DNA的生物合成和损伤修复

DNA的合成及重组

DNABiosynthesisandRecombination第十六章DNA生物合成DNA复制（DNA指导的DNA合成）逆转录

(逆转录病毒RNA指导的DNA合成)校正复制中可能出现的错误，并修复受到损伤的DNA细胞中酶促修复系统自然界DNA重组和基因转移的基本方式基因组复制的主要特点TheGeneralfeaturesofGenomeReplication

第一节一、基因组是细胞或病毒全部遗传信息的总和

含有一种生物的一整套遗传信息的遗传物质，称为基因组（genome）。在真核生物体中，基因组是指一套完整单倍体DNA（染色体DNA）和线粒体DNA的全部序列，既包括编码序列，也包括非编码序列。二、基因组DNA复制具备一些共同特征（一）基因组DNA都具有固定的复制起始点（二）复制过程中形成复制泡和复制叉（三）复制的基本单位称为复制子

（四）半保留复制方式保证遗传信息的忠实传递

（五）半不连续复制克服了DNA空间结构对DNA新链合成的制约

（六）复制起点由多个短重复序列组成

（七）DNA复制必须有引物复制起点（origin）：指DNA复制所必需的一段特殊的DNA序列。

（一）基因组DNA都具有固定的复制起始点双螺旋DNA复制时，复制区生长点的结构呈Y形或叉形，称之为复制叉。（二）复制过程中形成复制泡和复制叉目录从一个DNA复制起点起始的DNA复制区域，它是一个独立复制单位，包括复制起点和终点。复制子（replicon）（三）复制的基本单位称为复制子

（四）半保留复制方式保证遗传信息的忠实传递（1）全保留式（conservative），即恢复原来的DNA双螺旋，并产生一个新的子代DNA双螺旋；（2）半保留式（semiconservative），即新老搭配，由一条新合成的DNA链和一条复制模板链配对产生子代双螺旋DNA；（3）散布式（dispersive），即复制模板链被分成许多小片段，散布于子代DNA中。两条新合成的DNA链和两条原来的复制模板链之间的结合方式可能性：密度梯度实验

——实验结果支持半保留复制方式含重氮-DNA的细菌培养于普通培养液

第一代继续培养于普通培养液

第二代梯度离心结果前导链（leadingstrand）:DNA复制时，一条链的合成方向和复制叉前进方向相同，可以连续复制合成的新链。后随链（laggingstrand）:另一条链的合成方向与复制叉前进方向相反，不能连续复制，只能分成若干小片段分别合成，然后连接起来形成新链。后随链中的小片段称为冈崎片段（Okazakifragments)。（五）半不连续复制克服了DNA空间结构对DNA新链合成的制约前导链连续复制而后随链不连续复制，即DNA半不连续复制。复制起点的一般特征:①由多个独特的短重复序列组成。②短重复序列被多亚基的复制起始因子所识别并结合。③一般富含AT，利于双螺旋DNA解旋，以产生单链DNA复制模板。（六）复制起点由多个短重复序列组成E.coli复制起始点oriCGATTNTTTATTT···GATCTNTTNTATT···GATCTCTTATTAG···11317293244···TGTGGATTA-‖-TTATACACA-‖-TTTGGATAA-‖-TTATCCACA5866166174201209237245

同向重复序列

反向重复序列5353酵母复制起点为自主复制序列（autonomouslyreplicatingsequences，ARS）：酵母染色体含有多个复制起点。元件A(富含A/T的共有序列)：结合一个特异的蛋白质复合物──复制起点识别复合物(ORC)。

3个序列(B1、B2和B3)可以增加复制起点的效率，其中B2的9个碱基与上述ARS共有序列相同。酵母复制起始点DNA聚合酶不能从游离的核苷酸开始合成DNA链，必须由引物（primer）提供自由的3-OH末端，通过加入核苷酸使之不断延伸。所有细胞和多数病毒的DNA复制，首先利用模板合成一段RNA引物，这一过程为引发（priming）。RNA引物5端的第一个核苷酸通常是pppA（个别为pppG）。（七）DNA复制必须有引物1.多数DNA复制使用RNA引物174等噬菌体以双链环形DNA的一条链上产生切口处的3-OH为引物；腺病毒及某些线性DNA病毒以结合于病毒DNA的5端磷酸基团的末端蛋白上的dCTP的3-OH为引物开始复制。2.个别DNA复制以DNA或核苷酸为引物三、不同基因组DNA通过不同的模式

进行复制（一）真核生物基因组DNA复制过程涉及反转录（二）基因组单链DNA通过复制中间体完成复制

（三）有的基因组DNA通过RNA中间体进行复制

（四）双链环状DNA也有不同的复制方式四、不同基因组RNA通过不同的

模式进行复制（一）基因组双链RNA复制过程是双链复制

（二）基因组单链正链RNA以负链为模板进

行复制

（三）基因组单链负链RNA以正链RNA为模板进行复制

（四）反转录病毒的基因组RNA通过DNA中间体进行复制

DNA复制过程

ProcessofDNAReplication第二节一、原核生物DNA复制体现了复制的基本过程和特征（一）在复制起点解旋酶和多种因子形成复合物

1.E.coli复制起始需要6种蛋白质因子

2.解螺旋酶激活引发酶形成引发体

3.解旋还需要促旋酶和SSB

DnaA、DnaB、DnaC、HU、促旋酶（gyrase，即拓扑异构酶Ⅱ）、单链DNA结合蛋白(singlestrandbindingprotein,SSB)DNA复制需要6种蛋白因子：E.coliDNA复制起始

结合oriC的4个9bp反向重复序列形成复制起始复合物。作用于oriC的3个13bp正向重复序列，DNA在这3个位点解链，形成开放型复合物（opencomplex）。DnaA蛋白53解旋酶作用产生两条复制模板链激活引发酶DnaG蛋白DnaB蛋白与引发酶结合，形成引发体DnaB蛋白使一条DNA链围绕着另一条旋转，消除解旋产生的张力。促旋酶SSB蛋白HU蛋白稳定解旋后的单链DNA构象，有助于解旋。DNA结合蛋白，对复制起促进作用。HU蛋白能够使DNA发生折叠。E.coli中DnaB结合引发酶DnaG，催化合成RNA引物，其序列始于pppAG，模板链序列3-GTC-5，引物长度一般11~12个碱基。（二）引发酶合成RNA引物负责切除RNA引物。（三）复制时聚合酶Ⅲ催化DNA合成而聚合酶Ⅰ切除引物DNA聚合酶Ⅰ可利用损伤尚未修复的DNA链作为模板合成DNA，但不能修复损伤。负责合成DNA。DNA聚合酶ⅢDNA聚合酶ⅡTLS1Rev1TLS，体细胞高变1Pol相对准确的TLS（穿越环丁烷二聚体）1PolTLS1Pol体细胞高变（somatichypermutation）1Pol减数分裂相关的DNA损伤修复1PolTLS1PolDNA交联损伤修复1PolDNA复制，核苷酸切除修复，碱基切除修复4PolDNA复制，核苷酸切除修复，碱基切除修复2~3Pol线粒体DNA复制和损伤修复3Pol碱基切除修复1Pol合成引物4Pol功能亚基数目真核生物TLS（translesionsynthesis）3PolⅤ(UmuC,UmuD)DNA损伤修复，穿越损伤合成（TLS）1PolⅣ(DinB)染色体DNA复制9PolⅢ全酶染色体DNA复制3PolⅢ核心酶DNA损伤修复1PolⅡ去除RNA引物，DNA损伤修复1PolⅠ功能亚基数目原核生物（E.coli）原核、真核细胞DNA聚合酶的类型和功能目录２个核心酶1个-复合物（、、、、、

