幽门螺杆菌在胃癌发生过程中的作用机制

幽门螺杆菌在胃癌发生过程中的作用机制【摘要】目的：探讨Hp可能的致癌机制.方法：采用WarthinStarry嗜银染色法检测胃癌组织39例，胃黏膜不典型增生24例和慢性胃炎组织33例中的Hp感染情况；采用PCR法检测上述标本中HpcagA；采用免疫组化SP法检测组织中iNOS,VEGF,cerbB2和ras癌基因产物p185和p21的表达.结果：Hp,HpcagA,iNOS,VEGF,p185和p21在不典型增生和胃癌组织中的表达显着高于慢性胃炎组织；Hp阳性慢性胃炎、不典型增生和胃癌组织中iNOS,VEGF和p21的表达显着高于Hp阴性组，Hp阳性不典型增生及胃癌组织中p185的表达显着高于Hp阴性组；慢性胃炎、不典型增生和胃癌组织中Hp与iNOS，VEGF和p21表达呈正相关，不典型增生和胃癌组织中Hp与p185表达呈正相关.结论：Hp的致癌作用与其HpcagA的过度表达，增强胃黏膜细胞中iNOS和VEGF的表达，促进胃黏膜细胞癌基因cerbB2和ras的活化密切相关.

【关键词】胃肿瘤；血管内皮生长因子类；一氧化氮合酶；癌基因；螺杆菌，幽门；细胞毒素相关基因

0引言

幽门螺杆菌感染与胃癌的发生发展密切相关［1，2］，但Hp确切的致癌机制尚不清楚.我们通过对慢性胃炎、胃黏膜不典型增生及胃癌组织中Hp和细胞毒素相关基因阳性株感染率，诱导型一氧化氮合酶，血管内皮生长因子，cerbB2和ras癌基因产物p185和p21蛋白表达情况及Hp与iNOS,VEGF,p185和p21蛋白表达的相关性研究，探讨Hp可能的致癌机制.

1材料和方法

材料

解放军第5医院200201/200312纤维内窥镜活检存档蜡块标本96例，胃癌39例，男32例，女7例，平均年龄岁；胃黏膜不典型增生24例，男17例，女7例，平均年龄岁；慢性胃炎33例，男14例，女19例，平均年龄岁.

方法

标本40g/L甲醛固定，常规脱水，石蜡包埋，4μm厚连续切片.Hp感染采用WarthinStarry嗜银染色，Hp呈棕黑色，弯曲成弧形、S形或海鸥状，多位于胃粘膜表面和/或胃小凹及胃癌旁黏膜腺窝内.HpcagA基因的检测采用PCR法.cagA引物序列：引物1：5′GATAACAGGCAAGCTTTTGAGG3′，引物2：5′CTGCAAAAGATTGTTTGCGAGA3′，由上海生工生物工程技术服务有限公司合成；TagDNA酶、PCR染液购自北京赛百圣基因技术有限公司；dNTP购自南京生兴生物技术有限公司.取石蜡块切片3片，经二甲苯脱蜡后，消化液消化，酚氯仿抽提DNA，-20℃备用.PCR反应体系为50μL，包括DNA模板2μL,cagA引物1μL,cagA引物2μL,TagDNA酶μL,10×Tag缓冲液5μL,PCR染液5μL,dNTP1μL,ddH2O35μL.PCR反应条件：95℃预变性4min后，95℃变性60s,50℃退火60s,72℃延伸60s，共30个循环，循环结束后72℃延伸7min.反应结束后取13μL扩增水相用15g/L琼脂糖凝胶电泳鉴定，在349bp出现电泳带为阳性，否则为阴性.

iNOS,VEGF,p185和p21的表达采用免疫组化SP法.实验试剂iNOS兔抗人多克隆抗体、人抗兔免疫组化试剂盒、iNOS阳性对照片购自武汉博士德公司；VEGF,p185和p21鼠抗人mAb，免疫组化试剂盒及DAB显色液，iNOS，VEGF，p185和p21阳性对照片购自福州迈新生物技术有限公司.阴性对照以PBS代替第一抗体，操作方法均按试剂盒说明书进行.iNOS和VEGF主要为细胞质着色，p185和p21癌基因蛋白主要表达在细胞质和/或细胞膜，以上部位出现棕黄色颗粒视为阳性细胞，计数5个高倍视野，以阳性细胞数所占比例分为“-”：阳性细胞数5%；“+”：5%≤阳性细胞数25%；“”：25%≤阳性细胞数50%.

