无逗色也白无沉万淀，亏容器打要小桨，装宣满后推仅留钱很小香的空远隙，党其中揭不应疗有任有何氧堡化剂辰，不委要过比长时卷间暴饲露在藏空气验中。泄如有忍白色这沉淀杆就不坦能再普用，朱如颜斑色变摔红可妄以加去入少元许偏招重亚存硫酸毒钠，寻使其菌再转可变为武无色绍就可晶以再买用。嚷3、回亚硫织酸水紧溶液颈：取罢10嚼％偏虏重亚裕硫酸迁钠N饱a怖2件S苦2叼O要5变（或充K活2啄S按2抗O铁5才）2若0m塞l、学1m耕mo锻lL景-1钻H器Cl剧2促0m薪l和斩40泡0m叹l纯少水混赏匀即稿可。疤此液设使用这前配匀制，状否则像会因局SO式2逸街出失杆效没。（阅此液醉中所漫用的懂偏重侮亚硫窝酸钠教或钾掌要与净Sc嘱hi睬ff贝试剂帮中所拾用的黄相同氏）：恶4、体苏木杰精溶站液常位用的增有5菊种，摸其中但德拉钉菲氏右苏木薄精染屑液(公De趟la戴fi简el姻d韵苏木驻精染堵液)谈配法辛如下垮:相甲液起（苏凑木精早5g剩、无素水乙捉醇3瞎0m茶l）天乙液市（铵昆矾，鼠即硫哪酸铝殿铵饱嫌和水态溶液淋：比疗例为输1g哈硫酸态铝：残11壮ml拴水，烂用时珠配1黎10信ml概,取孤10山0m志l）抄丙液贵（甘走油1割25东ml辫、甲拆醇1虹25苍ml失）。僻配法辅如下牧：1宣.将馋甲液羡一滴许一滴毕地加员入乙目液中倒，并孟随时伐用玻锣璃棒羞搅动狐；2肥.然哨后暴造露于后阳光友和空饰气中何约1肆周到劳10滴天；休3.丢加入主丙液各；4姻.将横混合慕液静址置2吉个月谷至颜碌色变吧深为析止（牧可过室滤）吴，此响液成犹熟后联须置炊于阴殿冷处碰塞紧载瓶口叨，可馋长期辰保存面使用禽，使灾用时叼可将懂染剂两1份辉用3华～5收份蒸麻馏水采稀释凑，则虎染色享后分童化更击明显惜。黎５、锹梯度星乙醇英溶液缸：1忆00来％，躬95贵％，槐90痕％，弹80佩％，找70代％，亡50赚％各旨两份颜。一累份用宗于脱鞠腊复涉水，排一份蚀用于叠脱水归。奴６．拨二甲箭苯盗7、磁10匆0%兵乙醇横+二姓甲苯柔（1哪：1基）别（农二)杂）芦用具法：扎载玻脸片弄、盖闭玻片视、染专色缸鸽、显帅微镜腥、绣小烧他杯、厉胶头傲滴管管、镊优子、正刀片械鼓（三舍）材荡料：宽土豆母；你小鼠宴肝细药胞石挎蜡切炭片变【可实验芒步骤筛】止（款一泡）病土豆辰切片楚的观扒察丝制作市土豆渔徒手床切片杯踪→赠过隔碘酸显处理湿15扬～3忍0m臂in箱践→客7决0%伤乙醇烫1掀mi街n陡→况s治ch票if诸f试顺剂造15钉m趁in杰雅→欺亚金硫酸川水漂铜洗2慕～3愉次管→匙蒸虽馏水逐漂洗凡丰→利镜曲检景（二贪）小览鼠肝养细胞系切片倚的观勒察哨陆取鼠碰肝石在蜡切恼片脊→久二窃甲苯征脱蜡尾约1资0m第in朽场→拐二斧甲苯上+1誉00究%乙鼠醇（冻3董mi污n）肤→轧梯度太乙醇治脱二贸甲苯新，在稀各浓等度乙袖醇（捡10辞0％严，9疗5％冬，9悬0％旁，8塑0％贿，7芹0％恰，5剃0％偷）中角约2伪～3陶m垮in吨巷→参过蹈碘酸送氧讨化1道5～框30摩m愧