6种亚基）可滑动的DNA夹子（含1对-亚基）DNA聚合酶Ⅲ全酶结构全酶结构包括：亚基（130000）主要功能是合成DNA亚基具有35外切酶活性（校正功能）亚基可增强其活性亚基可能起组装作用核心酶由、和亚基组成：2个-亚基分别和1个核心酶相互作用，其柔性连接区可以确保在复制叉1个全酶分子的2个核心酶能够相对独立运动，分别负责合成前导链和后随链。功能：-复合物是DNA夹子加载蛋白，负责将可沿DNA链滑动的一对-亚基（DNA夹子）加载于DNA，使DNA聚合酶Ⅲ具有持续合成能力。-复合物由6种亚基组成：、、、、、

在复制叉同时合成前导链和后随链35353535前导链(leadingstrand)后随链(laggingstrand)解链方向冈崎片段3553外切酶：去除RNA引物35外切酶：起校正作用DNA聚合酶活性：填补两个冈崎片段之间的缺口DNA聚合酶Ⅰ有3个酶促活性结构域:323个氨基酸小片段5核酸外切酶活性大片段：Klenow片段

604个氨基酸DNA聚合酶活性

5核酸外切酶活性N端C端枯草杆菌蛋白酶DNA-polⅠTus蛋白具有反解旋酶（contra-helicase）活性，识别并结合ter序列中共有序列，阻止DnaB蛋白的解旋作用，从而抑制复制叉前进。Tus蛋白除了使复制叉停止运动以外，还可能造成复制体解体。(四)Tus蛋白识别复制终点使复制终止在复制叉汇合点两侧约100kb处各有一个终止区（terD/A和terC/B）。当oriC处于半甲基化状态时，SeqA蛋白迅速结合半甲基化的GATC，阻止Dam甲基化酶与之结合，使复制起点不能被完全甲基化，同时阻止DnaA蛋白结合oriC。oriC的GATC被完全甲基化，DnaA蛋白就能与之结合，开始新的一轮复制。(五)DNA甲基化保证复制起点在每个复制周期中仅起一次作用E.coli复制起点oriC含有11个拷贝GATC，这一回文序列中的A是Dam甲基化酶的靶位点。在复制过程中，DNA每复制10bp，复制叉前方的模板DNA双螺旋就要绕其长轴旋转一周，产生正超螺旋。拓扑异构酶是一种可逆的核酸酶。它们可共价结合DNA分子上的磷酸基团，切断磷酸二酯键。(六)DNA复制需要两类DNA拓扑异构酶消除正超螺旋，使复制叉能够顺利前进。维持E.coli、噬菌体和质粒DNA复制起始模板DNA负超螺旋状态。环形染色体复制后产生的两个子染色体连环体解连环。DNA拓扑异构酶功能：E.coIi的TopoⅠ只作用于负超螺旋DNA，消除负超螺旋。

DNA拓扑异构酶Ⅰ的功能：E.coli的TopoⅡ将前方产生的正超螺旋转变为负超螺旋。DNA拓扑异构酶Ⅱ的功能E.coli

的TopoⅣ功能是将复制产生的两个子染色体从连环体中分离出来，催化连环和去连环过程。真核生物复制子多、冈崎片段短、复制叉前进速度慢等；DNA复制从引发进入延伸阶段发生DNA聚合酶/转换；切除冈崎片段RNA引物的是核酸酶RNAseHⅠ和FEN1等。二、真核生物DNA复制和原核生物相似但更为复杂真核生物与原核生物DNA复制的差异：(一)常见的真核细胞DNA聚合酶有5种A家族与大肠杆菌PolⅠ同源，包括Pol和PolB家族与大肠杆菌PolⅡ同源，包括Pol、、和ζC家族与大肠杆菌PolⅢ同源，仅在真菌中发现X家族与大肠杆菌DNA聚合酶并无同源性，却与末端转移酶同源，成员包括Pol、、Y家族（UmuC/DinB超家族），近年发现一个特殊的真核及原核DNA聚合酶家族，成员包括Pol、、和Rev1Pol负责合成引物Pol负责DNA复制、核苷酸切除修复和碱基切除修复Pol的功能与Pol相似（其确切功能尚待定）Pol可能和碱基切除修复有关Pol负责线粒体DNA复制和损伤修复常见的真核DNA聚合酶有5种：拓扑异构酶，去除负超螺旋（使解旋酶容易解旋），去除复制叉前方产生的正超螺旋TolⅠ和TolⅡDNA双螺旋解链，参与组装引发体DNA解旋酶连接冈崎片段DNA连接酶Ⅰ核酸酶，切除RNA引物RNAseHⅠ核酸酶，切除RNA引物FEN1DNA复制，核苷酸切除修复，碱基切除修复Pol/合成RNA-DNA引物Pol/引发酶有依赖DNA的ATPase活性，结合于引物-模板链，激活DNA聚合酶，促使PCNA结合于引物-模板链RFC激活DNA聚合酶和RFC的ATPase活性PCNA单链DNA结合蛋白，激活DNA聚合酶，使解旋酶容易结合DNARPA功能蛋白质真核DNA复制叉主要蛋白质的功能(二)真核DNA复制叉主要蛋白质的类型和功能与原核基本相似DNA聚合酶（Pol）分子含有4个亚基：1.DNA聚合酶/引发酶复合物合成RNA-DNA引物p180：催化亚基p48：具有引发酶活性p58：p48的稳定性和活性所必需的p70：与组装引发体有关功能：合成RNA引物反应过程：调节：磷酸化的调节作用Pol/引发酶复合物首先，合成RNA引物；其次，利用DNA聚合酶活性将引物延伸，产生起始DNA（initiatorDNA，iDNA）短序列，形成RNA-DNA引物；最后，Pol/引发酶脱离模板链DNA，发生DNA聚合酶转换（switch）。结构：

