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文档简介

实验十七免疫学实验

一、IHA（诊断弓形虫）二、ELISA（诊断囊虫病）

IHA

原理：可溶性抗原吸附于红细胞表面，与相应抗体结合发生凝集的现象。优点：操作简便，有较高敏感性和一定特异性。缺点：欠标准化和商品化，易发生非特异性凝集。已用于多种寄生虫病的诊断和流行病学调查。（购自中国农业科学院兰州兽医研究所）

4℃保存期18个月2009.01材料：1凝集板2加样器3阴性血清4阳性血清5PBS缓冲稀释液操作步骤：1）选定3行，每行选4孔，每孔加75µm稀释液；2）

第1行第1孔加25µm阴性血清；3）

第2行第1孔加25µm

阳性血清；4）

第3行第1孔加25µmPBS；5）混匀稀释：从第1孔取25µm

加到第2孔，依次进行，最后25µm仍掉。6）

每孔加25µm

诊断液（吸附抗原的RBC），7）震荡1~2min，22~37℃2~3h观察结果。结果判定：阴性对照孔为（-）阳性对照血清效价不低于1：1024++++红细胞形成明显凝集块，布满全孔底

+++红细胞出现薄层凝块，面积较上者小

++红细胞部分沉积孔底，边缘松散，面积较小

+红细胞沉于孔底，周围有轻微凝集小点

—

红细胞沉于孔底，呈圆扣状，周边光滑整齐IHA结果判定：原理：是一种固相酶免疫测定技术。将抗原或抗体结合到固相载体（聚苯乙烯板或PVC薄膜）表面，再将样品和酶标记物与固相载体上的抗原或抗体形成免疫复合物，待反应平衡后，洗去液相中未结合部分，加入底物显色。酶：辣根过氧化物酶HRP)、碱性磷酸酶。底物：四甲基联苯胺(TBM)常用方法：双抗体夹心法、间接法、竞争法等。灵敏度高，特异性强，重复性好，操作方便快速。二、酶联免疫吸附试验（ELISA）ELISA基本原理材料：1、预包被板（含抗原）2、酶结合物（1号液）3、洗涤液（2号液）4、底物（3号液）5、显色剂（4号液）6、待测血清稀释液（5号液）7、终止液（6号液）8、阳性、阴性对照液、空白对照液9、湿盒

空白、阴性、阳性对照孔各1，分别加PBS、阴性液和阳性液各100µm1。1、待测样品2孔，加待测血清稀释液（5号液）各100µm，置湿盒中，37℃避光反应20min；2、洗涤：甩去孔内液体，每孔加洗涤液洗(2号液)3次，每次需停1分钟后再甩干。3、酶反应：除空白对照孔外，每孔加酶标抗体(1号液)100µm

。置湿盒中，37℃避光反应20min，洗涤，甩干。4、显色反应：加底物液(3号液)和显色剂(4号液)各100µm

，混匀，置湿盒中，37℃避光显色7min。加终止液(6号液)1滴，终止反应（蓝色变为黄色）并判读结果。

以空白对照调零，用酶标仪于450nm（63读取吸光度（A值）。当待

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