in闯派→债蒸馏插水漂歌洗尊→鸣S糠ch究if跑f试颈剂1翁5～枯30茄m疗in怖受→氧亚硫提酸水虎漂洗聚2～抚3次播权→读蒸馏猜水漂旅洗不→珠苏壮木精犬染色升10脸m份in篮冲→马流牺水冲吗洗即→左梯度池乙醇凭脱水俯（5振0％嘉，7交0％石，8义0％仪，9冶0％墓，9健5％械，1于00延％）崖，在准各乙金醇浓正度中过约2织～3冰m被in询其→恨10高0%沾乙醇良+二律甲苯袜2～点3兔mi凶n蔽→委二甲悟苯适搭度透今明喷→搂指栏甲油兽封片裤按→乖镜坐检借【拍作业蔬与思护考】齿1、终为贸所观木察到蓝的土谜豆切汁片和墨鼠肝第切片袭绘图盖，标罢注其偶多糖蔬的位绪置，奔并描茅述这收两种达细胞伯的多僚糖分些布特疾点。沃2、薯影响熄PA斗S反色应染键色效迹果的翠关键钢步骤斯是什侵么？终3、蛙如何切制作完徒手逐切片倚？应踢注意忍什么疮才能鞭得到赖薄而饰均匀车的切垂片？锲而舍之，朽木不折；锲而不舍，金石可镂。殃【侮注意奔事项回】锲而舍之，朽木不折；锲而不舍，金石可镂。桃1.威过碘傲酸氧我化作烦用时罚间稍孟长，于会使驰反应汉更加社充分白。哥2.难Sc恢hi垂ff勉试剂掘作用清时间技略长蛋，会筋使染架色效袋果明丧显，琴但过否长将素导致接染色范太深茫，也饿不利植于观意察。挪3.混二甲稻苯溶添解性批很强吴，时兔间要诵把握壶好，惯前者堂以脱伶蜡为葛准，砍不要饥有空轰气，放后者胞以透救明为瓦准。重如果矩片子皂变黑矿，重爬新放糊回二友甲苯份，再闭透明娘一次屡。准4.密试剂逼重复搜使用恋后，犯实验乎结果筹不明宝显（绩脱蜡慎不完注全、事染色矿不好常等）以，因棋此在予实验芬中要轧检查详各试蓝剂是党否干涨净，创如果肚污染蝴严重熄，一鸡定要缝更换蜡。挠实验捎三昏叶绿扫体的捏分离币与荧疮光观爸察交【锅实验膀目的北】获1乐、思通过皂植物滚细胞西叶绿谊体的涌分离缸,州了解架细胞手器分抖离的谦一般输原理刻和方席法.蓄2裙、隶观察秒叶绿华体的扁自发柜荧光俱和次育生荧狮光,问并熟铃悉荧钞光显到微镜预的使弃用方单法.梁【宜实验恩原理亡】驾将组岸织匀舍浆后塌悬浮屠在等府渗介事质中员进行输差速白离心僚，查是分插离细挤胞器尊的常献用方泉法室。岂叶绿鹿体的植分离现应在驳等渗筒溶液碍(0郊.3注5m翠ol朋/L堆氯化群钠或瞒0.北4m加ol你/L则蔗糖钻溶液洒)中待进行亮,配以免倚渗透修压的谁改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末、摘

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骨裂和股荐骨，图切去骄两端拿。枝（3尺）取夜骨髓疮细胞蕉2%妇柠檬启酸钠怎溶液至1m举l尊1%掏柠檬敏酸钠款溶液由1m拾l洁用1命ml故注射溉器吸役取柠拜檬酸妨钠溶革液，视通过背针头俱将溶堵液注裤入骨蒸髓腔壳，冲若出骨址髓细锦胞置宣10氧ml疲离心蛋管中诞（细族胞冲工净后扬骨髓缺腔由采粉红屡变为产白色雹）；棵摘掉土针头跟，用个注射醉器筒恩轻轻绑反复帐吸打确，使棵分散捐成单够个细拍胞。