乙型肝炎病毒e抗原检测标准操作规程

乙型肝炎病毒e抗原检测标准操作规程××医院检验科临床免疫室作业指导书文件编号:XXX生效日期：共页第页1.目的建立检测血清中乙型肝炎病毒e抗原含量的标准操作规程，保证实验结果的精确性及正确性。2.原理LISA用双抗体夹心法进行检测，在微孔条上预包被纯化乙肝e抗体(HBeAb)，在包被板加待测血清及酶标记的抗HBe，温育后洗涤除去未结合的游离酶，以四甲基联苯胺(TMB)为底物显色后读板显色。2．2·采用电化学发光法进行检测：采用双抗体夹心法原理检测，吸取35μl标本到反应池，将生物素化抗HBeAg单克隆抗体和钌(Ru)标记的抗HBe抗体混匀，形成夹心复合物。加入链霉亲和素包被的微粒，使上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素之间的反应结合到微粒上。反应混合液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。检测结果由软件自动测出，与预先用抗HBe标定的标本cutoff值比较得出结果。3.标本要求根据试剂盒说明书要求收集存储样本，血清标本采集用标准样本试管或含分离胶的试管，血浆样本采集使用肝素(Li，Na)或K3EDTA，一般来说，标本在2~8℃可稳定7天，－20℃可稳定6个月。4.试剂与仪器4．1·试剂组成和仪器(酶联免疫吸附法)：试剂组成一般如下：包被抗原板、底物A液、酶标比色仪。4．2·试剂组成和仪器(电化学发光法)：试剂组成一般如下：链霉亲和素包被的微粒、生物素化的抗HBeAg单克隆抗体、Ru(bpy)32＋标记的抗HBeAg单克隆抗体、Cal1校准液和Cal2校准液、HBeAg质控品1和2。采用仪器为全自动电化学发光分析仪。5.操作步骤5．1·ELISA方法(具体操作参照试剂说明书或所在科室制定的SOP)50μl(或1滴)，设空白对照1孔(空白孔只加底物和终止液)，可设置外部质控品1孔，用即时贴封板，然后加HBeAg酶结合物，每孔50μl(或1滴)，混匀。置37℃水浴30min。纸拍干。，终止反应后10min内测定，空白孔调零，测定波长为450nm，进行相应的比色测定。5．2·电化学发光法(具体操作参照试剂说明书或所在科室制定的SOP)：开机后仪器自y6.校正(电化学发光法)每开启一批新的试剂，需在输入批数据后进行校准，之后按照试剂说明书(如每隔28日或出现结果异常等情况时)需再进行一次校准。校准品在同一次运行中必须重复测定2次，且校准值必须在设定的范围内。如果不在该范围内，则应重新校准。7.质控(电化学发光法)一般采用两种浓度水平的质控品，至少每24h或每一次校准后测定一次。质控间隔期应适用于各实验室的具体要求。质控品检测值应落在设定的范围内，如出现质控值落在范围以8.结果判断8．2·电化学发光法：仪器会自动根据Cal1和Cal2的测定值计算cutoff值。标本的cutoff指数＜1．0判断为HBeAg阴性。标本的cutoff指数≥1．0判断为HBeAg阳性。每一个标本的结果以“有反应性”或“无反应性”以及cutoff指数形式(标本信号／cutoff)报告。9.生物参考区间10.性能参数具体参见相应的试剂说明书。11.临床意义HBeAg为HBV内衣壳的一部分，即前核心蛋白(preC)，由基因preC编码在病毒复制时产生，与HBV增殖相关，是反映HBV复制和传染的标志。仅见于HBeAg阳性者，在HBsAg之后或短期内出现，高峰在发病2~3个月，通常在4个月后消退。阳性提示HBV复有较强的传染性；阴性提示病毒数量少，传染性减弱。HBsAg和HBeAg同时阳性为HBV