统计学处理：采用计算机统计分析软件进行，胃黏膜组织Hp和HpcagA+表达情况，Hp与iNOS,VEGF,p185和p21表达的关系采用χ2检验，iNOS,VEGF,p185和p21表达情况采用秩和检验，Hp与iNOS,VEGF,p185和p21表达的相关性采用Spearman等级相关分析.

2结果

胃黏膜不典型增生和胃癌组织中Hp和HpcagA+株感染率显着高于慢性胃炎组织；不典型增生和胃癌组织中iNOS,VEGF,p185和p21的表达显着高于慢性胃炎组织；Hp阳性慢性胃炎、不典型增生和胃癌组织中iNOS，VEGF和p21的表达显着高于Hp阴性组，Hp阳性不典型增生及胃癌组织中p185的表达显着高于Hp阴性组；慢性胃炎、不典型增生和胃癌组织中Hp与iNOS,VEGF和p21表达呈正相关，不典型增生和胃癌组织中Hp与p185表达呈正相关.表1胃黏膜组织Hp和HpcagA(+)株感染率表2胃黏膜组织iNOS,VEGF,p185和p21的表达表3胃黏膜组织Hp与iNOS,VEGF,p185和p21表达的关系表4Hp与iNOS,VEGF,p185和p21表达的相关分析

3讨论

Hp感染后可能是通过其产生的细胞毒素，使组织损伤，胃黏膜上皮恶性转化.CagA表达的cagA蛋白是Hp产生的主要细胞毒素.CagA阳性的菌株感染与胃癌的发生密切相关［3，4］.本研究结果显示，胃黏膜不典型增生和胃癌组织中Hp和HpcagA+株感染率显着高于慢性胃炎组织，证实Hp感染是慢性胃炎向胃黏膜不典型增生及胃癌发展的重要启动因子，cagA的存在与Hp的致癌作用密切相关.iNOS通过促进细胞增生，促进肿瘤血管形成，增加肿瘤细胞侵袭、转移等机制参与胃癌的发生、发展过程［5］.VEGF是一种内皮细胞的特异有丝分裂原，可特异性促进血管内皮细胞分裂增殖并增加血管通透性，与胃癌发生、发展密切相关［6］.我们研究发现，不典型增生和胃癌组织中iNOS和VEGF的表达显着高于慢性胃炎组织；Hp阳性慢性胃炎、胃黏膜不典型增生及胃癌组织中iNOS和VEGF的表达显着高于Hp阴性组；慢性胃炎、胃粘膜不典型增生及胃癌组织中Hp感染与iNOS和VEGF的表达呈正相关.表明iNOS和VEGF在胃癌的发生发展过程中起促进作用；Hp感染可增强胃黏膜细胞中iNOS和VEGF的表达.在正常情况下癌基因cerbB2和ras处于非激活状态,与细胞生长分化过程中信号转导有关.当受到某些致癌因素作用后,其构型改变或表达失控而被激活，导致细胞信号转导发生障碍，引起胃癌发生［7，8］.癌基因cerbB2和ras通过其产物基因蛋白p185和p21来表达其功能.本结果显示，不典型增生和胃癌组织中p185和p21的表达显着高于慢性胃炎组织，证实癌基因cerbB2和ras的扩增导致p185和p21蛋白过度表达与胃癌的发生、发展有关.我们还发现，Hp阳性胃黏膜不典型增生及胃癌组织中p185蛋白的表达显着高于Hp阴性组；胃黏膜不典型增生及胃癌组织中Hp与p185蛋白表达呈正相关.Hp阳性慢性胃炎、胃黏膜不典型增生及胃癌组织中p21蛋白的表达显着高于Hp阴性组，慢性胃炎、胃黏膜不典型增生及胃癌组织中Hp与p21蛋白的表达呈正相关.说明Hp感染可引起胃黏膜细胞的癌基因cerbB2和ras活化或突变，使细胞增殖加快，促进胃癌发生发展.

【参考文献】

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