苦（4狮）低钥渗处伴理瓜预热堆及低原渗水乔浴温袭度：晒37堤℃邮低渗名时间瘦：3劈0m溜in拆预热日及低因渗水猎浴温角度：奇26季℃占低渗庙时间绳：3券0m血in顽视细送胞多躁少加呜入7眼～9阀ml馆预垫热的孩0.巨4%扣KC货l溶芹液，牛在水间浴中向低渗墓处理刑。浆2.超1诊00烂0r傅pm绳离心手8m局in乞。翅3.谅弃刊上清道，沿桶离心盼管壁咽缓慢绞加入芽新配积制的树甲醇墨：冰还醋酸穗（3馆:1腾）固汁定液朱5m浇l，杰注意验不要犁冲动党细胞小团块颠。加肿完后咳立即腾用吸静管将灯细胞经轻轻旦吸打俱均匀伸，静崇置固述定2醉0m旅in宝。如恼此反什复固固定2肺～3鸽次，阳每次坏20舒mi省n。膜4翠固定此的细著胞经夕离心沸后，欧吸去蝴上层艇固定俱液，家视管井底的船细胞钱多寡予加入觉少量低新配巾制的虚固定堵液，展细胞耳团块讲轻轻来吸打奏成悬瞧液（添注意蓝：吹奶打不甩要过竟于用尘力）董。先5.卵在母干净咱并预屠冷的碍载玻书片上工滴2完～3贯滴细耐胞悬葡液，键干燥姻。（钞注意邻：滴偷片时帽滴管亏离载辫玻片切有一臂定高引度有量助于导染色滥体分扫散）钉6.神将狼玻片厚细胞炕面朝林上水叔平放寨置，抢滴加得1:倾10历G既ie纤ms坏a磷逃酸盐落缓冲误液3阵～4困ml外，染液色1赠0m英in怨。棵7.绣冲银洗掉光染液估，干碑燥后赛镜检缘。涨【结疫果分溉析】越（1宫）样恢品的当染色拾体数醒目是粒多少杆？1财9对犹常染兰色体千，1忧对性王染色倦体。心共4五0条活（2敞）要准成功沈制备若染色劲体标男本，选在操始作中袭应注欠意哪惧些问演题？胖【实铜验提询示】反过去其实验担中曾伤经出梳现的稼问题毅（1记）染无色后灾发现忠没有鸣骨髓夜细胞壳原因迫：未按能将哈细胞面从骨区髓腔程中洗偿出；思离心残不慎偿造成镇细胞甜流失侦；低泰渗过桌度造踏成细览胞破叹裂，谦染色撇体流朵失；峰冲洗边不慎隶等画（2成）染点色体夺分散画不佳基而造具成无韵法计型数慧原因毙：低鸟渗控丈制不气好造航成细逝胞体息积过倦小；牙干燥名过度叠等漏注意侵：随叮时镜坏检才损能确罪定各廉步骤预是否兄存在笑问题笋低渗辜与离减心等蕉步骤眨的操增作要芬轻。袍凤观察版细胞两的标乐准为威：剩1．番细胞况完整棒，轮转廓清虹晰，孤染色单体分豆布在印同一勤水平贯面上语。慌2．认染色私体形络态和要分布最良好绣。压3．瓦最好时无重略叠，俭即使病有个服别重兵叠，痰也要般能明回确辩弱认，赌以免胆差错潜。由4．济所观交察的慨细胞源处于乔同一霜有丝为分裂邪阶段涛，即剥染色挣体螺拣旋化歪程度北或染继色体默长短虾大致夫一样柱。史在所挂观察析的细祖胞周葬围，莫没有振离散弃的单患个或仗多个杀染色胖体存牺在，撕以免灯影响狸计数见。守【食作业绪和思质考辛】爷选择贩染色洞体清溉晰，就分散用度好蕉的中啦期分炼裂相家，计望数染村色体狂，显慨微摄贴影，俭打印工出照明片。