生物信息传递从到

生物信息传递从到第1页，课件共145页，创作于2023年2月本章目录1、RNA转录的基本过程2、转录机器的主要成分3、启动子与转录起始4、原核生物与真核生物mRNA的特征比较5、终止与抗终止6、内含子的剪接、编辑及化学修饰第2页，课件共145页，创作于2023年2月DNA序列是遗传信息的贮存者，它通过自主复制得到永存，并通过转录生成信使RNA、翻译生成蛋白质的过程来控制生命现象。第3页，课件共145页，创作于2023年2月基因表达包括转录(transcription)和翻译(translation)两个阶段。转录是指拷贝出一条与DNA链序列完全相同(U替换T)的RNA单链的过程，是基因表达的核心步骤；翻译是指以新生的mRNA为模板，把核苷酸三联遗传密码子翻译成氨基酸序列、合成多肽链的过程，是基因表达的最终目的。第4页，课件共145页，创作于2023年2月与mRNA序列相同的那条DNA链称为编码链(codingstrand)或称有意义链(sensestrand)另一条根据碱基互补原则指导mRNA合成的DNA链称为模板链(templatestrand)或称反义链(antisensestrand)。第5页，课件共145页，创作于2023年2月5’…GCAGTACATGTC…3’3’…cgtcatgtacag…5’DNA5’…GCAGUACAUGUC…3’mRNAN…AlaValHisVal…C多肽链转录翻译编码链模板链第6页，课件共145页，创作于2023年2月不对称转录:模板链并非永远在同一单链上注意：RNA的合成方向都是5’3’第7页，课件共145页，创作于2023年2月贮藏在任何基因中的生物信息都必须首先被转录生成RNA，才能得到表达。RNA主要以单链形式存在于生物体内，其高级结构很复杂。RNA既担负着贮藏及转移遗传信息的功能，又能作为核酶直接在细胞内发挥代谢功能。第8页，课件共145页，创作于2023年2月生物体内共有3种RNA：1、信使RNA(messengerRNA，mRNA)－编码特定蛋白质序列---模板；2、转移RNA(transferRNA，tRNA)－特异性解读mRNA中的遗传信息、将其转化成相应氨基酸并将其加入多肽链中---搬运工具；3、核糖体RNA(ribosomalRNA，rRNA)直接参与核糖体中蛋白质合成---场所。

第9页，课件共145页，创作于2023年2月3.1RNA转录的基本过程无论是原核还是真核细胞，转录的基本过程都包括:模板识别、转录起始、转录延伸和转录终止。第10页，课件共145页，创作于2023年2月第11页，课件共145页，创作于2023年2月在原核生物中，模板识别阶段主要指RNA聚合酶与启动子DNA双链相互作用并与之相结合的过程。转录起始前，启动子附近的DNA双键分开形成转录泡以促使底物核糖核苷酸与模板DNA的碱基配对。转录起始就是RNA链上第一个核苷酸键的产生。

