三大微生物检验细菌学09级

第一章

1、生物安全(Laboratorybiosafety):的生物安全条件和状态不低于容许水平，可避免人员、来访人员、社区及环境受到不可接受的损害，符合相差、标准等对生物安全责任的要求。生物安全防护（biosafetyprotectionfor确保：工作人员不受实验对象侵染，周围环境的生物安全。3、必须设有专职的生物安为生物安全的第一责任人 –生物安全防护要求：一级最低，四级最高。4、在主合理设置清洁区、半污染区和污染5、各级生物防护特一级生物安全防护（BSL-1/P1）：适用于对健康成年人已知无致病作用的微生物，如用于教学的普通微生物等。二级生物安全防护（BSL-2/P2三级生物安全防护（BSL-3/P3）：适用于主要通过呼吸途径使人传染上严重的甚至是致死疾病的致病微生四级生物安全防护（BSL-4/P4）：适用于对具有高度的性，通溶胶途径或途径不67、生物安全柜（BSC）biosafetycabinetI、Ⅱ、Ⅲ级生物安全柜。保证工作人员不受，但不保证实验对象不受污染。既保证工作人员不受，也保证实验对象不受污染； 10、注：高压蒸汽灭菌：负责者离开室培养基..... 无菌操作.、使用灯、灭菌吸管......10倍递增稀 培养基倾注于平皿：45℃±1℃、lh内完成、无菌检验...... 样 采样时 采样方 注意事血骨

