生产微生物知识培训课件

2015年06月24日微生物知识培训1微生物知识培训2015年06月24日2015年06月24日微生物知识培训2培训的必要性《药品生产质量管理规范》2010版第二十条：凡在洁净区工作的人员（包括清洁工和设备维修工）应当定期培训，使无菌药品的操作符合要求。培训的内容应当包括卫生和微生物方面的基础知识。第二十九条：所有人员都应当接受卫生要求的培训，企业应当建立人员卫生操作规程，最大限度地降低人员对药品生产造成污染的风险。2015年06月24日微生物知识培训3目录第一部分微生物基础知识第二部分微生物控制第三部分微生态制剂2015年06月24日微生物知识培训4微生物基础知识2015年06月24日微生物知识培训5微生物定义指存在于自然界的一大群形体微小、结构简单、进化低级、肉眼直接看不见，必须借助光学显微镜或电子显微镜放大数百倍、数千倍，甚至数万倍才能观察到的微小生物。2015年06月24日微生物知识培训6微生物的特点个体小，面积大：小于0.1mm。肉眼不可见。分布广，种类多：自然界中到处都有，种类有10万多种。代谢强，转化快：发酵乳糖的细菌在1小时内可分解其自重1000～10000倍的乳糖。生长旺，繁殖快：大多数微生物几十分钟内就可以繁殖一代，细菌一般约20分钟分裂一次。适应强，易变异：耐药性产生的原因。2015年06月24日微生物知识培训7微生物的种类具有细胞结构的微生物没有细胞结构的微生物：病毒原核生物：（由原核细胞构成的）真核微生物（由真核细胞构成的）真菌显微藻类原生动物细菌草履虫水绵放线菌2015年06月24日微生物知识培训8微生物营养要素碳源氮源能源无机盐生长因子水2015年06月24日微生物知识培训9（一）碳源◆定义：能提供微生物营养所需碳元素的营养物质称为碳源。◆功能：提供合成细胞物质及代谢物的原料;并为异养微生物生理活动提供所需要能源。◆种类:

无机含碳化合物（无机碳源）：如CO2和碳酸盐等。有机含碳化合物（有机碳源）：糖与糖的衍生物、脂类、醇类、有机酸、烃类、芳香族化合物以及各种含碳的化合物。2015年06月24日微生物知识培训10（二）氮源◆定义：凡用来构成菌体物质或代谢产物中氮素来源的营养源。◆种类：无机氮源：铵盐、硝酸盐、亚硝酸盐、氨、N2等有机氮源：蛋白质及其降解产物（如胨、肽、尿素、氨基酸等）、牛肉膏、鱼粉、花生饼粉、黄豆饼粉、玉米浆等。

◆功能：

1）提供合成细胞中含氮物，如蛋白质、核酸以及含氮代谢物等的原料；

2）少数细菌可以铵盐、硝酸盐等氮源为能源。2015年06月24日微生物知识培训11（三）无机盐定义：为微生物细胞生长提供碳、氮源以外的多种重要元素（包括大量元素和微量元素）的物质，多以无机盐的形式供给。大量元素：生长所需浓度在10－3～10－4mol/L范围内。如：P、S、K、Mg、Ca、Na、Fe等。