第12页，课件共145页，创作于2023年2月转录起始后直到形成9个核苷酸短链是通过启动子阶段，此时RNA聚合酶一直处于启动子区；新生的RNA链与DNA模板链的结合不够牢固，很容易从DNA链上掉下来并导致转录重新开始。第13页，课件共145页，创作于2023年2月第14页，课件共145页，创作于2023年2月一旦RNA聚合酶成功地合成9个以上核苷酸并离开启动子区，转录就进人正常的延伸阶段。所以，通过启动子的时间代表一个启动子的强弱。一般说来，通过启动子的时间越短，该基因转录起始的频率也越高。第15页，课件共145页，创作于2023年2月随着RNA聚合酶的移动，DNA双螺旋持续解开，暴露出新的单链DNA模板，新生RNA链的3’末端不断延伸，在解链区形成RNA-DNA杂合物。而在解链区的后面，DNA模板链与其原先配对的非模板链重新结合成为双螺旋。第16页，课件共145页，创作于2023年2月当RNA链延伸到转录终止位点时，RNA聚合酶不再形成新的磷酸二酯键，RNA-DNA杂合物分离，转录泡瓦解，DNA恢复成双链状态，而RNA聚合酶和RNA链都被从模板上释放出来，这就是转录的终止。第17页，课件共145页，创作于2023年2月注意：真核生物RNA聚合酶不能直接识别基因的启动子区，需要转录调控因子(辅助蛋白质)按特定顺序结合于启动子上，RNA聚合酶才能与之相结合并形成复杂的前起始复合物(preinitiationtranscriptioncomplex,PIC)。第18页，课件共145页，创作于2023年2月转录和翻译的速度基本相等，37℃时，转录生成mRNA的速度每秒钟合成14个密码子，而蛋白质合成的速度大约是每秒钟15个氨基酸。第19页，课件共145页，创作于2023年2月3·2转录机器的主要成分3·2·1RNA聚合酶第20页，课件共145页，创作于2023年2月1.原核生物RNA聚合酶大多数原核生物RNA聚合酶的组成是相同的，大肠杆菌RNA聚合酶由2个α亚基、一个β亚基、一个β’亚基和一个ω亚基组成，称为核心酶。加上一个σ亚基后则成为聚合酶全酶(holoenzyme)，相对分子质量为4.65×lO5(图3-3)。第21页，课件共145页，创作于2023年2月第22页，课件共145页，创作于2023年2月σ因子的作用是负责模板链的选择和转录的起始，它使酶专一性识别模板上的启动子。σ因子可以极大地提高RNA聚合酶对启动子区DNA序列的亲和力，酶底结合常数提高103倍。σ因子还能使RNA聚合酶与模板DNA上非特异性位点的结合常数降低104倍。因此，加入σ因子以后，RNA聚合酶全酶识别启动子序列的特异性总共提高了107倍。第23页，课件共145页，创作于2023年2月第24页，课件共145页，创作于2023年2月2.真核生物RNA聚合酶真核生物有3类RNA聚合酶，由8-16个亚基所组成，相对分子质量超过5×105。第25页，课件共145页，创作于2023年2月真核生物线粒体和叶绿体中还存在着不同的RNA聚合酶。线粒体RNA聚合酶只有一条多肽链，相对分子质量小于7x104，是已知最小的RNA聚合酶之一，与T7噬菌体RNA聚合酶有同源性。叶绿体RNA聚合酶比较大，结构上与细菌中的聚合酶相似，由多个亚基组成，部分亚基由叶绿体基因组编码。

第26页，课件共145页，创作于2023年2月3·2·2转录复合物

启动子选择阶段包括RNA聚合酶全酶对启动子的识别，聚合酶与启动子可逆性结合形成封闭复合物（closedcomplex）。伴随着DNA构象上的重大变化，封闭复合物转变成开放复合物(opencomplex)，聚合酶全酶所结合的DNA序列中有一小段双链被解开。第27页，课件共145页，创作于2023年2月第28页，课件共145页，创作于2023年2月只有带σ因子的全酶才能专一地与DNA上的启动子结合，选择其中一条链作为模板，合成均一的产物。σ因子的作用只是起始而已，一旦转录开始，它就脱离了起始复合物，而由核心酶负责RNA链的延伸。因此，聚合酶全酶的作用是启动子的选择和转录的起始，而核心酶的作用是链的延伸。第29页，课件共145页，创作于2023年2月第30页，课件共145页，创作于2023年2月3·3启动子与转录起始大肠杆菌RNA聚合酶与启动子的相互作用主要包括1.启动子区的识别2.酶与启动子的结合3.σ因子的结合与解离。下面分别介绍这3个方面的内容。第31页，课件共145页，创作于2023年2月3·3·1启动子区的基本结构启动子是一段位于结构基因5’端上游的DNA序列，能活化RNA聚合酶，使之与模板DNA准确地结合并具有转录起始的特异性。基因的特异性转录取决于酶与启动子能否有效地形成二元复合物。所以，RNA聚合酶如何有效地找到启动子并与之相结合是转录起始过程中首先要解决的问题。第32页，课件共145页，创作于2023年2月有实验表明，对许多启动子来说，RNA聚合酶与之相结合的速率至少比布朗运动中的随机碰撞高100倍。第33页，课件共145页，创作于2023年2月转录单元(transcriptionunit)是一段从启动子开始至终止子(terminator)结束的DNA序列。RNA聚合酶从转录起点开始沿着模板前进，直到终止子为止，转录出一条RNA链。在细菌中，一个转录单元可以是一个基因，也可以是几个基因。第34页，课件共145页，创作于2023年2月转录起点是指与新生RNA链第一个核苷酸相对应DNA链上的碱基，研究证实通常为一个嘌呤。常把起点前面即5’末端的序列称为上游(upstream)，而把其后面即3’末端的序列称为下游(downstream)。在描述碱基的位置时，一般用数字表示，起点为+1，下游方向依次为+2、+3……，上游方向依次为-1、-2、-3……。第35页，课件共145页，创作于2023年2月-35区-10区……T85T83G81A61C69A52……T89A89T50A65A100……

５’-35-10+1３’

