胶体金法生产工艺规程

胶体金法生产工艺规程

1.适用范围：本文适用于乙型肝炎病毒表面抗体检测试剂盒（胶体金法）的生产和质量控制。2.职责：研发部制定本规程，生产管理部执行本规程，质量管理部按本规程执行并监督执行情况。3.内容：3.1.依据：依据《乙型肝炎病毒表面抗体检测试剂（胶体金法）》产品标准。3.2.产品名称、剂型、规格：3.2.1.名称：(1)商品名：乙型肝炎病毒表面抗体检测试剂（胶体金法）。(2)英文名：DiagnosticKitforAntibodytoHepatitisBSurfaceAntigen(ColloidalGoldImmunochromatographicAssay)。(3)汉语拼音名：YixingGanyanBingduBiaomianKangtiJianceShiji(jiaotijinFa)。3.2.2.类型：三类6840体外诊断试剂。3.2.3.规格：100T/盒(25T/筒*4筒)（无卡）；25袋/盒（1支/袋）、50袋/盒（1支/袋）。3.3.产品概述：乙型肝炎病毒表面抗体检测试剂（胶体金法）采用胶体金免疫层析分析原理、双抗原夹心法，在玻璃纤维纸上预包埋金标记重组乙型肝炎病毒表面抗原，在硝酸纤维素膜上检测线（T）和质控线（C）分别包被重组的乙型肝炎病毒表面抗原和羊抗兔IgG。当检测样本为阳性时，样本中的乙肝病毒表面抗体与胶体金标记的重组乙肝病毒表面抗原结合形成复合物，由于层析作用复合物沿纸条向前移动，经过检测线（T）时与预包被的重组乙肝表面抗原反应，形成免疫复合物而显现红色条带，游离金标记的兔IgG则在质控线（C）与羊抗兔IgG结合显现红色条带。阴性样本则仅在质控线（C）显色。3.4.试剂盒组成、储存、有效期：3.4.1.试剂盒组成：100T/盒组件装量数量25袋/盒（1支/袋）50袋/盒（1支/袋）装量数量装量数量试纸条25条/筒4筒无无无无试纸卡无无1支/袋25袋1支/袋50袋样品稀释液2ml4瓶2ml1瓶2ml2瓶说明书1份1份1份1份1份1份3.4.2.储存条件：2-30℃保存。3.4.3.有效期：24个月。3.5.生产工艺流程图：见文件末（23页）。3.6.生产工艺过程及工艺条件：3.6.1配液：根据各配方，按相关试剂配制作业指导书进行配制。(1)(2)(3)配制环境：配制环境：3.6.2样分装根据《液体分品稀释液装作业指导书》中相应规格的装量要求进行分装。分装量等于规格加上附加量。下表显示了分装量（单位：ml/瓶）：标示量附加量装量15ml0ml15ml3.6.3胶体金制备烧金溶液B和烧金溶液A的制备环境为金标车间配料间（十万级洁净区）。1.量取适量的超纯水到烧瓶中。2.量取烧金溶液A并加入烧瓶中。3.当水沸腾后，加入已经平衡的烧金溶液Bml。4.水继续沸腾5分钟，并关闭加热搅拌器。将烧瓶移至桌面，用铝箔纸盖住瓶口，让胶体金自然冷却。5.胶体金的储存温度为2～8℃，有效期为6个月。3.6.4胶体金标记3.6.4.1根据试样验证结果，量取胶体金，快速搅拌中加入0.2MK2CO3液，混匀后，快速搅拌中加入相应量的乙肝抗原或兔IgG(乙肝抗原和兔IgG分开标记)，混合均匀后，反应30分钟。3.6.4.2终止：充分反应后在搅拌中加入金标记过程终止液（20ul/1ml金溶液）；继续搅拌30分钟直至混匀。3.6.4.3将胶联溶液离心，9000转离心6分钟，收集沉淀并用金工作液定容至总体积的1/10。3.6.4.4储存：2～8℃，有效期6个月。3.6.5铺金液配制3.6.5.1用工作液将1/10体积的乙肝病毒表面抗原金标记物沉淀放大10倍；兔IgG金标记物沉淀按1/3乙肝病毒表面抗原沉淀的量，加至上述乙肝金标工作液中（即兔IgG金标记物沉淀为乙肝的1/3）。3.6.5.2按0.2mg/ml的量加入抗RBC到铺金液中。