微量凯氏定氮法测定蛋白质含量

实验报告实验课程：微量凯氏定氮法测定蛋白质含量学生姓名：xxx学号：xxx专业班级：xxx2017年4月11日实验背景：凯氏定氮法：测定化合物或混合物中总氮量的一种方法。该方法在有催化剂的条件下，用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐，然后在碱性条件下将铵盐转化为氨，随水蒸气馏出并为过量的酸液吸收，再以标准碱滴定，就可计算出样品中的氮量。由于蛋白质含氮量比较恒定，可由物质含氮量计算其蛋白质含量，故此法是经典的蛋白质定量方法。实验目的1、掌握凯氏（Kjeldahl）定氮法测定蛋白质含量的原理方法；2、学会使用凯式定氮仪。实验原理蛋白质是含氮的化合物。凯氏定氮法首先将含氮有机物与浓硫酸共热，经一系列的分解、碳化和氧化还原反应等复杂过程，最后有机氮转变为无机氮硫酸铵，这一过程称为有机物的消化。消化完成后，将消化液转入凯氏定氮仪反应室，加入过量的浓氢氧化钠，将NH4+转变成NH3，通过蒸馏把NH3驱入过量的硼酸溶液接收瓶内，硼酸接收氨后，形成四硼酸铵，然后用盐酸标准溶液滴定，直到硼酸溶液恢复原来的氢离子浓度。滴定消耗的标准盐酸摩尔数即为NH3的摩尔数，通过计算即可得出总氮量。测定出的含氮量是样品的总氮量，其中包括有机氮和无机氮。以甘氨酸为例，其反应式如下：滴下时起，继续蒸馏5分钟，然后将锥形瓶放低，使导管离开液面再蒸2分钟，最后用蒸馏水洗导管外壁，蒸馏完毕，取下锥形瓶准备滴定。（4）空白蒸馏：用移液管分别吸取2ml蒸馏水按上述操作步骤进行蒸馏。3、滴定蒸馏完毕，用微量酸式滴定管，以0.01mol/L盐酸标准溶液滴定锥瓶内溶液，溶液由蓝绿色变为淡紫色或灰色，即为终点。记录所用盐酸的量。实验结果处理1、实验数据实验次序实验试剂1空白2样品13样品2蒸馏水/ml100样液/ml011NaOH/ml555消耗HCl/ml0.050.850.80平均值0.050.8252、计算：若测定的样品含氮量部分只是蛋白质则：样品的总蛋白含量（%）=式中：A为滴定样品用去的盐酸平均毫升数；B为滴定空白用去的盐酸平均毫升数；C为称量样品的毫升数；0.2为盐酸的当量浓度（实际上，此项应按实验中使用盐酸的实际浓度填写）；14为氮的原子量；6.25为常数;100是配出的100ml消化液；10是面粉质量10g样品的总蛋白含量（%）=由资料知面粉含量如图该实验数据测得的蛋白质量略高出标准值误差分析与讨论1、误差分析（1）通常情况下，蛋白质含氮量在16%左右，其F值为6.25。但是，实际上不同来源的蛋白质的氨基酸组成差别很大，含氮量的差别也很大，如乳制品、面粉、花生的蛋白质含氮量分别为15.67%、17.54%和18.32%，则它们的F值分别为6.38、5.70和5.46。而计算中取F为6.25，会导致蛋白质含量值偏大。（2）样品在空气中易变质；（3）实验用于滴定的HCl浓度过高，导致空白对照组仅滴定一滴便达到滴定终点，易产生操作误差；2、问题讨论实验中应该注意些什么？①本法适用于0.05-3.0mg氮，样品中含氮量过高时，则应减少取样量或将样液稀释。②勿使样品粘于烧瓶颈部。放置液体样品时，需将吸管插至烧瓶底部再放样：如固体样品，可将样品卷在纸内，平插入烧瓶底部，然后再将烧瓶直起，纸卷内的样品即完全放在烧瓶底部。参考文献：中国知网>百科,凯式定氮法GB/T5009.5—2003食品中蛋白质的测定[S].北京:中国标准出版社,2004.鲁健章，孙丽华，周