p70、p34和p11组成异源三聚体功能：

2.RPA的功能与E.coli的SSB相似复制蛋白A（replicationproteinA，RPA）结合单链DNA促使双螺旋DNA解旋激活Pol/引发酶活性为Pol依赖复制因子C（RFC）和增殖细胞核抗原（PCNA）合成DNA所必需RPA三聚体与SV40T抗原结合，组装引发体复合物所必需RPA参与DNA重组和修复p140结合PCNAp40、p37和p36组成稳定的核心复合物，具有依赖DNA的ATPase活性p38可能在p140和核心复合物之间起连接作用3.RFC与E.coliDNA聚合酶Ⅲ的-复合物功能相似复制因子C（replicationfactorC，RFC）结构：有p140，p40，p38，p37、p365个亚基促使可滑动的DNA夹子PCNA结合于引物-模板链，是Pol在模板DNA链上组装并形成具有持续合成能力全酶所必需的。RFC的功能：PCNA是Pol的进行性因子，使Pol获得持续合成能力。PCNA是协调DNA复制、损伤修复、表观遗传和细胞周期调控的核心因子。PCNA水平是检测细胞增殖的重要指标。PCNA能激活Pol。4.PCNA是可滑动的DNA夹子增殖细胞核抗原（proliferatingcellnuclearantigen，PCNA）结构：功能：同源三聚体，可形成闭合环形的可滑动DNA夹子。p125：催化亚基，具有DNA聚合酶活性和35核酸外切酶活性，其N端区与PCNA相互作用p50：辅助PCNA激活p1255.DNA聚合酶合成前导链和后随链结构：Pol分子是异源二聚体（p125和p50）功能：Pol合成前导链和后随链DNA聚合酶FEN1（flapendonuclease1）具有核酸内切酶和53核酸外切酶活性。FEN1参与去除冈崎片段5端的RNA引物。6.FEN1和RNAseHⅠ切除RNA引物RNAseHⅠ是核酸内切酶，参与冈崎片段成熟时切除5端RNA引物，底物RNA连接在DNA链的5端，切割后在DNA链的5端残留一个核糖核苷酸，这个核苷酸再被FEN1切除。DNA复制需要DNA解旋酶打开DNA双螺旋，使复制模板链得以暴露。7.DNA解旋酶打开双螺旋以暴露复制模板8.真核复制叉有1个Pol和2个Pol复合物真核DNA复制叉模型Pol/引发酶 合成RNA-DNA引物Pol

合成前导链和后随链RFC 识别引物iDNA的3端并驱除Pol/引发酶PCNA 结合DNA并引入PolRNAseHI/FEN1切除冈崎片段5端的RNA引物真核生物复制过程中酶及功能Pol（或Pol） 填补冈崎片段之间的空隙DNA连接酶Ⅰ 封口RPA 稳定解旋后的单链DNA解旋酶 复制叉的形成和移动必不可少拓扑异构酶 释放复制叉前进时产生的扭曲应力(三)引发和延伸发生DNA聚合酶/转换识别染色体DNA复制起点和DNA局部解旋后，Pol/引发酶复合物结合于复制起点，这一步叫做引发体组装。引发体组装包括DNA解旋酶与Pol/引发酶相互作用。1.解旋酶与Pol/引发酶相互作用组装引发体前导链：出现在引发后期后随链：发生于每个冈崎片段合成之际发生DNA聚合酶/转换的原因是Pol不具备持续合成能力DNA聚合酶/转换的关键蛋白是RFC2.DNA聚合酶/转换真核DNA聚合酶转换和后随链合成首先RNAseHⅠ利用核酸内切酶活性切割连接在冈崎片段5端的RNA片段，在RNA-DNA引物连接点旁留下1个核糖核苷酸；然后FEN1利用53核酸外切酶活性切除这最后一个核糖核苷酸。(四)切除RNA引物有两种机制解旋酶Dna2具有依赖DNA的ATPase和35解旋酶活性，其解旋作用可以使前一个冈崎片段的5端引物形成“盖子”结构，再由FEN1的内切酶活性切除引物。依赖RNAseHⅠ/FEN1切除方式：依赖Dna2/FEN1切除方式：切除RNA引物的两种机制RNAseHⅠ/FEN1Dna2/FEN1真核所有染色体DNA复制仅仅出现在细胞周期的S期，而且只能复制一次。(五)真核染色体在每个细胞周期中只能复制一次1.前复制复合物在G1期形成而在S期被激活真核细胞DNA复制的起始分两步进行，即复制基因的选择和复制起点的激活。复制基因（replicator）是指DNA复制起始所必需的全部DNA序列。复制基因的选择出现于G1期，基因组的每个复制基因位点均组装前复制复合物（pre-replicativecomplex，pre-RC）。复制起点的激活出现于细胞进入S期以后，这一阶段将激活pre-RC，募集若干复制基因结合蛋白和DNA聚合酶，并起始DNA解旋。在原核细胞中，复制基因的识别与DNA解旋、募集DNA聚合酶偶联进行。而在真核细胞中，这两个阶段相分离可以确保每个染色体在每个细胞周期中仅复制一次。ORC至少募集两种解旋酶加载蛋白Cdc6和Cdt1。复制起点识别复合物（origin

recognitioncomplex，ORC）识别并结合复制基因。三种蛋白质一起募集真核细胞解旋酶Mcm2-7。前复制复合物（pre-RC）的形成pre-RC磷酸化导致在复制起点组装其他复制因子并起始复制，复制因子包括3种DNA聚合酶。DNA聚合酶在复制起点按一定顺序组装：首先Pol和Pol结合，然后是Pol/引发酶。在S期，pre-RC被蛋白激酶（Ddk和Cdk）磷酸化，从而被激活。pre-RC的激活和组装真核DNA复制叉（1）激活pre-RC，以起始DNA复制；（2）抑制形成新的pre-RC。2.Cdk控制pre-RC的形成和激活真核细胞通过依赖细胞周期蛋白的蛋白激酶（cyclin-dependentkinases，CDK）严格控制pre-RC的形成和激活。Cdk功能：在每个细胞周期过程中，仅有一次机会形成pre-RC，也仅有一次机会激活pre-RC。pre-RC在被激活后即解体，所暴露的复制基因可形成新的pre-RC并迅速结合ORC。但在S、G2和M期，高活性的Cdk抑制pre-RC的其他组分结合ORC。只有当染色体分离和细胞分裂完成时，Cdk的活性消失，新的pre-RC才能形成。(六)端粒酶确保染色体末端复制完整