3.6.6小样试验在铺金和划膜之前，应首先将待铺的基因重组抗原-胶体金复合物溶液，先铺一条玻纤（6mm×310mm）上，用配好的质控线液、检测线液划膜一张，与其他组分组合在一起，进行检测。要求阴性参考品符合率为20份阴性参考品符合率（-/-）应为20/20，灵敏度参考血清呈阳性反应，精密性连续重复测定精密性参考品10次，反应结果应均为阳性，且显色度均一。3.6.7铺金3.6.7.1按每张玻纤可以铺金36ml计算金标液的体积。3.6.7.2按计算好的体积在每张玻纤上铺金，并用圆形试管刮均匀。3.6.7膜包被根据《划膜机标准操作规程》，使用“252”泵速（对应速度2.7ul/cm），将质控线液和检测线液均匀地划在膜上。质控线应划在距膜顶端12.1±0.1cm处，检测线应划在距膜顶端12.5cm±0.1cm处。质控线与检测线之间的距离应为5mm±1mm。在30%湿度以下、37～40℃的环境下干燥18～24小时。如果不立即使用，应加入干燥剂并用铝箔袋封存。在存储过程中，必须严格防潮。打开和使用后，湿度必须控制在30%以下。3.6.8样品垫的准备根据每张玻纤可以铺液36ml的计算方法，计算全血样品垫处理液的体积。然后，在每张玻纤上铺液，并用圆形试管刮均匀。在30%湿度以下、37～40℃的环境下干燥18～24小时。如果不立即使用，应加入干燥剂并用铝箔袋封存。在存储过程中，必须严格防潮。打开和使用后，湿度必须控制在30%以下。3.6.9半成品检测生产出的胶体金、胶金垫、包被膜和分装好的样品稀释液都应作为半成品进行检测。只有经过质量管理部QC按照《半成品检验作业指导书》检验合格的产品才能进入下一道工序。3.6.10组装根据《贴膜组装工序作业指导书》的规定，将包被好的NC膜贴在塑料大卡上。各组成部分的切割大小如下：金标垫：6mm×310mm样品垫：15mm×310mm吸水垫：20mm×310mm不干胶纸：13mm×310mm将上述切割好的材料进行贴膜制成乙型肝炎表面抗体胶体金试纸条。各膜层叠关系如下：1）不干胶纸2）样品垫3）金结合物垫4）包被有检测线（T线）和质控线（C线）的硝酸纤维素膜5）吸水垫6）塑料衬片金标垫2片，第一片搭上NC膜2mm，第二片搭第一片3mm；样品垫15mm，搭上金标垫2mm；吸水垫20mm，搭上NC膜2mm，不干胶13mm，搭上露出的NC膜2mm。在相对湿度30%以下的环境条件下进行组装，并确保所有组件拆封后暴露于空气中的时间不超过2小时。3.6.11切条3.6.使用切条机切割试条为了制作出符合要求的乙肝病毒表面抗体检测试剂，需要按照《切条工序作业指导书》的要求使用切条机，将组装好的试剂切割成宽度为2.5mm±0.1mm的试条。在切条的过程中，需要每30分钟检查一次试条的宽度，以确保符合要求。3.6.12.检测卡的装配根据不同规格的要求，需要将切好的试条装配到完好的PVC卡中，并使用压卡机进行压卡。在装条的过程中，需要注意检查条是否有划痕或污渍，宽度是否符合要求。PVC卡的外观应该清洁、平整、无变形、底面配套性好。在压卡的过程中，需要注意调节松紧度，避免将卡压破或变形。3.6.13.内包装对于成品规格为25支/盒、50支/盒的乙肝病毒表面抗体检测试剂，需要进行内包装。装卡时，需要将单个卡和无水硅胶干燥剂一起放入铝箔袋中，卡印字方向应朝向铝箔袋开口方向，确保无漏装。在密封时，需要检查密封的效果及铝箔袋上的效期印字是否正确，并使用封口机进行封口。对于成品规格为100支/盒的乙肝病毒表面抗体检测试剂，需要装筒，将无卡试纸以25支/筒的规格装入筒中，放入干燥剂，然后封筒。3.6.14.外包装在打印不干胶标签的过程中，需要以试纸条组装日期为“生产日期”，并由此推算出“有效期至”，批号按照《批号管理规程》的规定设置。在贴签时，需要在铝箔袋及试纸筒上贴上标签。对于成品组装，需要按照包装盒标准折叠方法折好包装盒，根据成品组分名称、规格及数量，分别装入检测卡铝箔袋或试纸筒、样品稀释液、说明书。