G(A)ＲＮＡC(U)第36页，课件共145页，创作于2023年2月第37页，课件共145页，创作于2023年2月启动子区是RNA聚合酶的结合区，其结构直接关系到转录的效率。那么，启动子区有什么结构特点呢?Pribnow设计了一个实验，他把RNA聚合酶全酶与模板DNA结合后，用DNaseI水解DNA，然后用酚抽提，沉淀纯化DNA后得到一个被RNA聚合酶保护的DNA片段，约有41~44个核苷酸对。第38页，课件共145页，创作于2023年2月第39页，课件共145页，创作于2023年2月他分离了fd噬菌体等被酶保护的区域，并进行了序列分析，以后又有人做了50多个启动子的序列分析后发现，在被保护区内有一个由5个核苷酸组成的共同序列TATAA，是RNA聚合酶的紧密结合点，现在称为Pribnow区(Pribnowbox)，这个区的中央大约位于起点上游10bp处，所以又称为－10区。第40页，课件共145页，创作于2023年2月科学家不久后又从噬菌体的左、右启动子PL及PR和SV40启动子的－35bp附近找到了另一段共同序列:TTGACA。经过数年的努力，分析了46个大肠杆菌启动子的序列以后，确证绝大部分启动子都存在这两段共同序列，即位于－10bp处的TATA区和－35bp处的TTGACA区。-10位的TATA区和-35位的TGACA区是RNA聚合酶与启动子的结合位点，能与σ因子相互识别而具有很高的亲和力。

第41页，课件共145页，创作于2023年2月-35区-10区……T85T83G81A61C69A52……T89A89T50A65A100……

５’-35-10+1３’

G(A)ＲＮＡC(U)第42页，课件共145页，创作于2023年2月

-35和-10都是大致位点第43页，课件共145页，创作于2023年2月第44页，课件共145页，创作于2023年2月在真核生物基因中位于转录起始点上游－25～－30(-25)bp处的共同序列TATAAA，也称为TATA区(图3-7)。另外，在起始位点上游-70～-78（-75）bp处还有另一段共同序列CCAAT，这是与原核生物中-35bp区相对应的序列，称为CAAT区(CAATbox)。-90左右或在TATA区的上下游存在GC区(GCbox)。第45页，课件共145页，创作于2023年2月-90区-75区-25区GGGCGGG……CCAAT

…….TATAAA

……

５’-90-75-25+1３’

ARNA第46页，课件共145页，创作于2023年2月核心启动子：

指保证RNA聚合酶Ⅱ转录正常起始所必需的、最少的DNA序列，包括转录起始位点及转录起始位点上游TATA区。TATA常在-25bp左右。

（相当于原核的-10序列的作用，即选择正确的转录起始位点，保证精确起始。）

上游启动子元件：

包括CAAT盒（CCAAT）和GC盒（GGGCGG）等。

（CAAT：-70—80bp，GGGCGG：-80—110bp，作用是控制转录起始频率。）第47页，课件共145页，创作于2023年2月第48页，课件共145页，创作于2023年2月3.3.2启动子区的识别RNA聚合酶是通过氢键互补的方式识别启动子的。在启动子区DNA双螺旋结构中，腺嘌呤、鸟嘌呤和胞嘧啶上的某些基团是氢键供体，而4种碱基中的某些基团是氢键受体。由于它们分别处于DNA双螺旋的大沟或小沟内，因此都具有特定的方位，而酶分子中的氨基酸也有处于特定空间构象的氢键受体与供体，当它们与启动子中对应的分子在一定距离内互补时，就形成氢键，相互结合。第49页，课件共145页，创作于2023年2月3·3·3RNA聚合酶与启动子区的结合在RNA聚合酶与启动子相互作用的过程中，聚合酶首先与启动子区闭合双链DNA相结合，形成二元闭合复合物;经过解链得到二元开链复合物。解链区一般在-9～+13之间，而酶与启动子结合的主要区域在其上游。第50页，课件共145页，创作于2023年2月一旦开链区解链，酶分子能以正确的取向与解链后的有关单链相互作用，形成开链复合物。因此，RNA聚合酶既是双链DNA结合蛋白，又是单链DNA结合蛋白。DNA开链是按照DNA模板序列正确引入核苷酸底物的必要条件。第51页，课件共145页，创作于2023年2月第52页，课件共145页，创作于2023年2月3.3.4-10区和-35区的最佳间距在原核生物中，-35区与-10区之间的距离大约是16～19bp，小于15bp或大于20bp都会降低启动子的活性。保持启动子这二段序列以及它们之间的距离都是重要的，否则就会改变它所控制基因的表达水平。第53页，课件共145页，创作于2023年2月因为增减bp，-35区相对于-10区旋转（增减一个bp会使两者之间的夹角发生360的变化）所产生的超螺旋会发生改变。若要使酶与DNA在这个区域内保持正确的取向，就必须使二者之一发生扭曲，需要增加结合自由能。