前导链产生完整的子染色单体。后随链3端留下缩短的未复制的ssDNA区。端粒（telomeres）由富含TG的重复序列组成。人的端粒重复序列为5’-TTAGGG-3。这些重复序列多为双链，但每个染色体的3’端比5端长，形成单链ssDNA。这一特殊结构可解决染色体末端复制问题。端粒酶（telomerase）是一种核糖核蛋白（RNP），由RNA和蛋白质组成。端粒酶以自己的RNA组分作为模板，以染色体的3端ssDNA（后随链模板）为引物，将端粒序列添加于染色体的3端。这些新合成的DNA为单链。DNA聚合酶：催化合成DNADNA解旋酶（helicase）：解开DNA双螺旋，暴露复制模板链引发酶：引发，即合成RNA引物，利用引物3’-OH开始延伸DNA连接酶：连结冈崎片段其他酶和蛋白因子小结：DNA复制需要多种酶参与如：起稳定作用的单链DNA结合蛋白（SSB）和改变DNA超螺旋状态的DNA拓扑异构酶（topoisomerase）等DNA聚合酶的合成前误差控制(presyntheticerrorcontrol)和校正控制(proofreadingcontrol)功能。细胞修复系统是DNA复制高度忠实性的重要因素。复制起始利用引物也是确保DNA复制忠实性的重要机制之一。DNA复制具有高度忠实性

DNA复制是双向复制

一个起点，两个复制叉，双向复制。两个起点，两个生长点，单向复制。一个起点，一个复制叉，单向复制。DNA链的合成3种方式：线粒体DNA的D环（D-loop）复制噬菌体的滚环（rollingcircle）复制

三、线粒体和噬菌体DNA复制具有特殊方式（一）线粒体DNA按D环方式复制环形、双螺旋DNA分子两条链一条为重链（H链），另一条为轻链（L链）dNTPDNA-polγ

线粒体DNA分子特点：有特异的复制起点；环形线粒体DNA两条链（H和L）的复制不同步D环或取代环（displacementloop）：线粒体DNA复制开始以H链作为模板合成新的L链，取代原来的L链并和H链互补，而原来的L链则保持单链状态，形成类似英文字母D的区域；两条链具有不同的复制起点和相反的合成方向；线粒体DNA复制也需要RNA引物。线粒体DNA复制特点：（二）噬菌体DNA按滚环方式复制环形双螺旋DNA分子一条为模板链，另一条为非模板链E.coli噬菌体DNA的分子结构特点：仅以一条链作为模板合成若干环形DNA分子拷贝噬菌体DNA复制的方式是滚环复制噬菌体DNA复制特点：噬菌体DNA复制首先由它自己编码的A蛋白在非模板链上造成缺口，再以所产生的游离3端羟基作为引物，并在宿主细胞的DNA聚合酶、解旋酶和SSB蛋白等作用下合成新链，新链和模板链互补并取代了原来的非模板链。这种复制方式称为滚环复制。滚环复制：3-OH5-P55533335'滚环复制5'5335双螺旋DNA在复制起点解链不一定导致两条链同时复制，也可能利用一条链作为模板起始DNA合成。双螺旋DNA的两条DNA链的复制起点也可能处于不同的位置。滚环复制和D环不对称复制的存在说明：DNA的反转录合成Reversetranscription第三节RNA肿瘤病毒DNA原病毒（或前病毒）

RNA肿瘤病毒Temin等提出，原病毒（provirus）DNA是RNA肿瘤病毒在复制过程中的中间物。*反转录的发现发展了中心法则DNA中间模板分子（mRNA）蛋白质中心法则：反转录酶的发现发展了中心法则反转录病毒（retroviruses）：RNA病毒，含有反转录酶反转录：在反转录酶的作用下以RNA为模板合成DNA的过程。RNA指导的DNA聚合酶活性；DNA指导的DNA聚合酶活性；RNAseH的活性是指它能够从53和35两个方向水解DNA-RNA杂合分子中的RNA。一、反转录酶以tRNA为引物合成双链cDNA反转录酶有3种酶的活性：反转录酶的结构反转录病毒RNA基因组和原病毒反转录病毒RNA基因组转变为双链cDNA的途径二、反转录病毒在宿主细胞内的主要活动（一）反转录合成双链cDNA（二）双链cDNA插入宿主染色体形成原病毒原病毒或前病毒：存在于真核染色体中和反转录病毒RNA基因组相对应的双链DNA序列。gag基因编码几种病毒核心蛋白（衣壳蛋白）;pol基因编码3种酶：反转录酶、蛋白酶和整合酶;env基因编码插入病毒外膜磷脂双层中的糖蛋白。（三）原病毒DNA转录产生病毒RNA具有自我复制能力的反转录病毒基因组含有3个基因：①直接翻译产生多蛋白Gag和Gag-Pol。②含有包装信号，因此构成完整的病毒基因组。③大约一半初级转录产物经过剪接加工形成gag-polmRNA和envmRNA。原病毒初级转录产物有3种重要功能：初级转录产物多蛋白Gag-Pol，经过蛋白酶水解，可产生反转录酶、蛋白酶和整合酶。多蛋白Gag经过加工，生成4种病毒衣壳蛋白。env基因编码的Env蛋白，经过加工以后插入病毒外膜磷脂双层。这些病毒蛋白和病毒RNA基因组可以迅速组装成许多新的反转录病毒颗粒。（四）病毒RNA经翻译和包装形成反转录病毒颗粒DNA损伤修复

DNADamageandRepair第四节

一、多种因素通过不同形式可引起DNA损伤

碱基开环和糖苷键断裂引起碱基丢失

辐射或氧化损伤等引起碱基改变

化学因素可引起核苷酸插入或缺失

辐射和化学损伤可引起DNA链断裂物理和化学因素可引起DNA链间或链内交联

其一，导致复制或转录障碍其二，导致复制后产生基因突变DNA损伤的结果:

