培养基对微生物的选择作用上课用讲课课件

培养基对微生物的选择作用上课用第一页，共51页。啤酒、果酒、食醋等第二页，共51页。谷氨酸钠是味精的主要成分第三页，共51页。疫苗卡介苗百白破第四页，共51页。青霉素头孢霉素红霉素四环素第五页，共51页。如何检测饮用水、牛奶中的细菌数第六页，共51页。微生物技术微生物：是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称。分类微生物病毒细菌放线菌真菌原生动物病毒界原核生物界真菌界原生生物界第七页，共51页。一、培养基的制备

培养基（培养液）是由人工配制而成的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。怎么制备培养基？作用：用以培养、分离、鉴定和保存各种微生物第八页，共51页。培养基的制备包括灭菌培养基的配制培养基的制备是研究和利用微生物的最基本技术之一关键：准确称量、调准PH、规范制作棉塞、彻底灭菌第九页，共51页。一般（基本）成分：碳源、氮源、水、微量元素、无机盐特殊成分：生长因子（包括维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等,牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）2.pH、渗透压的需求:

1.培养基的营养成分

细

菌：pH7.0~8.0

放线菌：pH7.5~8.5

酵母菌：pH3.8~6.0

霉

菌：pH4.0~5.8

藻

类：pH6.0~7.0

原生动物：pH6.0~8.0初始pH第十页，共51页。

（1）按物理状态分：固体培养基和液体培养基、半固体培养基。（2）按功能分：选择培养基和鉴别培养基。（3）按成分分：天然培养基和合成培养基。3.种类：第十一页，共51页。

不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方

不管哪种培养基，一般都含有水、碳源、氮源、无机盐、生长因子（特殊营养物质）等营养物质，另外还需要满足微生物生长对pH、以及渗透压等要求。第十二页，共51页。1.无菌技术的概念无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。成功地培养微生物的关键。二、灭菌第十三页，共51页。为什么要灭菌？配制培养的各种营养物质和容器等中含有不同的生物，所以配置好后必须立即灭菌，及时杀死培养基中的微生物，同时防止微生物大量繁殖造成的培养基营养成分的改变第十四页，共51页。（1）消毒定义：用较温和的物理或化学的方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包括芽孢）2.消毒与灭菌的概念及两者的区别（2）灭菌的定义：用较强烈的理化因素杀死物体内外的所有微生物，包括芽孢第十五页，共51页。1.灼烧灭菌灭菌的方法：高温灭菌第十六页，共51页。（2）干热灭菌：160-170℃下加热1-2h。（3）高压蒸气灭菌0.11MPa、121℃下维持20-30min.第十七页，共51页。1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？思考第十八页，共51页。1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？

答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。思考第十九页，共51页。2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1）培养细菌用的培养基与培养皿（2）玻璃棒、试管、烧瓶和吸管（3）实验操作者的双手第二十页，共51页。2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1）培养细菌用的培养基与培养皿（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管（3）实验操作者的双手

答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。第二十一页，共51页。（三）实验操作（1）制备牛肉膏蛋白胨培养基（用以培养细菌）第二十二页，共51页。（三）实验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨培养基（用以培养细菌）第二十三页，共51页。1．计算、称量2．溶化3．调pH：pH7.4~pH7.6

4．分装：分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分装三角烧瓶的量均为其容积的1/5（不超过三角烧瓶容积的一半为宜。）5．加塞6．包扎操作步骤第二十四页，共51页。7．灭菌:

将培养基转移至三角锥瓶中或试管内，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为0.11MPa、温度为121℃.第二十五页，共51页。8．倒平板:

待培养基冷却到50℃-60℃左右时，在酒精灯附近倒平板或制成斜面。（操作见课本第6页）2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种。第二十六页，共51页。倒平板技术①将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拨出棉塞。1234第二十七页，共51页。倒平板技术②右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰。1234第二十八页，共51页。倒平板技术1234③用左手拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖。第二十九页，共51页。倒平板技术1234④等待平板冷却凝固，大约需5~10min。然后，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上。第三十页，共51页。9．无菌检查：将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时，以检查灭菌是否彻底。第三十一页，共51页。1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？问题讨论第三十二页，共51页。1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？

答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。问题讨论第三十三页，共51页。2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？第三十四页，共51页。2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？

答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。第三十五页，共51页。3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？第三十六页，共51页。3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？

答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。第三十七页，共51页。4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？第三十八页，共51页。4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？

答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。第三十九页，共51页。根据物理性质分固体培养基——用于微生物的分离、纯化、培养、保存、计数半固体培养基——观察微生物的运动液体培养基——常用于工业生产、各种生理、代谢研究和获得大量菌体。根据化学成分分合成培养基——成分明确,常用于分类,鉴定天然培养基——成分不明确,常用于工业生产培养基的种类第四十页，共51页。根据用途分选择培养基——在培养基中加入某种化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,促进所需要的微生物的生长,如：加高浓度的食盐,抑制多种细菌生长,分离到金黄色葡萄球菌鉴别培养基——在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物,如：伊红和美蓝,和大肠杆菌的代谢产物结合,使菌落呈深紫色,并带有金属光泽,可以用来鉴别大肠杆菌第四十一页，共51页。选择培养基加入青霉素的培养基分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基分离自养型微生物加入青霉素等抗生素的培养基分离导入了目的基因的受体细胞

加入氨基喋呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培养基分离杂交瘤细胞第四十二页，共51页。在配制培养基时应该尽量利用廉价且易于获得的原料酵母菌单细胞蛋白（工业生产）酵母菌单细胞蛋白是一种蛋白质还是菌体本身？是酵母菌第四十三页，共51页。培养基对微生物的选择作用实验：探究不同培养基中生长的优势菌群第四十四页，共51页。不同微生物对营养物质要求不一样，在相应的培养基上可形成大小、形态各异的菌落菌落：单个的菌体或孢子在固体培养基上大量繁殖会形成一个肉眼可见的、具有一定形态结构的细胞群体第四十五页，共51页。细菌菌落第四十六页，共51页。大肠杆菌菌落第四十七页，共51页。菌落的特征湿润、粘稠、易用接种环挑起，菌落各部位颜色一致，如：霉菌菌落比较较疏松，唱呈绒毛状、絮状或者蜘蛛网状，一般比细菌菌落大几倍甚至是几十倍。第四十八页，共51页。微生物的筛选C：N=1