第54页，课件共145页，创作于2023年2月在细菌中常见两种启动子突变:一种叫下降突变(downmutation)，如果把Pribnow区从TATAAT变成AATAAT就会大大降低其结构基因的转录水平;另一类突变叫上升突变(upmutation)，即增加Pribnow区共同序列的同一性。例如，在乳糖操纵子的启动子中，将其Pribnow区从TATGTT变成TATATT，就会提高启动子的效率，提高乳糖操纵子基因的转录水平。

第55页，课件共145页，创作于2023年2月3·3·5增强子及其功能增强子的发现从SV40开始，在SV40的转录单元上发现它的转录起始位点上游约200bp处有两段72bp长的重复序列，它们不是启动子的一部分，但能增强或促进转录的起始；除去这两段序列会大大降低这些基因的转录水平，若保留其中一段或将之取出插至DNA分子的任何部位，就能保持基因的正常转录。第56页，课件共145页，创作于2023年2月这种能强化转录起始的序列为增强子或强化子(enhancer)。后来在许多基因的启动区中陆续发现了增强子的存在。把β-珠蛋白基因置于带有上述72bp序列的DNA分子上，发现它在体内的转录水平提高了200倍。无论把这段72bp序列放在转录起点上游1400bp或下游3300bp处，它都有转录增强作用。

第57页，课件共145页，创作于2023年2月增强子具有增加启动子的作用，与启动子一起都可视为基因表达调控中的顺式作用元件，可与转录因子和RNA聚合酶结合，启动并调节基因转录。第58页，课件共145页，创作于2023年2月增强子的特点：①远距离效应。一般位于上游-200bp处，但可增加远处启动子的转录，即使相距10kb也能发挥作用;②无方向性。无论位于靶基因的上游、下游或内部都可以发挥作用；③顺式调节。只调节位于同一染色体上的靶基因，而对其他染色体上的基因没有作用；第59页，课件共145页，创作于2023年2月增强子的特点：④无物种和基因的特异性。可以连接的异源基因上发挥作用；⑤具有组织特异性。增强子的效应需特定的蛋白质因子参与；⑥有相位性。其作用和DNA的构象有关；⑦许多增强子还受外部信号的调控。如金属硫蛋白的基因启动区上游所带的增强子，就可以对环境中的锌、镉浓度做出反应。第60页，课件共145页，创作于2023年2月3.3.6真核生物启动子对转录的影响启动子是确保转录精确而有效地起始的DNA序列。1979年，美国科学家Goldberg首先注意到真核生物中，由RNA聚合酶II催化转录的DNA序列5'上游区有一段与原核生物Pribnow区相似的富含TA的保守序列。由于该序列前4个碱基为TATA，所以又称为TATA区(TATAbox)。

第61页，课件共145页，创作于2023年2月此后10多年间，科学家通过对许多基因启动子区的分析，发现绝大多数功能蛋白基因的启动子都具有共同的结构模式。简单地说，真核基因的启动子在-25区含有TATA序列，在-75区含有CCAAT序列(CAATbox)，在-90含有GCCACACCC或GGGCGGG序列(GCbox)。第62页，课件共145页，创作于2023年2月TATA区上游的保守序列称为上游启动子元件(upstreampromoterelement，UPE)或称上游激活序列(upstreamactivatingsequence，UAS)。第63页，课件共145页，创作于2023年2月第64页，课件共145页，创作于2023年2月第65页，课件共145页，创作于2023年2月原核和真核基因转录起始位点上游区的结构存在很大的差别。原核基因启动区范围较小，TATAAT(Pribnow区)的中心位于-10，上游只有TTGACA区(-35区)作为RNA聚合酶的主要结合位点，参与转录调控;真核基因的调控区较大，TATAA/TA区位于-25，而-40～-110区为上游激活区。真核基因除了含有可与原核基因启动子相对应的CAAT区（-75区）之外，大多数基因还拥有GC区(-90)和增强子区。第66页，课件共145页，创作于2023年2月TATA区和其他两个UPE区的作用有所不同。如果除去TATA区或进行碱基突变，转录产物下降的相对值不如CAAT区或GC区突变后明显，但发现所获得的RNA产物起始点不固定。TATA区的主要作用是使转录精确地起始，而CAAT区或GC区是决定转录产物产率高低的。第67页，课件共145页，创作于2023年2月尽管这3种启动子区序列都有着重要功能，但并不是每个基因的启动子区都包含这3种序列。有些基因，如SV40的早期基因，缺少TATA和CAAT区，只有6个串联在上游-40～-110位点的GC区;有些基因，如组蛋白H2B，不含GC区，但有两个CAAT区，一个TATA区。第68页，课件共145页，创作于2023年2月3.3.7转录的抑制

