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文档简介

实验十六病原学检查技术（二）

一、肺孢子菌瑞-姬氏染色及观察二、蔬菜中寄生虫检查：肺孢子菌瑞-姬氏染色法

1．肺组织印片，干燥待用。2．甲醇液固定5min；3.染色：1）加瑞氏染液，覆盖标本，2min2）加现配1：20姬氏工作液数滴，15～30min3）流水冲洗，（切勿先倾倒染料再冲洗，以免染料颗粒沉着），干后油镜观察。隐孢子虫改良抗酸染色法

1．将粪便在洁净载玻片上涂成薄膜，自然干燥。2．用甲醇液固定５分钟。3．染色：1）石碳酸复红液滴涂片上，５～１0分钟后流水冲洗；2）硫酸液1～５分钟后流水冲洗；3）孔雀绿液1分钟后流水冲洗，干后镜检。金胺-酚-改良抗酸染色法试剂配制：A液：金胺酚0,1g,石碳酸5.0g,蒸馏水100ml;B液：盐酸3ml,95%酒精100ml;（脱色液）C液：高锰酸钾0.5g,蒸馏水100ml;D液：酸性复红4.0g,95%酒精20ml,石碳酸8ml,蒸馏水100ml;E液：浓硫酸10ml缓缓加入90ml蒸馏水中，边加边F液：孔雀绿0.2g溶于100ml蒸馏水中。染色过程：1粪便涂成薄膜，干后甲醇固定5min；2加A液10-15min后水洗；3加B液1-2min后水洗；4加C液1min后水洗，待干；5加D液5-10min后水洗；6加E液1-10min后水洗；7加F液1后水洗；干后镜检。背景呈蓝绿色，卵囊圆形或椭圆形，呈玫瑰红色实验十七免疫学实验

目的要求：掌握寄生虫免疫学及基因诊断原理及优缺点，掌握常用方法操作技术技术操作:

1.弓形虫IHA2.COPT3.尘螨皮内试验弓形虫IHA

原理：可溶性抗原吸附于红细胞表面，与相应抗体结合发生凝集的现象。优点：操作简便，有较高敏感性和一定特异性。缺点：试剂制品欠标准化和商品化，易发生非特异性凝集。已用于多种寄生虫病的诊断和流行病学调查。操作步骤：1）

每孔加75ul稀释液（3滴）2）

第1行第1孔加25ul（1滴）阴性血清3）

第2行第1孔加25ul（1滴）阳性血清4）

第3行第1孔加25ul（1滴）

PBS5）

混匀稀释：从第1孔取25ul加到第2孔，依次进行6）

每孔加25ul诊断液，7）震荡1~2分钟，22~37℃2~3小时观察结果。结果判定：++++红细胞形成明显凝集块，布满全孔底+++红细胞出现薄层凝块，面积较上者小++红细胞部分沉积孔底，边缘松散，面积较小+红细胞沉于孔底，周围有轻微凝集小点—

红细胞沉于孔底，呈圆扣状，周边光滑整齐弓形虫IHA结果

COPT皮内试验（intraderminaltest，ID）

原理：属于I型变态反应。寄生虫抗原刺激宿主后，集体产生相应抗体，当同样抗原与该抗体结合后，导致肥大细胞和嗜碱性粒细胞脱颗粒，释放出生物活性介质，引起注射抗原的局部出现红肿。可用于多种蠕虫病及某些螨类引起的变态反应的诊断或辅助诊断。在寄生虫病流行病学调查中，主要用于初筛检查，阳性者再作进一步追查。该法简便、快速，但在多种

寄生虫病之间存在交叉反应。

操作步骤：将适宜浓度的无菌皮试抗原抽于皮试注射器内，皮肤消毒后，皮试针头针孔向

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