实验活动生物安全标准操作规程

实验活动生物安全标准操作规程

杭州余杭邦尔医院检验科生物安全管理制度文件编号为YHBE-JYK-SWAQ-15，生效日期为2018年1月1日，版本号/修订号为1/3，发布部门为检验科。该制度的编制人为钟剑，审核人为王再岭，批准人为张延亮。该制度旨在规范实验室工作人员的生物安全操作，保障工作人员的安全。实验活动生物安全标准操作规程包括以下内容：1、实验室工作人员进入实验室工作时，应根据实验室生物安全个人防护的配备原则穿着适当的工作服或防护服、鞋套或专用鞋等。2、在进行可能接触到血液、体液以及其他具有潜在感染性材料的操作时，应戴手套（一次性手套），必要时戴防护眼镜，穿隔离衣。3、严禁在实验室中穿凉鞋、拖鞋、露趾和机织物面的鞋，实验室工作人员手上有皮肤破损或皮疹时应戴乳胶手套或双层手套。4、实验室工作人员工作结束或离开实验室时，应先消毒防护用品，然后摘除，随后必须洗手。根据医院感染科六步法洗手要求，在感应水龙头下流水肥皂洗手或使用酒精擦手。5、标本采集时，工作人员应遵循生物安全的要求，操作者均要穿工作服、戴手套、口罩。6、应使用与仪器匹配的真空采血管及一次性试管。尽量避免开盖以防微生物气溶胶的吸入，标本直接上机，构成全封闭系统。7、对产生气溶胶、高浓度或大容量感染性材料的样本进行高风险实验操作时（包括离心、混匀、超声物化和剧烈搅拌等），实验室应使用密封的离心机转子、安全的离心杯和样本存储容器，并只允许在生物安全柜或负压罩中开闭、装卸和操作。生物安全柜操作规程的目的是规范生物安全柜的操作与维护工作，确保仪器正常运作，以保障工作人员的安全。适用人员为临床微生物实验室检验人员。该SOP变动程序可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经专业主管、科主任批准签字。操作流程包括操作前准备和正式工作，其中操作前准备包括开启紫外灯消毒15分钟，实验人员应戴上乳胶手套，将准备放到安全柜的容器和材料的表面在移入前用70%酒精擦拭表面消毒，以去除污染。正式工作前让安全柜风机至少运行3～5分钟使安全柜内的空气进行净化。关闭消毒紫外灯，开启生物安全柜风机和照明灯，并将前窗开至合适的高度，并确认生物安全柜的运行是否处于正常状态。将本次操作所需的全部物品放入生物安全柜，洁净和污染物品分开放置。正式操作时，实验人员应缓慢地将双臂伸入生物安全柜内，并在至少静止1分钟后开始操作，以确保柜内气流稳定。操作时应尽量避免双臂剧烈运动和频繁在操作窗口进出。实验操作完成后，应及时清理实验物品，并对污染物和实验废弃物进行必要的包装和消毒后才能拿出生物安全柜。所有开放性容器必须加盖或密封后取出。同时，关闭玻璃窗，保持风机继续运转10~15分钟，并打开紫外灯照射30分钟。在使用生物安全柜前，应检查正常指标，包括风速、气流量和负压是否在正常范围内。若出现异常应停止使用，进行检修工作。操作时不要打开玻璃观察窗。在开始工作之前，要准备一张实验所需材料清单，并将工作所需物品放入生物安全柜内，以避免双臂在操作中频繁横向穿过气幕而破坏气流。放入生物安全柜的物品表面应用70%乙醇进行消毒，以去除污染。在打开风机5~10分钟后，待安全柜内的空气得到净化并且气流稳定后再开始操作。开始操作前，要先调整好凳子或椅子的高度，以确保操作者的脸部在工作窗口之上。然后将双臂伸入安全柜内静止至少1分钟，使安全柜内气流稳定后再开始操作。