转录抑制剂根据其作用性质主要可以分为两大类：—DNA模板功能抑制剂，与DNA结合而改变模板的功能。—RNA聚合酶抑制剂，与RNA聚合酶结合而抑制其活力。除上述抑制剂外，还有一些嘌呤和嘧啶的类似物，如5-氟尿嘧啶等，可以作为核苷酸代谢拮抗物来抑制核酸前体的合成。抑制剂靶酶抑制作用利福霉素细菌的全酶与β亚基结合，阻止起始链霉溶菌素细菌的核心酶与β亚基结合，阻止延长放线菌素D真核RNA聚合酶Ⅰ与DNA结合，并阻止延长α-鹅膏蕈碱真核RNA聚合酶Ⅱ与RNA聚合酶Ⅱ结合第69页，课件共145页，创作于2023年2月3.4原核生物与真核生物mRNA的特征比较mRNA在大肠杆菌细胞内占总RNA的2%左右(tRNA占16%，而rRNA则占80%以上)。科学家很早就猜想生物细胞内存在能将遗传信息从DNA上转移到蛋白质分子上的信使(或称模板)，但由于mRNA在细菌细胞内的半衰期很短，直到20世纪70年代初才首次将这一重要物质从细胞中分离出来。第70页，课件共145页，创作于2023年2月现已清楚，许多基因的mRNA在体内还是相当稳定的，半衰期从几个小时到几天不等。目前，人们己能从几乎所有生物体内分离纯化编码任何蛋白质的mRNA。第71页，课件共145页，创作于2023年2月真核细胞mRNA最大特点在于它往往以一个较大相对分子质量的前体RNA出现在核内，只有成熟的、相对分子质量明显变小并经化学修饰的mRNA才能进入细胞质参与蛋白质的合成。所以，真核细胞mRNA的合成和功能表达发生在不同的空间和时间范畴内。第72页，课件共145页，创作于2023年2月原核生物中，mRNA的转录和翻译不仅发生在同一个细胞空间里，而且这两个过程几乎是同步进行的，蛋白质合成往往在mRNA刚开始转录时就被引发。第73页，课件共145页，创作于2023年2月一个原核细胞的mRNA(包括病毒)有时可以编码几个多肽，而一个真核细胞的mRNA最多只能编码一个多肽。原核生物常以AUG作为起始密码子,有时GUG或UUG也作为起始密码子；真核生物几乎永远以AUG作为起始密码子。第74页，课件共145页，创作于2023年2月3·4·1原核生物mRNA的特征1、原核生物mRNA的半衰期短：细菌基因的转录与翻译是紧密相联的，基因转录一旦开始，核糖体就结合到新生mRNA链的5’端，启动蛋白质合成，而此时该mRNA的3’端还远远没有转录完全。在电子显微镜下，我们可以看到一连串核糖体紧紧跟在RNA聚合酶后面。第75页，课件共145页，创作于2023年2月绝大多数细菌mRNA的半衰期很短，mRNA的降解紧随着蛋白质翻译过程发生。转录开始1min后，降解就开始了，当一个mRNA的5'端开始降解时，其3'端部分仍在合成或被翻译。mRNA降解的速度大概是转录或翻译速度的一半。第76页，课件共145页，创作于2023年2月因为基因转录和多链肽延伸的速度基本相同，所以细胞内某一基因产物(蛋白质)的多少决定于转录和翻译的起始效率。以大肠杆菌色氨酸合成酶基因为例，平均每分钟约有15次转录起始（15条mRNA），每条mRNA链从生成到降解平均被翻译10次，所以，稳定状态下细胞中每分钟生成150个多肽。我们所讨论的mRNA的半衰期只是统计学上的平均值。

第77页，课件共145页，创作于2023年2月2、许多原核生物mRNA以多顺反子的形式存在：细菌mRNA可以同时编码不同的蛋白质。编码多个蛋白质的mRNA为多顺反子mRNA。多顺反子mRNA是一组相邻基因的转录产物。这一组基因被称为一个操纵子。第78页，课件共145页，创作于2023年2月所有mRNA都被分成3部分:编码区、位于AUG之前的5’端上游非编码区以及位于终止密码子之后不翻译的3’端下游非编码区。编码区始于起始密码子AUG，经一连串编码氨基酸的密码子直至终止密码子。对于多顺反子mRNA中的第一个顺反子来说，一旦mRNA的5’端被合成，翻译起始位点即可与核糖体相结合，而后面几个顺反子翻译的起始就会受其上游顺反子结构的调控。第79页，课件共145页，创作于2023年2月一种情况是，第一个蛋白质合成终止以后，核糖体分解成大、小亚基，脱离mRNA模板，第二个蛋白的翻译必须等到新的小亚基和大亚基与该蛋白起始密码子相结合后才可能开始。另一种情况是前一个多肽翻译完成以后，核糖体大、小亚基分离，小亚基不离开mRNA模板，而是迅速与游离的大亚基结合，启动第二个多肽的合成。第80页，课件共145页，创作于2023年2月第81页，课件共145页，创作于2023年2月在噬菌体RNA中，一个顺反子的翻译有时完全取决于它前面顺反子的翻译，因为噬菌体RNA往往形成复杂的二级结构，只有第一个翻译起始位点是暴露的，在这个顺反子翻译产生多肽的过程中，核糖体的运动破坏了后续顺反子的二级结构，才使起始位点较容易与核糖体相结合形成起始复合物。