尿 晨 中段

得加防腐剂或剂。粪 急性

痰本

食物时，可疑食物样本2、食品样本种普通光学显微镜×（0.04μm：50）常用的细菌：人工合成带苯环的，色基+助色基单纯：苏丹酸性：、酸性品红、刚果红碱性：美蓝、孔雀绿、甲紫和碱性复红等复合：、瑞氏等鉴别染色法:染色法、抗酸染色Grams抗酸染色法：抗酸菌：分枝杆菌/分枝菌酸。一般不易，一旦染上色后又不易被盐酸脱色。7、负染色法：背景而细菌本身不固体培养基：主要用于分离培养；平板、斜面、及斜面；琼脂用量为1.5%～2%基础培养基(basicmedium)营养培养基(nutrientmedium)增菌培养基(enrient选择性培养基(selectivemedium)鉴别培养基(differentialmedium)培养基(dedicatedmedium)10、增菌培养基：多为液体。↑目的菌，↓杂菌。营养成分＋抑制物质12、培养基的一般程12pH345615、 脂溶性色素则使细菌菌落。金黄色葡萄球菌的金黄色菌落。梭菌→粪臭、味；产黑色素类杆菌属细菌→辛辣味试验23、β预测细菌发酵乳糖β-半乳糖苷酶-渗透酶(Pβ-半乳糖苷酶(G)吲哚＋二甲氨基苯→玫瑰吲哚(红色)28、学鉴定serologicalidentity：确定致病菌的种或玻片凝集试验、29、学诊–已知的细菌/特异性抗原＋特异抗体31、鲎试验(limulustest，LT)定量及半定量检测细菌内毒素32、细菌数量的测定：物理；生物Breed：Directmicroscopic半定量；倾注平板法；旋管；滴液；琼脂表面；膜滤过； Lformsbacterium：一种细菌通过变异而产生的细胞壁缺陷型 4、温和噬菌体：TemperatePhage：与宿主菌的整合，随细菌DNA的而，随细菌的而传代，不产5、噬菌斑(噬斑形成单位(pfu)的测定：若将噬菌体按一定倍数稀释，通过噬斑计数，可测定一定体积内的噬斑形成单位(queformingunits,pfu)数目，即噬菌体的数目。78、药敏试验(drugsusceptibilityMIC：24最小杀菌浓度MBC：99.9%（3）的供试微生物所需的最低药物浓度标准实验方法抑菌环的大小反映待测菌对该药物的敏感程度，MIC中介原理M-HMIC，（1∶10×1∶20结果判定MIC。P912DNAG＋Cmol/%DNAG＋Cmol%含量不同是细菌的一个重要遗传特征单一菌种中许多不同菌株的G＋Cmol%平均值极为接近或者是一致的。属名，名词，首字母大M.tuberculosis(结核分枝杆菌)、Styphi泛指某一属细菌：属名＋spMycobacteriumsp，SalmonellaKlesbsiellapenumoniaesubspeciesp4、细菌分类系统《氏鉴定细菌学手册第七章、学试验技1、学试原理：将试验微生物于因子(物理、化学、生物学)，作用预定的时间之后，检查试验的微生物是否被2、disinfection：杀灭或清除媒介上病原微生物，使其达到的处理4、药械鉴定测试的项剂中和剂法： 中和剂：中止剂的杀微生物作本身及其 2.将剂用灭菌蒸馏水配制成3种不同浓度，在不加中和剂的情况下，测知该剂10min抑杀指示菌99.9％3.取剂10min抑杀指示菌的最低有效浓度与待选择中和剂进行试验选出中和剂种类并依据等当量中和原则，4.中和剂选择试验时，先将剂1.0mL与中和剂溶液9.0mL混合，制成中和产物溶液，再分组进行消＋菌：剂对试验菌有无杀灭或抑制能力稀＋中＋培养：对照灭菌试管10，标号。每管：灭菌蒸馏水2.5mL，20±2℃水浴。＋液2.5mL，倍比稀释，至第9管。第10管40.5mL4.5mL10min0.5mL4.5mL5若培养至第7天，肉汤管澄清，则表示无菌生长，记为，以（—）表示原理：将一定量的细菌悬液或菌片(载体)，于设计浓度的液中，作用至规定时间后，取细菌与液以存活的菌落数与最初加入的菌数比较，计算出杀灭率，或杀灭效果(germicidaleffect，GE)。 活菌培养计N是试验中对照样品平均cpm值或OD值1？（增菌、选择性平板（肖老师某次课后在黑板上总结过，大家注意哦第十一章§1①形态Ｇ-菌体弯或直的杆菌呈形或逗状单鞭毛米泔水便中可呈尾相接鱼群样排列作悬滴观察时，因细菌一端有鞭毛，呈穿梭样运动。在暗视野显微镜下观察，犹如夜空中的流星。无荚膜，有普通菌9生长温度：16～42pH：6.0～9.2/7.2～7.4/8.4～8.6/③抗原特性：O1 -- +，透⑴初步鉴定：显微镜下涂片染色：G-；动力检查：+（制动试验；氧化酶试验：+⑵生化确认：法国埃ID32E鉴定试剂条急人的水样便→直接镜检：流星状动力的细菌。+O1群霍乱免疫→运动停止，凝集成块 KP第十三章§1分离 各取0.1ml上述3种经处理样品，分别接种BCYE或GVPC平板鉴定：培养确证：BCYE生长/BCYE-Cys不生长 2种水溶性色素1、增菌：1∶1010ml90mlSCDLP 嗜冷菌：2～42℃(也有在0℃能缓慢生长)。“冰箱”绿脓杆菌的鉴定方法有：染色、镜检，氧化酶试验，硝酸盐还原产气试验、A.十二指肠溃疡B.胃炎C.肝 B.触酶试验C.