微量元素：生长所需浓度在10－6～10－8mol/L范围内。如：Cu、Zn、Mn、Mo和Co、Ni、Se、Sn等。一般微生物生长所需要的无机盐有：硫酸盐、磷酸盐、氯化物以及含有钠、钾、镁、铁等金属元素的化合物。2015年06月24日微生物知识培训12（四）生长因子一类微生物生命活动过程中调节微生物正常代谢所必需、需要量不大的、但不能用简单的碳源或氮源自身合成的有机营养物。广义生长因子：维生素、卟啉、碱基、氨基酸、嘌呤、嘧啶及其衍生物、C4~C6脂肪酸、营养缺陷型氨基酸狭义生长因子：维生素生长因子来源酵母膏（yeastextract）、牛肉膏（beefextract）、麦芽汁（maltextract）、玉米浆（cornsteepliquor）、蔬菜汁、麸皮、米糠等。2015年06月24日微生物知识培训13（五）水溶剂和运输介质，营养物质吸收及代谢物分泌参与细胞内的生化反应维持蛋白质、核酸稳定天然构象热的良好导体，控制细胞内温度变化维持细胞自身正常形态控制酶、微管、鞭毛等多亚基结构组装和解离2015年06月24日微生物知识培训14微生物的结构细菌的结构：基本结构：细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核特殊结构：荚膜、芽孢等荚膜：有些细菌在一定营养条件下，可向细胞壁表面分泌一层松散透明、粘度极大、粘液状或胶质状的物质称为荚膜。2015年06月24日微生物知识培训15某些细菌到一定的生长阶段，在细胞内形成一个圆形、椭圆形或圆柱形的、对不良环境条件具较强抗性的休眠体，称为芽孢。能形成芽孢的细菌均为G+

菌。芽孢的特点含水量低（40%）不易着色有多层厚而致密的膜结构（壁）含有2,6-吡啶二羧酸（DPA）及耐热性很强的酶2015年06月24日微生物知识培训16细菌的繁殖细菌二分裂繁殖一般每20-30分钟即可分裂一次2015年06月24日微生物知识培训17微生物的应用微生物提高土壤肥力、改进作物特性（如构建固氮植物）、促进粮食增产、防治粮食作物的病虫害、防止粮食霉腐变质以及把多余粮食转化为糖、单细胞蛋白、各种饮料和调味品等。微生物有固氮、解磷、解钾等功能，可以制成微生物肥料。微生物用于能源生产。微生物能将可再生资源转化成各种化工、轻工和制药等工业原料。2015年06月24日微生物知识培训18常见微生物2015年06月24日微生物知识培训19大肠杆菌

