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编号:1-:荧光能量转移(fluorescenceresonanceenergy荧光能量转移(fluorescenceresonanceenergytransfer,FRET)作为FRET荧光能量转移是指两个荧光发色基团在足够靠近时当供体分子吸收一定频长。能量转移的效率和供体的发射光谱与受体的吸收光谱的程度、供体与受②供体的发光光谱与受体的激发光谱 细胞转染质粒:CFP-A和YFP-B质粒;多光子共聚焦显微镜和FRET观察FRET检测时间:CFP-A或YFP-B转染细胞12h、18h、24h、36h、48h、72h后检测FRET。FRET图像:确定FRET配对的激发波长,蓝宝石激光被调谐分别用于探测最大和最小的供体和受体信号,最大供体信号和最小受体信号对应的波长用于收集双表达细胞的FRET信号。标定CFP(供体)和YFP(受体,调整激光变化,以便获取最大CFP信号和最小YFP 的PMT, 受体图像,收集FRET信号,调整供体激光强度,固定用于激发供体,对受体激每个细胞FRET检测重复3次,每种转染至少完成6个细胞的FRET检测。FRET数据处理:去除FRET信号中
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