尿素酶实验 A杆菌B严格需氧菌C硝酸盐还原实验阳性D具有运动布鲁菌的常用培养基是 快速马尿酸钠试验、快速硫化氢试验、快速DNA酶水解试验 （+（+（+第＋四章人 2、非特异性螺旋体抗原学试验VDRL抗原＋活性炭颗粒→RPR第15 我国发现 二方式繁殖。2GimenezGiemsaGimenez染色：呈红色，背景为蓝色。 Giemsa染色：呈紫红色，常显两端浓染。除恙虫病次体多采用Giemsa法外，其他次体常用Gimenez法。3、次体有两种主要抗原4、(氏)反 用与次体有共同菌体抗原的变形杆菌OXl9、OX2、OXk进行非特异性凝集反应，检测中有5、埃体：×鸡胚，×无生命培养基，∨体外细胞培养16原体较小而致密，有胞壁，胞外稳定，是发育成衣原体，具有性。Giemsa染色呈紫色Macchiavello(RB)第17章支原体Myco10～40μm，须在低倍显微镜下观察，故原称为“T”株(tinystrain)。6、支原体无细胞壁，而细菌L型是细菌失去细胞壁所形成的细胞壁缺陷型，二者在许多生物学性状上相似。 L型细菌 8，91.血浆凝固酶:是多数致病菌株能产生凝固酶，能使含有肝素等抗凝剂的人或兔血浆发生凝固的酶类物质,致病株大多数能产生,是鉴别葡萄球菌有无致病性的重要指标SPA：(StaphylococcalproteinA,SPA)A蛋白，存在于细胞壁的一种表面蛋白，为完全抗原，具属特异性。90%以上的金黄色葡萄球菌细胞壁的一种表面蛋白。本质为单链多肽，与肽聚糖形成共价键结合，SPAIgG1、IgG2、IgG4分子的FcOptochin试验：奥普托欣试验原理：几乎所有链球菌对奥普托欣试验敏感，而奥普托欣试验对其他链球菌则抑菌环直径＞15mm为球菌。 1.产生脂溶性金黄素2.血平板上菌落周围产生透明溶血环3.发酵甘露醇4.血浆凝固酶阳 脑膜炎菌和菌有哪些异同点菌菌培养特 高营养、致病 致病物荚膜、菌毛、外膜蛋白、培养特点:1.营养要求不高；2.需氧或兼性厌氧；328-38℃；4.某些菌株耐盐(10％NaClA人对金黄色葡萄球菌有一定的天然免疫力。当皮肤粘膜发生损伤或机体免疫力降低时才易引起。病后能获得一分离培养——普通平板、血平板、Baird-Parker平板、高盐甘露醇平板、卵磷脂高盐平板等金葡球菌鉴定培养基—S.aureusID：灰绿色菌落为金葡球菌™aureus0.2ml，0.5ml0.250.25ml37℃水浴，观察血浆凝固。从血浆凝固起记录溶化时间，溶化时间越短，链激酶越多。，G–杆菌，无芽胞，多数有动力，致病性菌株多有菌毛，具有质粒。抗原构造:包括菌体（O）抗原、鞭毛（H）3OH抵抗力:不强，不耐干燥，对一般的化学剂均敏感。变异性:乳糖发酵试 肠道致病 不发酵乳 、、结果分析及临床意义O>1：80，H甲型副伤寒H凝集价>1：80，沙门菌H凝集价 或在疾病早期及中后期分别两次若第二份比第一份的效价增4 OIgM，持续时间短（约半年），消退后不易受非特异性病原刺激而重现。H抗体出现较晚，为IgG，持续时间长达数年，消退后易受非特异原刺激而重现。①OH④若O高H不高，则可能为早期，或与其他沙门菌有交叉反应，或H-O变异的沙门菌引起的等，建议H注意事项①确诊为伤寒的患者中约有10%肥达反应始终为，故结果不能排除伤寒的确诊。其原因可能由于早期使肠炎：粪便、物、可疑食4、SS成分（g/L）5510；8.5；8.58.51；琼17.0；0.0250.33ml1LpH7.0～7.1（25℃）H2S者菌落中心呈黑色，部分菌株如亚利桑那亚属Ⅲ有分解乳糖的菌落呈红色、中心黑色，志贺菌属的菌落呈无色透明。大肠埃希菌呈红色混浊。宋内志贺菌能延缓发酵乳糖，培养24h1.5mm以上。及区别肠道内的致病菌和大肠埃希菌。KIA1：10PH<6.8KIAPHMIU：动力、吲哚及脲酶（MIU）复合试验【原理】：培养基为含尿素、蛋白胨的半固体培养基，指示剂为酚红。具色氨酸酶的细菌能分解色氨酸产生吲哚，加入吲哚试剂后，培养基上层的吲哚会变红；具脲酶的细菌能分解尿素产氨，使整个培养基变碱呈红色；有动力的细菌沿穿刺线扩散生长。【方法】：将大肠埃希菌和普通变形杆菌穿刺线接种于MIU培养基，35ºC，18-24h，观察动力和脲酶反应后，再滴加吲哚试剂。【结果】：扩散生长为动力阳性；滴加吲哚试剂后呈玫瑰红色为阳性；培养基变红脲酶阳性。IMViC：用来测定菌的生理生化特征的4个实验.主要是用来快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌，多用于水的细菌学检查。I:吲哚试验；M:甲基红试验；V:V.P试验；C:柠檬酸实验4）V-W:异：指沙门菌失去Vi——Vi抗原部分丧失，既可与O抗发生凝集又可与Vi抗凝集者称VW型菌5）Vi:由聚-N-乙酰-D-半乳糖胺糖醛酸组成。不稳定，新从患者标本中分离出的伤寒杆菌、丙型副伤寒杆菌等有此抗原。Vi抗原存在于细菌表面，具有微荚膜功能，能抵抗吞噬细胞的和吞噬，并阻挡抗体、补体等Vi6）反应：变形杆菌属的X19,X2.Xk菌株的菌体O抗原与斑疹伤寒次体和恙虫病次体有共同抗原，故可用OX19，OX2，OXk代替次体作为抗原与相应患者进行交叉凝集反应，此称试验，辅助诊断次体病第十二章阳性杆granules。。结核菌（OT）素试验