第82页，课件共145页，创作于2023年2月第83页，课件共145页，创作于2023年2月3、原核生物mRNA的5’无帽子结构，3’端无或者只有较短的poly(A)结构

第84页，课件共145页，创作于2023年2月3.4.2真核生物mRNA的特征凡是编码功能蛋白的真核基因都通过RNA聚合酶Ⅱ进行转录。真核基因几乎都是单顺反子，只包含一个蛋白质的信息，其长度在几百到几千个核苷酸之间。一个完整的基因，不但包括编码区(codingregion)，还包括不编码氨基酸的5’和3’端的特异性序列。第85页，课件共145页，创作于2023年2月“基因”的分子生物学定义是:产生一条多肽链的功能RNA所必需的全部DNA核苷酸序列!真核生物mRNA结构上的最大特征是5'端的帽子及3'的poly(A)结构。第86页，课件共145页，创作于2023年2月1.真核生物mRNA的5’端的"帽子"真核生物的mRNA(不包括叶绿体和线粒体)5’端都是经过修饰的，基因转录一般从A起始，第一个核苷酸保留了5’端的三磷酸基团并能通过其3'-OH位与下一个核苷酸的5’磷酸基团形成二酯键，转录产物的起始序列为pppApNpNp……第87页，课件共145页，创作于2023年2月然而，如果在体外用核酸酶处理成熟mRNA;其5’端并不产生预期的核苷三磷酸，而产生以5’→5’三磷酸基团相连的二核苷酸，5’终端是一个在mRNA转录后加上去的甲基化鸟嘌呤。第88页，课件共145页，创作于2023年2月第89页，课件共145页，创作于2023年2月mRNA5’端加“G”的反应是由腺苷酸转移酶完成的，这个反应非常迅速，很难测得5’自由三磷酸基团的存在。据测算，在新生mRNA链达到50个核苷酸之前，帽子结构就已加到mRNA的第一个核苷酸上了。即mRNA几乎一诞生就是戴上帽子的。新加上的G与mRNA链上所有其他核酸苷方向正好相反，像一顶帽子倒扣在mRNA链上。第90页，课件共145页，创作于2023年2月mRNA的帽子结构常常被甲基化。第一个甲基出现在所有真核细胞的mRNA中，称为零号帽子(cap0)。第二个核苷酸(原mRNA5’第一位)的2’-OH位上加另一个甲基。有这个甲基的结构称为1号帽子(cap1)，真核生物中以这类帽子结构为主。在某些生物细胞内，mRNA链上的第三个核苷酸的2’-OH位也可能被甲基化，被称为2号帽子（cap2），占有帽mRNA总量的10%～15%。

第91页，课件共145页，创作于2023年2月

帽子结构使mRNA免遭核酸酶的破坏。当珠蛋白mRNA5’端的7-甲基-鸟嘌呤被除去后，该mRNA分子的翻译活性和稳定性都明显下降。有帽子结构的mRNA更容易被蛋白质合成的起始因子所识别，从而促进蛋白质的合成。mRNA5'端甲基化的帽子是翻译所必须的。甲基化的帽子结构是蛋白质合成起始信号的一部分。第92页，课件共145页，创作于2023年2月2.多数真核生物mRNA有poly(A)尾巴除组蛋白基因外，真核生物mRNA的3’末端都有poly(A)序列，其长度因mRNA种类不同而变化，一般为40～200个。poly(A)序列是在转录后加上去的，是在细胞核中的不均一核RNA阶段加上的。

第93页，课件共145页，创作于2023年2月真核基因的3’末端poly(A)起始位点上游15～30bp处有一段保守序列AAUAAA，这对于初级转录产物的准确切割及加poly(A)是必需的。点突变实验将AAUAAA的基因序列AATAAA变为AAGAAA，发现mRNA的剪接加工受阻，没有功能性mRNA产生。第94页，课件共145页，创作于2023年2月RNA聚合酶Ⅱ是真核细胞核中转录RNA的酶。RNA聚合酶Ⅱ在poly(A)起始位点不终止而继续转录，大部分基因的初级转录产物拥有poly(A)位点下游0.5～2kb核苷酸序列。加poly(A)时需要由内切酶切开mRNA3’端的特定部位，然后由poly(A)合成酶催化多聚腺苷酸的反应。