二、DNA损伤修复系统有多种类型DNA聚合酶（Y-家族），如E.coli：UmuC嘧啶二聚体、无嘌呤位点跨损伤DNA合成E.coli：RecA和RecBCD双链断裂重组修复E.coli：UvrA,UvrB,UvrC,UvrD人：XPC,XPA,XPD,ERCCI-XPF,XPG嘧啶二聚体，碱基烷基化核苷酸切除修复DNA糖苷酶（即DNA糖基水解酶）碱基损伤碱基切除修复嘧啶二聚体直接修复E.coli：MutS,MutL,MutH人：MSH,MLH,PMS复制差错错配修复酶损伤修复系统的类型修复对象：将DNA中因紫外线照射而形成的嘧啶二聚体分解。机制：细胞内光裂合酶（photolyases）分子中生色基团次甲四氢叶酸吸收光子并将FADH2激活生成的激发型FADH2，再将电子转移给嘧啶二聚体，使其还原。分布：分布广泛，除哺乳动物外均有之。（一）直接修复（directrepair）利用修复酶简单地逆转DNA损伤光复活修复系统修复对象：DNA中被甲基化修饰的鸟嘌呤（O6-甲基鸟嘌呤，与T配对）。机制：将甲基转移到酶蛋白活性中心的Cys残基侧链上，使鸟嘌呤复原，避免发生突变。特点：DNA甲基转移酶一旦接受甲基就不再具有催化活性，修复代价高昂。O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶修复糖苷酶（glycosylases）识别、切除受损碱基，产生AP位点（apurinicorapyrimidinicsite）。AP内切酶在AP位点的5’端切断磷酸二酯键。AP外切酶再切割AP位点的3’端。DNA聚合酶填补产生的缺口。最后DNA连接酶连接。（二）碱基切除系统修复切除受损碱基碱基切除修复（baseexcisionrepair,BER）对象：受损的碱基修复系统：E.coli碱基切除修复系统切除胞嘧啶自发脱氨基产生的尿嘧啶胞嘧啶脱氨基产生的尿嘧啶；氧化的鸟嘌呤（oxoG）；脱氨基的腺嘌呤；开环碱基；碳原子之间双键变成单键的碱基等。

DNA糖苷酶识别的异常碱基包括：功能：利用DNA糖苷酶切除DNA复制前未去除的损伤碱基。自动防故障（fail-safe）系统碱基切除修复系统切除鸟嘌呤氧化产物oxoGDNA聚合酶和连接酶以未损伤的DNA链为模板修补缺口。（三）核苷酸切除修复系统识别DNA双螺旋变形核苷酸切除修复（nucleotideexcisionrepair,NER）系统识别DNA双螺旋形状的变形。E.coli的NER主要由4种蛋白质组成：UvrAUvrBUvrCUvrD

UvrA识别DNA双螺旋结构变形UvrB负责解链，募集核酸内切酶UvrCUvrC在损伤部位的两侧切断DNA链UvrD去除这两个切点之间的DNA片段DNA聚合酶Ⅰ和连接酶填补缺口核苷酸切除修复系统XPC蛋白负责发现DNA双螺旋中的变形XPA和XPD蛋白具有解旋酶活性核酸酶ERCC1-XPF切割损伤部位5’侧，XPG切割3’侧DNA聚合酶和连接酶负责填补产生的缺口高等真核生物的NER作用：NER不仅能够修复整个基因组中的损伤，而且能拯救因转录模板链损伤而暂停转录的RNA聚合酶，即参与转录偶联修复（transcription-coupledrepair）。作用方式：NER蛋白质被募集于暂停的RNA聚合酶。转录偶联修复的意义：将修复酶集中于正在转录DNA，使该区域的损伤尽快得以修复。1.在核苷酸切除修复（包括转录偶联修复）时起DNA解旋酶的作用；2.在转录过程中打开DNA模板。真核转录偶联修复的核心是TFⅡH。TFⅡH分别参与两个独立过程：对于DNA双链断裂（double-strandbreak，DSB）损伤，细胞采用双链断裂修复，即重组修复（recombinationalrepair），通过与姐妹染色体正常拷贝的同源重组来恢复正确的遗传信息。（四）重组修复系统能够修复双链断裂损伤RecBCD酶复合物有解旋酶和核酸酶活性。RecB和RecD是两种DNA解旋酶，RecB沿DNA链5’末端解旋，运动速度较慢；而RecD沿DNA链3’末端解旋，运动速度快，导致单链DNA环状结构逐渐积累。重组修复作用机制：E.coli的rec基因（recA、recB、recC和recD）编码的几种酶参与重组修复。RuvA蛋白识别Holliday结构连接处。内切酶RuvC特异识别Holliday结构中的ATTG序列并切割DNA，使Holliday结构分离，完成DNA重组。当RecBCD遇到chi序列(5’GCTGGTGG3’)，就在其附近将单链DNA切断，从而DNA重组成为可能。利用上述重组修复系统修复断裂染色体，细胞中必须存在姐妹染色体。在细胞周期早期，姐妹染色体还没有产生，如果染色体发生断裂，自动防故障系统将通过通过非同源末端连接（nonhomologousendjoining，NHEJ）发挥作用。正在复制的DNA聚合酶可能遭遇尚未修复的DNA损伤，细胞自动防故障系统能够使复制体绕过损伤部位，这一机制就是跨损伤DNA合成。E.coli跨损伤DNA合成由UmuC-UmuD′复合物进行。（五）跨损伤DNA聚合酶能够跨越损伤部位合成DNAE.coli跨损伤DNA合成三、DNA损伤修复具有重要的生物学意义修复系统的存在保证了物种遗传的稳定性，对降低修复缺陷相关疾病的发病率有十分重要的意义。第五节

DNA重组

DNARecombination

DNA重组的类型同源重组特异位点重组转座重组一、同源重组是最基本的DNA重组方式同源重组(homologousrecombination，HR)

是指发生在同源序列间的重组，它通过链的断裂和再连接，在两个DNA分子同源序列间进行单链或双链片段的交换。又称基本重组(generalrecombination)。同源重组不需要特异DNA序列，而是依赖两分子之间序列的相同或类似性。

以E.coli的同源重组为例，了解同源重组机制的Holliday模型：

Holliday模型中，同源重组主要4个关键步骤

①两个同源染色体DNA排列整齐②一个DNA的一条链断裂、并与另一个DNA对应的链连接，形成Holliday中间体③通过分支移动产生异源双链DNA④Holliday中间体切开并修复，形成两个双链重组体DNA，分别为：片段重组体(patchrecombinant)拼接重组体(splicerecombinant)

片段重组体（见模型图左边产物）：切开的链与原来断裂的是同一条链，重组体含有一段异源双链区，其两侧来自同一亲本DNA。拼接重组体（见模型图右边产物）：切开的链并非原来断裂的链，重组体异源双链区的两侧来自不同亲本DNA。

内切酶

(recBCD)DNA侵扰(recA)分支迁移

(recA)

内切酶(recBCD)

DNA

连接酶5´3´5´3´5´3´5´3´5´3´5´3´5´3´5´3´5´3´5´3´5´3´5´3´5´3´5´3´3´3´5´3´5´3´3´5´5´3´5´3´5´3´Holiday中间体5´3´5´3´5´3´5´3´Holiday中间体5´3´5´3´5´3´5´3´5´3´5´5´5´3´3´3´5´5´5´5´3´3´3´3´5´5´5´5´3´3´3´3´5´5´5´5´3´3´3´3´5´5´5´5´3´3´3´3´内切酶(ruvC)内切酶(ruvC)