在操作时应按照从清洁区到污染区进行，以避免交叉污染。为防止可能溅出的液滴，可在台面上铺一用消毒剂浸泡过的毛巾或纱布，但不能覆盖住安全柜格栅。操作时应轻柔、舒缓，防止影响柜内气流。生物安全柜上装有窗式警报器和气流警报器两种警报器。当窗式警报器发出警报时，表明操作者将滑动窗移到了不当的位置，应将滑动窗移到适宜的位置。当气流警报器报警时，表明安全柜的正常气流模式受到了干扰，操作者或物品已处于危险状态，应立刻停止工作，通知实验室负责人，并采取相应的处理措施。在安全柜内不要放与本次实验无关的物品。柜内物品摆放应做到清洁区、半污染区与污染区基本分开，操作过程中物品取用方便，且三区之间无交叉。物品应尽量靠后放置，但不得挡住气道口，以免干扰气流正常流动。在实验操作时，不可打开玻璃视窗，应保证操作者脸部在工作窗口之上。在柜内操作期间，严禁使用酒精灯等明火，以避免产生的热量干扰柜内气流稳定，且明火可能损坏HEPA滤器。接种环可使用高温电热消毒灯消毒。在工作时尽量减少背后人员走动以及快速开关房门，以防止安全柜内气流不稳定。酒精、84消毒液等)对工作台面和工作区域进行消毒。②对于需要高压灭菌的物品，应先用适宜的消毒液进行消毒，然后再进行高压灭菌处理。在高压灭菌过程中，应注意灭菌器的使用方法和操作规程，以确保灭菌效果。③对于需要进行生物安全实验的物品，应在操作前进行适当的消毒处理，以确保实验过程中的生物安全。同时，在实验结束后也要对实验室进行适当的消毒和清洁，以预防交叉污染和病原体的扩散。④在进行消毒和灭菌时，应注意使用适当的防护措施，如戴手套、口罩等。同时，应将消毒剂和灭菌器等有害物品妥善处理，以避免对环境和人体造成危害。⑤在使用生物安全柜时，应注意定期维护和保养，以确保其正常运行和有效的防护效果。同时，应定期检查和更换过滤器等易受污染的部件，以保证生物安全柜的性能和安全性。⑥在进行实验操作时，应严格按照操作规程和安全要求进行，尽量避免操作失误和意外事故的发生。同时，应随时注意操作环境和气流状态，及时调整操作方式和位置，以确保实验过程的安全和有效性。夹紧，确保密封性能良好。（4）设置灭菌程序：根据需要选择相应的灭菌程序，按照仪器说明书设置好温度、压力和时间等参数。注意，在灭菌过程中，不要打开灭菌器盖。（5）启动灭菌程序：按照仪器说明书启动灭菌程序，等待程序完成后自动停止。（6）放气：灭菌程序完成后，等待灭菌器内压力降至0后，打开放气阀，放出灭菌器内的蒸汽。（7）取出灭菌物品：等待灭菌器内温度降至安全温度后，打开灭菌器盖，取出灭菌桶，注意不要触碰热的灭菌物品。（8）清洗灭菌器：每次使用后，应清洗灭菌器内部和外部，特别是灭菌桶和筛板等易污染部位。使用清洁剂或消毒液进行清洗，然后用清水冲洗干净并擦干。（9）维护保养：定期检查灭菌器的电源线、插头和开关等部件是否正常，若有损坏或异常应及时更换或修理。同时，定期对灭菌器进行维护保养，包括清洗、消毒和润滑等。使用高压灭菌器时，应均匀旋紧螺栓，使盖和容器密合，但不要过紧以免损坏橡胶密封垫圈。在预置灭菌温度时，通过顺时针或逆时针轻轻旋转温度控制器旋钮来控制温度。灭菌时间的设置应参考物品消毒灭菌参考表，将计时器旋钮按顺时针方向旋至所需的时间刻度上。在加热过程中，应打开放气阀，排放灭菌器内的冷空气，待有急速的蒸汽喷出时，关闭放气阀。当灭菌器内的蒸汽压力及温度升至预置值时，加热灯熄灭，计时指示灯亮，灭菌计时器开始计时。