第95页，课件共145页，创作于2023年2月第96页，课件共145页，创作于2023年2月poly(A)作用:mRNA由细胞核进入细胞质所必需的形式，提高了mRNA在细胞质中的稳定性。当mRNA刚从细胞核细进入胞质时，其poly(A)较长，随着mRNA在细胞质内逗留时间延长，poly(A)逐渐变短消失，mRNA开始降解。第97页，课件共145页，创作于2023年2月真核生物mRNA大都具有poly(A)尾巴，这一特性已被广泛应用于分子克隆。常用寡聚dT片段与mRNA上的poly(A)相配对，作为反转录酶合成第一条cDNA链的引物。第98页，课件共145页，创作于2023年2月大部分真核mRNA有poly(A)尾巴，细胞中还有1/3没有poly(A)的mRNA;带有poly(A)的mRNA称为poly(A)+，而把没有poly(A)的mRNA称为poly(A)－;约1/3的poly(A)－mRNA编码了不同形式的组蛋白，其余2/3的poly(A)－mRNA带有与poly(A)+组分相同的遗传信息。第99页，课件共145页，创作于2023年2月3.5终止和抗终止一般情况下，RNA聚合酶起始基因转录后，它就会沿着模板5’→3’方向不停地移动，合成RNA链，直到碰上终止信号时才与模板DNA相脱离并释放新生RNA链。终止发生时，所有参与形成RNA-DNA杂合体的氢键都必须被破坏，模板DNA链才能与有意义链重新组合成DNA双链。第100页，课件共145页，创作于2023年2月第101页，课件共145页，创作于2023年2月3·5·1由基因序列决定的终止终止位点上游存在富含GC碱基的二重对称区，由这段DNA转录产生的RNA形成发卡式结构。在终止位点前面有一段由4～8个A组成的序列，所以转录产物的3’端为寡聚U，这种结构特征决定了转录的终止。第102页，课件共145页，创作于2023年2月在新生RNA中出现发夹式结构会导致RNA聚合酶的暂停，破坏RNA-DNA杂合链5’端的正常结构。寡聚U的存在使杂合链的3’端部分出现不稳定的rU·dA区域。两者共同作用使RNA从三元复合物中解离出来。第103页，课件共145页，创作于2023年2月第104页，课件共145页，创作于2023年2月终止效率与二重对称序列和寡聚U的长短有关，随着发夹式结构(至少6bp)和寡聚U序列(至少4个U)长度的增加，终止效率逐步提高。第105页，课件共145页，创作于2023年2月3.5.2依赖于ρ因子的终止ρ因子是分子质量为2.0xl05的六聚体蛋白，它是NTP酶，它通过催化NTP的水解促使新生RNA链从三元转录复合物中解离出来，从而终止转录。依赖于ρ因子的转录终止区DNA序列无共性，ρ因子不能识别这些终止位点。第106页，课件共145页，创作于2023年2月RNA合成起始以后，ρ因子即附着在新生的RNA链上，靠ATP水解产生的能量，沿着5’→3’方向朝RNA聚合酶移动，到达RNA的3’-OH端后取代了暂停在终止位点上的RNA聚合酶，使之从模板DNA上释放出来，同时释放mRNA，完成转录过程。第107页，课件共145页，创作于2023年2月第108页，课件共145页，创作于2023年2月3.5.3抗终止2023/7/15生科院109由于不同生理要求，转录过程中有时即使遇到终止信号，仍需要继续转录的现象。第109页，课件共145页，创作于2023年2月抗终止的两种类型：1.破坏终止位点RNA的茎-环结构当介质中某一氨基酸的浓度较低时，缺乏相应氨酰-tRNA，将致使核糖体滞留在串联密码子上，mRNA不能形成特定的二级结构，末端茎-环结构被破坏，因此转录仍将继续进行，出现抗终止现象。2023/7/15生科院110第110页，课件共145页，创作于2023年2月2023/7/15生科院1112.依赖于蛋白质因子的转录抗终止蛋白复合物形成后，将会改变聚合酶的构象，使之对终止信号不敏感，从而抗终止。第111页，课件共145页，创作于2023年2月3·6内含子的剪接、编辑及化学修饰3·6·lRNA中的内含子真核基因表达往往伴随着RNA的剪接过程,从mRNA前体分子中切除被称为内含子(intron)的非编码区，并使基因中被称为外显子(exon)的编码区拼接形成成熟mRNA。第112页，课件共145页，创作于2023年2月第113页，课件共145页，创作于2023年2月真核基因大多是断裂的，即一个基因可由多个内含子和外显子间隔排列而成。