DNA连接酶

DNA连接酶片段重组体拼接重组体二、特异位点重组是特异位点间的遗传信息整合由整合酶催化，在两个DNA序列的特异位点间发生的整合称位点特异的重组(sitespecificrecombination)。例如，λ噬菌体DNA的整合、细菌的特异位点重组、免疫球蛋白基因的重排以及转座重组等。作用：某些基因表达的调节，发育过程中程序性DNA重排，以及有些病毒和质粒DNA复制循环过程中发生的整合与切除等。

（一）λ噬菌体DNA的整合

（二）细菌的特异位点重组沙门氏菌H片段倒位决定鞭毛相转变hix为反向重复序列，它们之间的H片段可在Hin控制下进行特异位点重组(倒位)。H片段上有两个启动子P，其一驱动hin基因表达，另一正向时驱动H2和rH1基因表达，反向(倒位)时H2和rH1不表达。rH1为H1的阻遏蛋白基因。

H2鞭毛素

阻遏蛋白Hin重组酶转位片段hinH2IH1

H1鞭毛素hinH2IDNA启动序列H1启动序列沙门氏菌H片段倒位决定鞭毛相转变（三）免疫球蛋白基因的重排免疫球蛋白(Ig)，由两条轻链(L链)和两条重链(H链)组成，分别由三个独立的基因族编码，其中两个编码轻链(和)，一个编码重链。

轻链的基因片段：重链的基因片段：LVJCLVDJC重链(IgH)基因的V-D-J重排和轻链(IgL)基因的V-J重排均发生在特异位点上。在V片段的下游，J片段的上游以及D片段的两侧均存在保守的重组信号序列(recombinationsignalsequence,RSS)。此重排的重组酶基因rag(recombinationactivatinggene)共有两个，分别产生蛋白质RAG1和RAG2。

CACAGTG(12/23)ACAAAAACCGTGTCCACTGTTTTTGG重组信号序列基因片段V片段J片段RSSRSS间插DNAOHOHVJ单链切开RAG1RAG2分子内转酯反应单链切开转移核苷酸修复、连接免疫球蛋白基因重排过程三、转座重组是插入序列和转座子介导的DNA移位大多数基因在基因组内的位置是固定的，但有些基因可以从一个位置移动到另一位置。这些可移动的DNA序列包括插入序列和转座子（transposon,Tn）。由插入序列和转座子介导的基因移位或重排称为转座(transposition)，又称转座重组(transpositionalrecombination)。插入序列(insertionsequences,IS)组成：二个分离的反向重复(invertedrepeats,IR)序列特有的正向重复序列一个转座酶（transposase)编码基因

IRTransposaseGeneIR发生形式：保守性转座(conservativetransposition)

复制性转座(duplicativetransposition)（一）插入序列转座插入序列的复制性转座转座子(transposons)——可从一个染色体位点转移到另一位点的分散重复序列。

转座子组成：反向重复序列转座酶编码基因抗生素抗性等有用的基因IRIRTransposaseGene有用基因（二）转座子转座由转座子介导的转座安全阀基本知识如果压力容器(设备/管线等)压力超过设计压力…1.尽可能避免超压现象堵塞(BLOCKED)火灾(FIRE)热泄放(THERMALRELIEF)如何避免事故的发生?2.使用安全泄压设施爆破片安全阀如何避免事故的发生?01安全阀的作用就是过压保护!一切有过压可能的设施都需要安全阀的保护!这里的压力可以在200KG以上,也可以在1KG以下!设定压力(setpressure)安全阀起跳压力背压(backpressure)安全阀出口压力超压(overpressure)表示安全阀开启后至全开期间入口积聚的压力.几个压力概念弹簧式先导式重力板式先导+重力板典型应用电站锅炉典型应用长输管线典型应用罐区安全阀的主要类型02不同类型安全阀的优缺点结构简单,可靠性高适用范围广价格经济对介质不过分挑剔弹簧式安全阀的优点预漏--由于阀座密封力随介质压力的升高而降低,所以会有预漏现象--在未达到安全阀设定点前,就有少量介质泄出.100%SEATINGFORCE75502505075100%SETPRESSURE弹簧式安全阀的缺点过大的入口压力降会造成阀门的频跳,缩短阀门使用寿命.ChatterDiscGuideDiscHolderNozzle弹簧式安全阀的缺点弹簧式安全阀的缺点=10090807060500102030405010%OVERPRESSURE%BUILT-UPBACKPRESSURE%RATEDCAPACITY普通产品平衡背压能力差.在普通产品基础上加装波纹管,使其平衡背压的能力有所增强.能够使阀芯内件与高温/腐蚀性介质相隔离.平衡波纹管弹簧式安全阀的优点优异的阀座密封性能,阀座密封力随介质操作压力的升高而升高,可使系统在较高运行压力下高效能地工作.ResilientSeatP1P1P2先导式安全阀的优点平衡背压能力优秀有突开型/调节型两种动作特性可远传取压先导式安全阀的优点对介质比较挑剃,不适用于较脏/较粘稠的介质,此类介质会堵塞引压管及导阀内腔.成本较高.先导式安全阀的缺点重力板式产品的优点目前低压储罐呼吸阀/紧急泄放阀的主力产品.结构简单.价格经济.重力板式产品的缺点不可现场调节设定值.阀座密封性差,并有较严重的预漏.受背压影响大.需要很高的超压以达到全开.不适用于深冷/粘稠工况.几个常用规范ASMEsectionI-动力锅炉(FiredVessel)ASMEsectionVIII-非受火容器(UnfiredVessel)API2000-低压安全阀设计(LowpressurePRV)API520-火灾工况计算与选型(FireSizing)API526-阀门尺寸(ValveDimension)API527-阀座密封(SeatTightness)介质状态(气/液/气液双相).气态介质的分子量&Cp/Cv值.液态介质的比重/黏度.安全阀泄放量要求.设定压力.背压.泄放温度安全阀不以连接尺寸作为选型报价依据!如何提供高质量的询价?弹簧安全阀的结构弹簧安全阀起跳曲线弹簧安全阀结构弹簧安全阀结构导压管活塞密封活塞导向不平衡移动副(活塞)导管导阀弹性阀座P1P1P2先导式安全阀结构先导式安全阀的工作原理频跳安全阀的频跳是一种阀门高频反复开启关闭的现象。安全阀频跳时，一般来说密封面只打开其全启高度的几分只一或十几分之一，然后迅速回座并再次起跳。频跳时，阀瓣和喷嘴的密封面不断高频撞击会造成密封面的严重损伤。如果频跳现象进一步加剧还有可能造成阀体内部其他部分甚至系统的损伤。安全阀工作不正常的因素频跳后果1、导向平面由于反复高频磨擦造成表面划伤或局部材料疲劳实效。2、密封面由于高频碰撞造成损伤。3、由于高频振颤造成弹簧实效。4、由频跳所带来的阀门及管道振颤可能会破坏焊接材料和系统上其他设备。5、由于安全阀在频跳时无法达到需要的排放量，系统压力有可能继续升压并超过最大允许工作压力。安全阀工作不正常的因素A、系统压力在通过阀门与系统之间的连接管时压力下降超过3%。当阀门处于关闭状态时，阀门入口处的压力是相对稳定的。阀门入口压力与系统压力相同。当系统压力达到安全阀的起跳压力时，阀门迅速打开并开始泄压。但是由于阀门与系统之间的连接管设计不当，造成连接管内局部压力下降过快超过3%，是阀门入口处压力迅速下降到回座压力而导致阀门关闭。因此安全阀开启后没有达到完全排放，系统压力仍然很高，所以阀门会再次起跳并重复上述过程，既发生频跳。导致频跳的原因导致接管压降高于3%的原因1、阀门与系统间的连接管内径小于阀门入口管内径。2、存在严重的涡流现象。3、连接管过长而且没有作相应的补偿（使用内径较大的管道）。4、连接管过于复杂（拐弯过多甚至在该管上开口用作它途。在一般情况下安全阀入口处不允许安装其他阀门。）导致频跳的原因B、阀门的调节环位置设置不当。安全阀拥有喷嘴环和导向环。这两个环的位置直接影响安全阀的起跳和回座过程。如果喷嘴环的位置过低或导向环的位置过高，则阀门起跳后介质的作用力无法在阀瓣座和调节环所构成的空间内产生足够的托举力使阀门保持排放状态，从而导致阀门迅速回座。但是系统压力仍然保持较高水平，因此回座后阀门会很快再次起跳。导致频跳的原因C、安全阀的额定排量远远大于所需排量。

