流式细胞术实验方法及应用描述课件_第1页
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流式细胞术实验方法及应用何玉萍科研型Ourweapon:EPICSALTRAFlowCytosorter分选功能488nn激光四色荧光(525、575、610675nm)、流式细胞术的原理流式细胞仪的发展起源于细胞计数自动化的研究。其原理是被荧光染色的单细胞或颗粒,经过高速的液流系统形成细胞柱,排列成单细胞依次通过流动室,在激光照射区域,携带荧光素细胞受激发产生不同的荧光信号,这些荧光信号可以反映细胞的生物特性。激光前向散射FALSSensor8Fluorescence侧向散射,荧光信号FCM的液流系统(如SampleamplaLine何形成单个细胞流)PickupTubeSheathInput样本管鞘液管近30年来流式细胞术在我国得到很快的发展,应用范围不断增大。目前,流式细胞术作为一门生物检测技术广泛应用于免疫学、血液学、肿瘤学、细胞遗传学、细胞生物学、生物化学等临床医学和基础医学研究领域。二、流式细胞术的特点、优点速度快极短时间内可分析大量细胞,每秒可检测上万个细胞,甚至几万个细胞。多参数分析可同时分析单个细胞的多种特性,获得单个细胞多种信息,也可以根据其细胞表面标志的不同把细胞群分为各亚群定性、定量分析细胞通过荧光染色对单细胞的某些成分,如:DNA、抗原或受体等进行定性、定量分析。灵敏度高荧光能检测到单个微粒上标有荧光分子少于<600个(如FITC或PE);前向角检测到小于0.3um颗粒分选感兴趣的细胞纯度达99%,收获率可达90%流式细胞术的应用范围细胞大小细胞表面分子:CD系列细胞浆内分子:胞内细胞因子细胞核内分子:P53细胞功能检测:细胞周期、细胞凋亡其他:线粒体膜电位、细胞内钙离子浓度三、单克隆抗体标记荧光探针选择1.了解激发光波长和发射波长常用荧光素激发光波长(mm)发射波长(m异硫氰酸(FITC)488525(绿)藻红蛋白(PE)488575(橙)碘化丙啶(PT)488610(红)藻红蛋白偶联物(P488667(红)CY5)藻红蛋白偶联物(PE488767(红外)CY7)别藻青

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