内含子在真核基因中所占的比例很高，可超过99%。第114页，课件共145页，创作于2023年2月第115页，课件共145页，创作于2023年2月由DNA转录生成的原始转录产物核不均一RNA(hnRNA，heterogeneousnuclearRNA)，经过5'加"帽"和3'酶切加多聚腺苷酸，再经过RNA的剪接，编码蛋白质的外显子部分就连接成为一个连续的可读框(openreadingframe，ORF)，通过核孔进入细胞质，作为蛋白质合成的模板。第116页，课件共145页，创作于2023年2月第117页，课件共145页，创作于2023年2月第118页，课件共145页，创作于2023年2月真核基因平均含有8个内含子，前体分子一般比成熟mRNA大4～10倍。不同生物细胞内含子的边界处存在相似的核苷酸序列。GU-AG和AU-AC分别是不同内含子的5’和3’边界序列，GU-AG是主要的，AU-AC是次要的。除了边界序列之外，外显子与内含子交界处的序列以及内含子内部的部分序列都有可能参与内含子的剪接。第119页，课件共145页，创作于2023年2月第120页，课件共145页，创作于2023年2月3·6·2mRNA的剪接许多相对分子质量较小(106～185bp)的核内RNA(如Ul，U2，U4，U5和U6)以及与这些RNA相结合的核蛋白(被称为snRNPs，ribonucleoproteinparticle)参与RNA的剪接。第121页，课件共145页，创作于2023年2月mRNA链上每个内含子的5'和3'端分别与不同的snRNP相结合，形成RNA和RNP复合物。一般情况下，由UlsnoRNA以碱基互补的方式识别mRNA前体5'剪接点，由结合在3'剪接点上游富嘧啶区的U2AF(U2auxiliaryfactor)识别3'剪接点并引导U2snRNP与分支点相结合，形成剪接前体(Pre-spliceosome)，并进一步与U4、U5、U6snRNP三聚体相结合，形成60S的剪接体(spliceosome)，进行RNA前体分子的剪接。第122页，课件共145页，创作于2023年2月第123页，课件共145页，创作于2023年2月第124页，课件共145页，创作于2023年2月成熟RNA分子的获得第125页，课件共145页，创作于2023年2月哺乳动物细胞中，mRNA前体上的snRNP是从5’向下游“扫描”，选择在分支点富嘧啶区3’下游的第一个AG作为剪接的3’受点。AG前一位核苷酸可以影响剪接效率，一般说来，CAG＝UAG>AAG>GAG。如果mRNA前体上同时存在几个AG，可能发生剪接竞争。第126页，课件共145页，创作于2023年2月在Ⅰ类和Ⅱ类内含子中，内含子的RNA本身具有催化活性，能进行内含子的自我剪接。在Ⅰ类内含子切除体系中，自由鸟苷或鸟苷酸的3'-OH作为亲核基团攻击内含子5'端的磷酸二酯键，从上游切开RNA链。再由上游外显子的自由3'-OH作为亲核基团攻击内含子3’位核苷酸上的磷酸二酯键，使内含子被完全切开，上下游两个外显子通过新的磷酸二酯键相连。第127页，课件共145页，创作于2023年2月第128页，课件共145页，创作于2023年2月在Ⅱ类内含子切除体系中，内含子本身的某个腺苷酸2'-OH作为亲核基团攻击内含子5'端的磷酸二酯键，从上游切开RNA链后形成套索状结构。再由上游外显子的自由3'-OH作为亲核基团攻击内含子3'位苷上的磷酸二酯键，使内含子被完全切开，上下游两个外显子通过新的磷酸二酯键相连。第129页，课件共145页，创作于2023年2月第130页，课件共145页，创作于2023年2月3·6·3RNA的编辑和化学修饰1.RNA的编辑根据中心法则，DNA、RNA和蛋白质之间存在着直接的线性关系，即连续的序列DNA被真实地转录成mRNA序列，然后翻译产生蛋白质分子。断裂基因的发现和RNA的剪接虽然使得基因表达过程增加了一个步骤，但DNA的实际编码序列没有发生变化。第131页，课件共145页，创作于2023年2月RNA的编辑(RNAediting)：是一种较为独特的遗传信息的加工方式，即转录后的mRNA在编码区发生碱基插入、删除或转换的现象，是在RNA分子上的一种修饰。

它导致了DNA所编码的遗传信息的改变，