输血科Rh血型鉴定操作规程

类别：操作规程生效日期：2014.10部门：输血科修改日期：2014.09名称：输血科Rh（D）血型鉴定标准操作规程新增：Rh（D）血型鉴定标准操作规程【目的】正确鉴定血型，保障患者的输血安全。【范围】所有送检需要鉴定ABO、Rh血型的标本。【职责】配发血室负责临床患者的血型鉴定。【原理】Rh血型系统主要有五种抗体，即抗-D、抗-C、抗-E、抗-c及抗-e。用这5种抗体血清检查红细胞抗原，可将Rh血型系统分成18种表现型。常规检查的只用抗-D血清，与抗-D血清凝集者被称为RhD阳性，反之称为RhD阴性。采用单克隆IgM类抗-D抗体鉴定红细胞上的RhD抗原。D抗原在血型系统中抗原性最强，临床上引起溶血性输血反应、新生儿溶血病的发生率仅次于ABO系统。【标本采集和处理】标本采集：EDTA-K2或EDTA-K3抗凝静脉血2mL标本保存：室温放置不超过8小时，4℃保存不超过72小时，无溶血及明显乳糜。【设备与试剂】ABO、RhD血型检测卡（微柱凝胶）①包装规格：2人份/卡，12卡/盒。②储存条件及有效期：18-25℃避光保存，自检定合格之日起12个月。Rh（D）血型定型试剂（单克隆抗体）①包装规格：10ml。②储存条件及有效期：2-8℃避光保存；储存条件下有效期为24个月。红细胞悬液：取标本离心后压积红细胞与生理盐水配制3%-5%红细胞悬液。BaSo2005-2、BaSo2002-2型医用低速离心机：珠海贝索生物技术有限公司。【操作步骤】1、试管法a)加1滴抗D试剂于一支预先标记好的试管中（12*75mm）。b)再加1滴约3-5%的被检红细胞悬液于试管中，混匀。c)放入BaSo2002-2型离心机以3400r/min离心15秒。d)检查是否有溶血，然后轻轻摇动试管，肉眼观察有无凝集现象，必要时须用低倍镜观察，记录结果。e)若是阴性结果，需在37℃孵育15-30分钟，然后再离心观察结果。结果若呈阴性需进一步确认是否是弱D。2、微柱凝胶法（ABO、RhD血型检测卡）a)取ABO、RhD血型检测卡,在卡上标记患者信息，将卡上的锡纸膜撕开。b)将受检者0.5%-0.8%红细胞悬液分别加入第一至第三支微管中，或第四至第六微管中，每管50ul。c)即刻使用TD-3A型血型血清学用离心机离心5min，2分钟900rpm，3分钟1500rpm，取出肉眼判定结果。3、结果判定a)试管法阳性反应：出现红细胞凝集，为RhD阳性。阴性反应：红细胞不出现凝集，为RhD阴性。b)微柱凝胶法阳性结果：红细胞抗原与相应抗体在微柱凝胶中形成的特异性抗原抗体复合物浮在凝胶表面或胶中，为阳性反应。反应强度：特异性红细胞抗原抗体复合物位于胶表面为强阳性反应；复合物在胶中为弱阳性反应；愈靠近胶底部颗粒愈小，反应愈弱。阴性结果：被检红细胞抗原无相应的抗体结合，不出现特异性抗原抗体复合物，红细胞沉于微柱凝胶的尖底部。结果判定表血型抗A抗B抗D抗A抗B抗DD阳性A+-++-+B-++-++O--+--+AB++++++D阴性A+--+--B-+--+-OAB++-++-【注意事项】由于D抗原在37℃中反应最强，如结果为阴性可将试管置37℃水浴箱30分钟，再次离心观察结果。Rh（D）血型定型试剂（单克隆抗体）含有0.1%W/V叠氮钠，如果