由于所选的安全阀的喉径面积远远大于所需，安全阀排放时过大的排量导致压力容器内局部压力下降过快，而系统本身的超压状态没有得到缓解，使安全阀不得不再次起跳频跳的原因阀门拒跳：当系统压力达到安全阀的起跳压力时，阀门不起跳的现象。安全阀工作不正常的因素1、阀门整定压力过高。2、阀门内落入大量杂质从而使阀办座和导套间卡死或摩擦力过大。3、弹簧之间夹入杂物使弹簧无法被正常压缩。4、阀门安装不当，使阀门垂直度超过极限范围（正负两度）从而使阀杆组件在起跳过程中受阻。5、排气管道没有被可靠支撑或由于管道受热膨胀移位从而对阀体产生扭转力，导致阀体内机构发生偏心而卡死。安全阀拒跳的原因阀门不回座或回座比过大：安全阀正常起跳后长时间无法回座，阀门保持排放状态的现象。安全阀工作不正常的因素1、阀门上下调整环的位置设置不当。2、排气管道设计不当造成排气不畅，由于排气管道过小、拐弯过多或被堵塞，使排放的蒸汽无法迅速排出而在排气管和阀体内积累，这时背压会作用在阀门内部机构上并产生抑制阀门关闭的趋势。3、阀门内落入大量杂质从而使阀瓣座和导套之间卡死后摩擦力过大。安全阀不回座或回座比过大的因素：4、弹簧之间夹入杂物从而使弹簧被正常压缩后无法恢复。5、由于对阀门排放时的排放反力计算不足，从而在排放时阀体受力扭曲损坏内部零件导致卡死。6、阀杆螺母（位于阀杆顶端）的定位销脱落。在阀门排放时由于振动使该螺母下滑使阀杆组件回落受阻。安全阀不回座或回座比过大的因素：7、由于弹簧压紧螺栓的锁紧螺母松脱，在阀门排放时由于振动时弹簧压紧螺栓松动上滑导致阀门的设定起跳值不断减小。

8、阀门安装不当，使阀门垂直度超过极限范围（正负两度）从而使阀杆组件在回落过程中受阻。

9、阀门的密封面中有杂质，造成阀门无法正常关闭。

10、锁紧螺母没有锁紧，由于管道震动下环向上运动，上平面高于密封面，阀门回座时无法密封安全阀不回座或回座比过大的因素：谢谢观看癌基因与抑癌基因oncogene&tumorsuppressorgene24135基因突变概述.癌基因和抗癌基因的概念.癌基因的分类.癌基因产物的作用.癌基因激活的机理主要内容疾病：

——是人体某一层面或各层面形态和功能（包括其物质基础——代谢）的异常，归根结底是某些特定蛋白质结构或功能的变异，而这些蛋白质又是细胞核中相应基因借助细胞受体和细胞中信号转导分子接收信号后作出应答（表达）的产物。TranscriptionTranslationReplicationDNARNAProtein中心法规Whatisgene?基因：

—是遗传信息的载体

—是一段特定的DNA序列（片段）

—是编码RNA或蛋白质的一段DNA片段

—是由编码序列和调控序列组成的一段DNA片段基因主宰生物体的命运：微效基因的变异——生物体对生存环境的敏感度变化关键关键基因的变异——生物体疾病——死亡所以才有：“人类所有疾病均可视为基因病”之说注：如果外伤如烧伤、骨折等也算疾病的话，外伤应该无法归入基因病的行列。Genopathy问：两个不相干的人，如果他们患得同一疾病，致病基因是否相同？再问：同卵双生的孪生兄弟，他们患病的机会是否一样，命运是否相同？┯┯┯┯

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┷┷┷┷增添缺失替换DNA分子(复制)中发生碱基对的______、______

和

，而引起的

的改变。替换增添缺失基因结构基因变异的概念：英语句子中的一个字母的改变，可能导致句子的意思发生怎样的变化？可能导致句子的意思不变、变化不大或完全改变THECATSATONTHEMATTHECATSITONTHEMATTHEHATSATONTHEMATTHECATONTHEMAT同理：替换、增添、缺失碱基对，可能会使性状不变、变化不大或完全改变。基因的结构改变,一定会引起性状的改变??原句：1.基因多态性与致病突变基因变异与疾病的关系2.单基因病、多基因病3.疾病易感基因

基因多态性polymorphism是指DNA序列在群体中的变异性（差异性）在人群中的发生概率>1%（SNP&CNP)<1%的变异概率叫做突变基因多态性特定的基因多态性与疾病相关时，可用致病突变加以描述SNP:散在单个碱基的不同，单个碱基的缺失、插入和置换。

