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文档简介

化学发光免疫技术第一节发光与化学发光剂第二节发光酶免疫测定(CLEIA)(chemiluminescenceenzymeimmunoassay第三节化学发光免疫测定技术(CLIA(chemiluminescenceimmunoassay第四章电化学发光免疫测定技术(ECLI)(electrochemiluminescenceimmunoassay)概念Lei必化学发光免疫技术:集灵敏的化学目发光分析和特异的抗原抗体免疫测定于一体的检测技术。特点:特异性高、敏感性高、分离简便、快速、试剂无毒、安全稳定可自动化。化学发光免疫技术的类型按发光剂不同分为1.发光酶免疫测定(CLEIA)chemiluminescenceenzymeimmunoassay2.化学发光免疫测定技术CLIAchemiluminescenceimmunoassay3电化学发光免疫测定技术(ECLelectrochemiluminescencelmmunoassay按分离方法不同分1.微粒子化学发光免疫测定2.磁颗粒化学发光免疫测定第一节发光与化学牧光剂发光一种物质由电子激发态回复到基态时,释放出的能量表现为光的发射1.光照发光:发光剂经短波长入射光照射后进入激发态,当回复至基态时发出较长波长的可见光。2.牛物发光:反应底物在荧光素酶的催化下利用ATP产能,生成激发态的氧化荧光素,后者在回复到基态时多余的能量以光子形式放出。3.化学发光:在常温下由化学反应产生的光的发射。化学发光是一个多步骤的过程。生物发光萤火虫荧光素pn-00荧光素酶ATP:O,:Mg2+光+AMP+O2+CO2+氧化萤火虫荧光素机制:某些化合物可以利用化学反应产生的能量使其产物分子或反应中间态分子上升至电子激发态。当此产物分子或中间态分子衰退至基态时,以发射光子的形式释放能量(即发光)。化学发光剂或发光底物:在化学发光反应中参与能量转移并最终以发射光子的形式释放能量的化合物。发光剂分为荧光素、生物发光剂、化学发光剂化学发光剂应符合以下几个条件①能参与化学发光反应;②与抗原或抗体偶联后形成稳定的结合物试剂;③偶联后仍保留高的量子效应和反应动力;④应不改变或极少改变被标记物的理化特性,特别是免疫活性1.酶促反应的发光底物是指经酶的降解作用而发出光的一类发光底物。CLE|A中常用的酶有HRP和APHRP的发光底物有鲁米诺、对羟基苯乙酸AP的发光底物有AMPD、4-MUP(荧光底物)特点:可作标记物、也可作过氧化物酶的底物1.1鲁米诺HONHNH/OHtn+hoHRP对-羟基苯乙酸(HPA)HPA在HO2存在下被HRP氧化成氧化二聚体(荧光物质),在350mm激发光作用下,发出450mm波长的荧光,可用荧光光度计测量。1.2HPA-CH-COOHHO十HO.CHTCOOH一HRP荧光ChrCOoh氧化二聚体AMPPDAMPPD在碱性条件下,被AP酶解生成相当稳定的AMPD阴离子,其有2~30min的分解半衰期,发出波长为470mm的持续性光,在1

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