在灭菌过程中，应微调压力-温度控制器，使实际压力-温度值略高于预置值，确保灭菌效果。灭菌结束后，应关闭电源，自然冷却，待压力表指针回复至零位时，打开放气阀，稍等一分钟，打开桶盖取出物品。在使用高压灭菌器时，同类物品应装放在一起，不同物品的材质、性能不同，所需受热时间、灭菌温度、排气方式亦不同。如需混装时，必须以物品所需的最长灭菌或干燥时间为依据进行灭菌。敷料与器械同时灭菌时，应将敷料放在上层，器械放在下层。小包最好竖放在金属筐内，再放在灭菌架上。液体、培养基等容器在封闭的瓶盖上应扎一气针头，灭菌时间按其瓶装量而设定。装有物品的储槽，应打开筛孔，容器开口平面应横放于架上，便于容器内的空气被蒸汽置下排气式灭菌柜灭菌物品的装量占灭菌柜容积的85％，预真空式灭菌柜灭菌物品的装量占灭菌柜容积的90％。装放时不允许包与灭菌柜的内壁相接触，以免包裹渗透，冷凝水或堵截蒸汽流通。消毒板最上层的包裹与柜顶板之间应留7—8cm的距离，确保上层蒸汽的流动置换和均匀渗透。切忌将包堆放在消毒车架上或直接放在柜底板上。。（3）接收标本的人员应该佩戴适当的个人防护装备，包括手套、口罩、护目镜等。（4）在接收标本时，应检查标签和容器是否完好无损，并核对标签上的信息是否与申请单上的信息一致。4、移液操作（1）移液操作应当在生物安全柜内进行，避免感染性物质扩散。（2）废弃的移液管应当放在专用的容器内，而不是放在实验室外面。（3）使用固定皮下注射针头的注射器不能用于移液操作，以避免交叉污染。（4）在打开隔膜封口的瓶子时，应使用适当的工具，而不是皮下注射针头和注射器。（5）为避免感染性物质从移液管中滴出而扩散，应在工作台面上放置一块浸有消毒液的布或吸有消毒液的纸，并在使用后按感染性废弃物处理。5、消毒与灭菌（1）一次性的无菌塑料吸管应当在完成实验后置于废弃物存放包装内，经过高压灭菌后统一处理。（2）可以重复使用的玻璃吸管应当在使用后浸泡在含有消毒剂的存放盒中，按照消毒程序规定的时间进行消毒后，清洗洁净，烘干，灭菌后备用。（3）机械移液装置可以放在生物安全柜中，与生物安全柜一同进行消毒。操作人员在进行实验室操作时，应根据国家规定的防护等级，在相应级别的实验室的安全柜内进行操作，并采取相应的防护措施，以确保实验室操作的安全性。为了保证实验室操作的安全性，接收并打开标本包装的人员必须接受过防护培训，并了解所操作标本的潜在健康危害，同时在操作时采取合适的防护措施。所有标本必须在生物安全柜里打开包装，并备有消毒剂以便随时处理可能出现的标本泄漏。在打开包装前，还需要仔细检查每个容器的外观、标签是否完整，标签、送检报告与内容物是否相符，是否有污染以及容器是否有破损等，同时要登记详细的报告单并记录处置方法。接收标本应由2人进行。为了维护和使用冰箱和冰柜的安全性，低温冰箱和干冰柜应定期除霜和清洁，并清理出所有在储存过程中破碎的安瓿和试管等物品。在清理时应戴厚橡胶手套并进行面部防护，并对内表面进行消毒。储存在冰箱内的所有容器应当清楚地标明内装物品的科学名称、储存日期和储存者的姓名。未标明的或废旧物品应当高压灭菌并丢弃。此外，还应保存一份冻存物品的清单。除非有防爆措施，否则冰箱内不能放置易燃溶液，冰箱门上应注明这一点。在打开装有冻干物的安瓿时，应该小心操作，因为其内部可能处于负压，突然冲入的空气可能使一些物质扩散进入空气。因此，安瓿应该在生物安全柜内打开，并按照一定步骤进行操作，如清除安瓿外表面的污染、在管上靠近棉花或纤