CNP:DNA片段拷贝数变异，包括缺失、插入和重复等。同义突变、错义突变、无义突变、移码突变

致病突变生殖细胞基因突变将突变的遗传信息传给下一代(代代相传),即遗传性疾病。体细胞基因突变局部形成突变细胞群（肿瘤）。受精卵分裂基因突变的原因物理因素化学因素生物因素基因突变的原因（诱发因素）紫外线、辐射等碱基类似物5BU/叠氮胸苷等病毒和某些细菌等自发突变DNA复制过程中碱基配对出现误差。UV使相邻的胸腺嘧啶产生胸腺嘧啶二聚体,DNA复制时二聚体对应链空缺，碱基随机添补发生突变。胸腺嘧啶二聚体胸腺嘧啶胸腺嘧啶紫外线诱变物理诱变(physicalinduction)

5溴尿嘧啶(5BU)与T类似，多为酮式构型。间期细胞用酮式5BU处理，5BU能插入DNA取代T与A配对；插入DNA后异构成烯醇式5BU与G配对。两次DNA复制后,使A/T转换成G/C，发生碱基转换,产生基因突变。化学诱变(chemicalinduction)碱基类似物(baseanalogues)诱变AT5-BUA5-BUAAT5-BU5-BU(烯醇式)

(酮式)GGC1.生物变异的根本来源，为生物进化提供了最初的原始材料,能使生物的性状出现差别，以适应不同的外界环境，是生物进化的重要因素之一。2.致病突变是导致人类遗传病的病变基础。基因突变的意义概述：肿瘤细胞恶性增殖特性（一）肿瘤细胞失去了生长调节的反馈抑制正常细胞受损,一旦恢复原状，细胞就会停止增殖，但是肿瘤细胞不受这一反馈机制抑制。（二）肿瘤细胞失去了细胞分裂的接触抑制。正常细胞体外培养，相邻细胞相接触，长在一起，细胞就会停止增殖，而肿瘤细胞生长满培养皿后，细胞可以重叠起生长。（三）肿瘤细胞表现出比正常细胞更低的营养要求。（四）肿瘤细胞生长有一种自分泌作用，自己分泌生长需要的生长因子和调控信号,促进自身的恶性增殖。Whatisoncogene?癌基因——是基因组内正常存在的基因，其编码产物通常作为正调控信号，促进细胞的增殖和生长。癌基因的突变或表达异常是细胞恶性转化（癌变）的重要原因。——凡是能编码生长因子、生长因子受体、细胞内信号转导分子以及与生长有关的转录调节因子等的基因。如何发现癌基因的呢?11910年，洛克菲勒研究院一个年轻的研究员Rous发现，鸡肉瘤细胞裂解物在通过除菌滤器以后，注射到正常鸡体内，可以引起肉瘤，首次提出鸡肉瘤可能是由病毒引起的。0.2m孔径细菌过不去但病毒可以通过从病毒癌基因到细胞原癌基因的研究历程：Roussarcomavirus,RSVthefirstcancer-causingretrovirus1958年，Stewart和Eddy分离出一种病毒，注射到小鼠体内可以引起肝脏、肾脏、乳腺、胸腺、肾上腺等多种组织器官的肿瘤，因而把这种病毒称为多瘤病毒。50年代末、60年代初，癌病毒研究成了一个极具想像力的研究领域，主流科学家开始进入癌病毒研究领域polyomavirus这期间，Temin发现RSV有不同亚型，且引起细胞恶变程度不同，推测RNA病毒将其遗传信息传递给了正常细胞的DNA。这与Crick提出的中心法则是相违背的让事实屈从于理论还是坚持基于实验的结果？VSTemin发现逆转录酶，1975年获诺贝尔奖TeminCrickTemin的实验设计：实验设计简单而巧妙：将合成DNA所需的“原料”，即A、T、C、G四种脱氧核苷酸，与破坏了外壳的RSV一起在体外40℃的条件下温育一段时间结果在试管里获得了一种新合成的大分子，它不能被RNA酶破坏，但却可以被DNA酶所分解，证明这种新合成的大分子是DNA用RNA酶预先破坏RSV的RNA，再重复上述的试验，则不能获得这种大分子，说明这个DNA大分子是以RSV的RNA为模板合成的1969年，一个日本学者里子水谷来到Temin的实验室，这是一个非常擅长实验的年轻科学家。按Temin的设想，他们开始寻找RSV中存在“逆转录酶”的证据DNA

RNA

ProteinTranscriptionTranslationReplicationReplicationRe-Transcription修正中心法规据说，1975年Temin因发现逆转录酶而获诺贝尔奖时，Bishop懊恼不已，因为早在1969年他就认为Temin的RNADNA的“前病毒理论”有可能是正确的，并且也进行了一些实验，但不久由于资深同事的规劝而放弃了这方面的努力。但Bishop马上意识到：逆转录酶的发现为逆转录病毒致癌的研究提供了一条新途径。一个RSV，三个诺贝尔奖！！！1989年，UCSF的Bishop和Varmus根据逆转录病毒的复制机制发现了细胞癌基因，并获诺贝尔奖。Cellularoncogene启示：Perutz说:“科学创造如同艺术创造一样，都不可能通过精心组织而产生”Bishop说:“许多人引以为豪的是一天工作16小时，工作安排要以分秒计……可是工作狂是思考的大敌，而思考则是科学发现的关键”Perutzsharedthe1962NobelPrizeforChemistrywithJohnKendrew,fortheirstudiesofthestructuresofhemoglobinandglobularproteins科学的本质和艺术一样，都需要直觉和想像力请给自己一些思考的时间吧！癌基因的分类目前对癌基因尚无统一分类的方法，一般有下面3种分类方法：一、按结构特点分（6）类（一）src癌基因家族（二）ras癌基因家族（三）sis癌基因家族（四）myc癌基因家族（五）myb癌基因家族（六）其它：如fos，erb－A等。三、按细胞增殖调控蛋白特性分成（4）类（一）生长因子（二）受体类（三）细胞内信号转换器（四）细胞核因子二、按产物功能分（8）类（一）生长因子类（二）酪氨酸蛋白激酶（三）膜相关G蛋白（四）受体，无蛋白激酶活性（五）胞质丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶（六）胞质调控因子（七）核反式调控因子（八）其它:db1、bcl－2癌基因产物参与信号转导

胞外信号作用于膜表面受体→胞内信使物质的生成便意味着胞外信号跨膜传递的完成。胞内信使至少有：cAMP（环磷酸腺苷）IP3（三磷酸肌醇）PG（前列腺素）cGMP（环磷酸鸟苷）DG（二酰基甘油）Ca2＋（钙离子）CAM（钙调素）主要机制是通过蛋白激酶活化引起底物蛋白一连串磷酸化的生物信号反应过程,跨膜机制涉及到：（一）质膜上cAMP信使系统（二）质膜上肌醇脂质系统这两个系统都是由受体鸟苷酸调节蛋白（GTP-regulatory