包装组组长每盒清点查看，合格后用封口签（合格证）封口。储存温度为2～30℃，有效期为24个月。3.6.15.成品检定对于乙肝病毒表面抗体检测试剂，需要进行成品检定。抽检量为3%，最小抽检量为500人份。经过质量管理部QC检测合格，QA做生产记录审核后开具《成品放行审核单》方可入库。3.7.质量标准乙肝病毒表面抗体检测试剂的主要原辅料需要符合相应的质量标准及依据。对于重组乙肝抗原，需要进行肉眼观察，不应含有异物、浑浊或摇不散的沉淀或颗粒。用福林-酚法，并以Sigma公司生产的牛血清白蛋白作对照，蛋白浓度需要符合相应的要求。10mIU/ml。批内精密度用1份兔IgG精密性参考品平行检测同批内的10个测试卡，结果应全部呈阳性，且显色度均一。批间精密度：连续三批的小试样本，分别重复检测精密度参考品5次，结果应全部为阳性，且呈色度均一。稳定性试验：置37℃放置10天，进行阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、最低检出量和精密度的检测，应符合要求。同时，该羊抗兔IgG在质控线2分钟内显出，在10-30ug/ml包被时具有活性标记时具有活性。该产品的蛋白含量以毫克/毫升表示，浓度为0.5-10.0mg/ml。使用SDS蛋白电泳法测定时，每个泳道加样量为10μg，电泳带显示无杂蛋白。分子量的质量效价标准符合要求。在制备三批小试样品并与其他合格组分组装后，进行检测。阴性参考品符合率应为20/20，最低检出量应不高于10mIU/ml。批内精密度检测时，使用1份乙型肝炎病毒表面抗体精密性参考品平行检测同批内的10个测试卡，结果应全部呈阳性，且显色度均一。批间精密度检测时，连续三批的小试样本，分别重复检测精密度参考品5次，结果应全部为阳性，且呈色度均一。稳定性试验时，将产品置于37℃放置10天，进行阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、最低检出量和精密度的检测，应符合上述要求。贮藏条件为-20℃冻存。另外，对于兔IgG抗体和羊抗兔IgG，其蛋白浓度经OD280方法检测浓度应不低于5mg/mL。使用SDS蛋白电泳法测定时，每个泳道加样量为10μg，电泳带显示无杂蛋白。在制备三批小试样品并与其他合格组分组装后，进行检测。阴性参考品符合率应为20/20，最低检出量应不高于10mIU/ml。批内精密度检测时，使用1份兔IgG精密性参考品平行检测同批内的10个测试卡，结果应全部呈阳性，且显色度均一。批间精密度检测时，连续三批的小试样本，分别重复检测精密度参考品5次，结果应全部为阳性，且呈色度均一。稳定性试验时，将产品置于37℃放置10天，进行阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、最低检出量和精密度的检测，应符合上述要求。贮藏条件为-20℃冻存。-HBs的最低检出量应不高于10mIU/ml。质量稳定性试验：置37℃放置10天，进行阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、最低检出量和精密度的检测，结果应符合要求。存储条件为常温密封干燥储存，符合《包装材料质量标准及检验操作规程》。半成品质量标准中，胶体金的外观应为紫红色，液面无油状漂浮物，容器底部无黑色颗粒物凝集。最大吸收峰值应在525～535nm处有单一吸收峰。胶体金溶液应进行全波长扫描，符合贮藏条件2～8℃冷藏储存，依据《半成品质量标准及检验操作规程》。胶金垫的颜色应为均一的暗红-暗紫色，无蓝变等异常。胶金垫未涂有胶体金复合物的位置应为玻纤的白色，无异色，宽度均一，无破损。与其他组分组装后检测，阴性参考品符合率应为20/20，抗-HBs的最低检出量应不高于10mIU/ml。