2015年06月24日微生物知识培训2020沙门菌铜绿假单孢菌

2015年06月24日微生物知识培训21酵母菌2015年06月24日微生物知识培训22葡萄球菌2015年06月24日微生物知识培训23链球菌

2015年06月24日微生物知识培训24丝状真菌

2015年06月24日微生物知识培训25微生物的有害性

微生物对药品的原料、生产环境和成品的污染是造成生产失败、可以导致产品腐败变质、不合格的重要因素。名称污染后果葡萄球菌可引起局部感染大肠杆菌胆道和尿道感染绿脓杆菌化脓性感染、中耳炎、肺炎枯草杆菌结膜炎酵母菌使糖分解，药液产生有机酸霉菌使制剂霉坏，酸败变质消毒与灭菌洁净室微生物控制2015年06月24日微生物知识培训26微生物控制2015年06月24日微生物知识培训27基本概念消毒：杀死物体上病源微生物的方法，并不一定能杀死细菌的芽胞。消毒所用的试剂称为消毒剂。灭菌：杀灭物体上所有微生物的方法，比消毒要求高，包括杀灭细菌芽孢在内的全部病原微生物和非病原微生物。抑菌：抑制体内或体外细菌的生长繁殖。常用的抑菌剂为各种抗生素，可抑制细菌的繁殖。防腐：防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法，细菌一般不死亡。同一种化学药品在高浓度时为消毒剂，低浓度时常为防腐剂。无菌：不存在活的细菌。防止细菌进入人体或其他物品的操作技术，为无菌操作。2015年06月24日微生物知识培训28热原是微量即可引起恒温动物体温异常升高的物质的总称。主要物质为细菌内毒素、胞壁酰二肽及其他抗原抗体复合物、半抗体原物质和某些药物（类固醇）等。细菌内毒素一般指革兰阴性细菌细胞壁的结构成分，主要是脂多糖；生物学活性可分为两类：一是致病作用，一是保护性反应。理化特性①180℃加热2h或250℃加热30min，才可彻底破坏。②滤过性：其体积小，约在1-5nm之间，故能通过滤器进入滤液中。③具有水溶性及不挥发性。④能被强酸、强碱和氧化剂破坏。2015年06月24日微生物知识培训29类别作用机制常用种类用途酚类蛋白变性，细胞膜损伤石炭酸、来苏尔地面、器具表面、皮肤消毒醇类蛋白变性75％酒精皮肤、体温计消毒卤族元素类氧化、蛋白沉淀二氧化氯地面、器具表面、皮肤消毒重金属盐氧化、蛋白酶变性红汞、硫柳汞皮肤、粘膜、小创伤消毒氧化剂氧化、蛋白沉淀过氧乙酸、碘酒塑料、玻璃器材、皮肤消毒表面活性剂蛋白变性，细胞膜损伤0.1％新洁尔灭地面、器具表面、皮肤消毒消毒剂的种类2015年06月24日微生物知识培训30灭菌常用的灭菌方法热力灭菌气体灭菌辐射灭菌过滤灭菌2015年06月24日微生物知识培训31热力灭菌主要是利用高温的致死作用，使微生物的蛋白质和核酸等重要生物高分子发生变性、破坏，而导致细胞死亡。分为干热灭菌与湿热灭菌干热灭菌法灼烧主要用于接种工具灭菌，如接种针、接种环、刀、剪等在火焰上烧灼即可达到彻底灭菌。火焰灭菌是在无菌操作中，将试管口、玻璃瓶口等反复通过火焰数次，利用火焰对管口等进行灭菌，防止管口污染，作为无菌操作过程中的辅助灭菌手段。干烤灭菌是利用热辐射及干热空气进行灭菌。一般为160～170℃×120min以上、170～180℃×60min以上或250℃×45min以上。多用于玻璃器皿的灭菌。2015年06月24日微生物知识培训322015年06月24日微生物知识培训33湿热灭菌法：通过热蒸汽或沸水使细菌蛋白质变性而杀灭微生物的方法。煮沸灭菌：加热使水至沸而杀灭细菌的方法。凡不适于高压蒸汽灭菌的物品可常压下在水中煮沸一段时间达到灭菌目的。流通蒸汽灭菌：常压下，用蒸笼、蒸锅等在100℃灭菌。仅可杀死细菌繁殖体，不能完全杀灭芽孢。高压蒸汽灭菌2015年06月24日微生物知识培训34高压蒸汽灭菌：通过加压提高蒸汽温度，穿透力强、温度高、灭菌效果最好。是最可靠最适用最广泛的灭菌方法。通常采用121℃×15min、121℃×30min或116℃×40min。多用于培养基、无菌服等遇高温和潮湿不发生变化或损坏的物品。注意事项：完全排出高压灭菌器内的冷空气。（冷空气存在时，同一表压下所达到的温度值偏低，不符合规定的要求，灭菌就不彻底。〕2015年06月24日微生物知识培训35巴氏消毒可以杀死食品中常见的病原菌，及其他微生物的繁殖体，而又不损失食品中的营养物质。主要用于葡萄酒、啤酒、牛奶等的消毒。国际上通用的两种做法：62-65℃维持30分钟75-90℃保温15-16秒钟2015年06月24日微生物知识培训36气体灭菌利用化学消毒剂形成的气体来杀灭微生物，主要是臭氧杀菌消毒。原理：臭氧在常温、常压下分子结构不稳定，很快自行分解成氧和单个氧分子，后者具有很强的活性，对细菌具有很强的氧化作用，臭氧氧化分解了细菌内氧化葡萄糖所必需的酶，从而破坏其细胞膜，将它杀死。多余的氧原子则会自行重新结合成为普通氧分子，无任何有毒残留物。对各种细菌（包括肝炎病毒、大肠杆菌、绿脓杆菌及杂菌等）有极强的杀灭能力，对杀死霉菌也很有效。

