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文档简介
结核分枝杆菌检验技术目的要求1.掌握结核分枝杆菌形态、抗酸染色的操作与结果报告方法。2熟悉结核分枝杆菌的培养特性和常用鉴定方法。、器材和试剂1.菌种结核分枝杆菌。2.培养基改良罗氏培养基。3.试剂抗酸染色液、消佳净消毒液4.其他肺结核患者痰标本,载玻片,显微镜,香柏油,酒精灯,接种环,火柴等三、步骤和方法标本接种冷1)标本处理酸处理法:取痰标本1~2m于无菌试管内,加2%H2SO4溶液2~4倍量混匀后置室温放置30min,在此期间震荡痰液2~3次,使痰液化,离心取沉淀物接种。碱处理法:取痰标本1~2m于无菌试管内,加入40g/NaOH溶液2~4倍量后置37°c孵育箱放置30min,期间震荡痰液2~3次,使痰液化,离心取沉淀物接种。接种与培养:取消化后的痰液0.1m均匀接种于罗氏培养基斜面上,每份标本接种2支培养基,将试管150角斜置,370C孵箱培养1周后将培养基直立于试管架上,继续培养至8周。初次分离培养需要5%~10%c02。菌落观察与结果报告:结核分枝杆菌在L—J培养基菌落为干燥粗糙、颗粒状、乳白色或米黄色、凸起、形似菜花心或粟米粒。于接种1周内观察2次,以后每周观察1次细菌生长情况,注意菌落形态、数量、色泽变化和出现菌落的时间等◆斜面上生长的菌落在20个以下,应报告菌落数;若多于20个菌落数以“+”表示,具体报告见下:÷1+:斜面上生长20个菌落以上,占斜面14以2+:斜面上菌落生长面积占斜面14以上,1/2以下;3+:斜面上菌落生长面积占斜面12以上,3/4以下;4+:斜面上菌落生长密集成菌苔。形态观察涂片直接涂片和厚膜涂片:用接种环挑取约0.01m脓性痰或干酪样部分痰液,制成10mm×10mm大小的均匀薄涂片,或取上述标本约0.1m,制成20mm×15mm大小的厚膜涂片。自然干燥,火焰固定后,行抗酸染色,用油镜检査。冷集菌涂片:冷①沉淀集菌法:取痰液2~3m,40gLNaOH1~2倍量混匀。经高压灭菌20min(
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