批内精密度应全部呈阳性，且显色度均一。存储条件为常温干燥密封保存，符合《半成品质量标准及检验操作规程》。包被膜表面应洁净，无污染、破损等，如有，需用笔标出。包被膜干燥后，在C、T线处均没有明显的痕迹。与其他组分组装后检测，阴性参考品符合率应为20/20，抗-HBs的最低检出量应不高于10mIU/ml。存储条件为常温密封干燥储存，符合《半成品质量标准及检验操作规程》。功能性试验-HBs的最低检出量应不高于10mIU/ml，同时批内精密度应用1份乙型肝炎病毒表面抗体精密性参考品平行检测同批内的10个测试卡，结果应全部呈阳性，且显色度均一。存储条件应为常温干燥密封保存，符合《半成品质量标准及检验操作规程》的规定。样品稀释液的外观所装容器应与规定一致，液体应澄清透明，无絮状物或沉淀。在与其他组分组装后检测时，阴性参考品符合率应为20/20，且最低检出量应为抗质量标准。成品质量标准方面，试剂盒的外观应整齐，组件齐全，数量准确包装整洁，生产批号、生产日期、有效期打印清晰正确。金标条材料应附着牢固，内容齐全；试纸条不应露边、露金条或露吸水纸；卡上的产品名称等内容应印刷正确，字迹清晰。样品稀释液装量应为2ml±0.2ml，试纸条宽度不低于2.5mm，液体移行速率不低于10mm/min。用20份乙型肝炎病毒表面抗体阴性参考品进行检测时，阴性参考品符合率应全部呈阴性，且最低检出量为10mIU/ml。同时，用1份乙型肝炎病毒表面抗体精密性参考品平行检测同批内的10个测试卡，结果应全部呈阳性，且显色度均一。在成品质量标准的稳定性方面，将成品于37℃放置10天后，应符合以上规定。存储条件为2～30℃常温密封保存，符合《成品质量标准及检验操作规程》的规定。主要质量控制点包括配液、金标垫制备、胶体金制备、重组乙肝表面抗原-胶体金复合物制备等工序。在配液过程中，应按照配方称量配制，一人称量一人复核。在金标垫制备过程中，烧金容器应洁净，加液量准确且迅速，在沸腾时加液。在重组乙肝表面抗原-胶体金复合物制备过程中，离心时应保持平衡，离心转速为9000转/分钟，时间为10分钟。复溶液体应澄清，不得有不溶沉淀。铺金应均匀，干燥时间为18～24小时，温度为37～40℃，湿度应在30%以下，储存环境为常温，湿度30%以下。质控线应划在距膜顶端12.1±0.1cm处，检测线应划在距膜顶端12.5cm±0.1cm处。制备膜条时，应使用划膜机泵速为“252”，干燥时间为18～24小时，温度为37～40℃，湿度应控制在30%以下。储存环境应为常温，湿度也应控制在30%以下。质控线与检测线之间的距离应为5mm±1mm。制备样品垫时，应均匀铺垫并在40℃、湿度30%以下的环境下干燥18～24小时。储存环境应为常温，湿度也应控制在30%以下。样品稀释液应每瓶装量2±0.2ml，瓶盖应紧密不漏液。制备试纸条时，应使用金标垫6mm，2片，第一片搭上NC膜2mm，第二片搭在第一片3mm上。样品垫应为15mm，搭上金标垫2mm。吸水垫应为20mm，搭上NC膜2mm，不干胶13mm，搭上露出的NC膜2mm。环境湿度应控制在30%以下。切割试条时，每30分钟应检查切条的宽度，确保宽度为2.5mm。环境湿度应控制在30%以下。试纸条应放置在卡的相应位置，且无漏放。铝箔袋应封口严密，干燥剂应无漏放。内包装的环境湿度应控制在30%以下。每个质量控制点均应在该工序生产操作开始前、操作过程中、操作结束后进行三次监控。对于用时较长工序，应适当增加监控频次。在生产前，应检查人员、设备、物料、环境是否符合工艺标准，并达到相应卫生要求。检查物料名称、级别、数量、外观、状态标识、存放条件是否符合工艺要求和生产规模，原辅料、包装材料及半成品的质量是否符合要求。检查设备、仪器、器具是否有状态标识，处于清洁、完好状态。各相关的记录、凭证是否齐全，生产过程中的记录是否完整、规范。检