怠在制傲备小敏鼠骨烟髓细胜胞染岸色体术时为主什么伪要进铃行预供固定缠？浴因为院在之男前你版得到敲的染脖色体兰都处蜻于不饼同的臭分裂茂期，扩预固始定是溜为了访使这获些细页胞及肆其染麦色体模都固昼定在晌当前胖所处带的时就期，愚便于什观察倦。其薯实质塘就是粮把细谅胞杀扫死，垫使其问无法卵继续隙进行挽有丝揉分裂喘。天才是由于对事业的热爱而发展起来的。简直可以说，天才──就其本质而论──只不过是对事业，对工作的热爱而已。信综合天才是由于对事业的热爱而发展起来的。简直可以说，天才──就其本质而论──只不过是对事业，对工作的热爱而已。彻烟草对愈伤至组织心细胞活的培阳养及以细胞突凋亡座的诱弯导和亡观察赴【蜡实验顾目的站】奉1.庭氏将烟刺草的删悬浮杰细胞三诱导子发生辛细胞甲凋亡余。骂2.条翅了解杜和掌窜握凋涛亡细骡胞的倘琼脂愉糖凝晚胶电娘泳检厘测（撑DN瞎A梯买状条胡带）蜜。眨掌握糖凋亡裹细胞亿的形在态学咸观察涨方法盲。华【坚实验术原理例】狗细胞损凋亡哈被分壳为两阀类：豪受体产介导引的细狗胞凋嫩亡和紫线粒未体介泳导的棉细胞城凋亡参。本拆实验释主要只涉及鼠线粒摩体介幅导的企细胞州凋亡塌。凋目亡的利细胞深可用专多种速方法负来检盖测。粱凋亡箱出现挺时，桨细胞殊内源雁性的醉核酸涉内切前酶被宴激活延，将扯染色刚质D挖NA啊自核穴小体站间降挎解，艳形成怜相差山18端0-耕20津0b铲p的段大小阅不等滥寡核智苷酸妻片段幅。提摩取凋迫亡细鞠胞的卖DN浇A，沸经琼较脂糖雀电泳脑，分盈离不拘同长蚕度的膛DN异A片杠段，撞再经册溴化粪乙锭沙染色豪，在仍凝胶悟成像议仪下锻观察旷，可科见特塌征性劳的梯社状条询带。勉这就默是凋乎亡细爹胞的国琼脂指糖凝冬胶电语泳检经测。连【菜实验馅步骤慢】茧（一茫）细膀胞凋贵亡的格诱导切1.蚊用48帅℃滨热激摇烟草播悬浮传细胞街2、贞4锄、8伙小时温后，意恢复鼻25妙℃震培养你12正小时尖，用现于细脑胞凋券亡的悄检测庭。处2.愁4匪℃讨处理巾烟草少悬浮死细胞描2、苗4得、8剩个小析时后粮，恢但复泉25梅℃聋培养蹲12陪小时翁，用户于细妇胞凋鄙亡的掉检测功。列3.惩蜘20锤0、妙40皆0、而8溪00针pp桑m的慈乙烯双利处访理烟栏草悬吵浮细党胞1蛙2小耕时后挎，用既于细柴胞凋激亡的拐检测堪。穗（二发）凋稿亡细木胞的捞琼脂踩糖凝郊胶电起泳检百测快实验立用品叔1.失诊材料栏：已漂被诱乱导凋岁亡的郊烟草菜悬浮鸡细胞抓2.白壮试剂纲：琼抵脂糖万，蜓2船×芳CT苹AB拒缓冲肌液（辣2%粥CT锋AB挪、1愁00沿mm尸ol糟/L酿Tr硬is便-H称CL迟(p罢H8逼.0减)、拿20录mm垂ol拒/L缴ED俊TA骆(p刮H8钳.0靠)、驰1.奇4m沃ol捐/L杠Na贿CL币、1雕%厚PV屡P）俗，遍氯仿赤，莲异戊包醇薪，讨乙醇落，要异丙椅醇岔，炼液氮浴3.括司仪器姐：绣高速鹊冷冻巴离心趁机坝，最恒温扰水浴鼠，螺电泳恩装置取实验词步骤杏在1代.5异ml亚E士pp现en赶do沫rf挂管中翼，加弃入5葵