2015年06月24日微生物知识培训37辐射灭菌电离辐射:用引起电离的x射线、γ射线灭菌，电离辐射对微生物的致死作用，主要是细胞内生物化学的变化所致。电磁波辐射紫外线（波长190～350nm）红外线（波长0.77～1000μm）微波（波长1～1000mm）紫外线辐射2015年06月24日微生物知识培训38紫外线辐射紫外线辐射的穿透力很弱，不能起到完全灭菌的作用。消毒有效区一般为灯管周围1.5～2m以内，时间为30min。主要用于无菌室、某些工作区的空气、物体表面、净化工作台及传递窗等消毒灭菌。紫外灯消毒的效果与紫外线强度、照射时间、温度与湿度等因素有关，需通过验证来确定。注意事项：紫外线直射对眼、皮肤有损害。紫外线照射过程中产生臭氧，臭氧过多对眼及鼻腔有刺激，产生头晕、胸闷、血压降低，所以无菌室及净化工作台紫外线照射停止后，请稍等片刻，让臭氧消散，方可进行实验操作。2015年06月24日微生物知识培训39过滤灭菌用滤过方法除去活的或死的微生物的方法，是一种机械除菌方法。主要用于对热不稳定的药物溶液、气体、水的灭菌滤过病毒的滤膜孔径为25～100nm；滤过细菌的滤膜孔径为0.22～0.45μm。常用除菌滤器有微孔薄膜器、摺叠式纤维素滤棒。2015年06月24日微生物知识培训40洁净室微生物控制第四十八条应当根据药品品种、生产操作要求及外部环境状况等配置空调净化系统，使生产区有效通风，并有温度、湿度控制和空气净化过滤，保证药品的生产环境符合要求。

洁净区与非洁净区之间、不同级别洁净区之间的压差应当不低于10帕斯卡。必要时，相同洁净度级别的不同功能区域（操作间）之间也应当保持适当的压差梯度。

口服液体和固体制剂、腔道用药（含直肠用药）、表皮外用药品等非无菌制剂生产的暴露工序区域及其直接接触药品的包装材料最终处理的暴露工序区域，应当参照“无菌药品”附录中D级洁净区的要求设置，企业可根据产品的标准和特性对该区域采取适当的微生物监控措施。----《药品生产质量管理规范》2010版2015年06月24日微生物知识培训41洁净室洁净度等级洁净度级别悬浮粒子最大允许数/立方米静态动态≥0.5μm≥5μm≥0.5μm≥5μmA级352020352020B级3520293520002900C级3520002900352000029000D级352000029000不作规定不作规定洁净度级别（动态）浮游菌（CFU/m3）沉降菌（Φ90mm；cfu/4小时）表面微生物接触（Φ55mm）CFU/碟5指手套CFU/手套A级＜1＜1＜1＜1B级10555C级1005025—D级20010050—2015年06月24日微生物知识培训42如何控制人员空气物料工艺用水厂房设备2015年06月24日微生物知识培训43人员人是洁净室中最大的微生物污染源，人体表面、衣服能沾染、携带污染物，人在洁净室内的各种动作也会产生微粒和微生物。动作散发的粒子数（万个/分钟）站10坐50坐下/站起100-250走500-1000爬楼梯1000运动1500-30002015年06月24日微生物知识培训44控制人身上的微生物进入洁净室按照要求更衣、更鞋洗手：七步洗手法用自来水洗手能使手上的致病微生物减少80%；用皂液充分洗手后，再用自来水冲洗能使致病微生物减少95%。消毒洗手后正确使用消毒剂能使致病微生物减少到99%。养成良好的习惯洗手消毒效果没有洗手用清水冲洗2015年06月24日微生物知识培训452015年06月24日微生物知识培训46用皂液洗用皂液洗后消毒手机外壳所带的微生物2015年06月24日47微生物知识培训养成良好卫生习惯，勤洗澡、洗头，勤理发、剃胡须，勤剪指甲，勤更衣。严格控制进入洁净室人数，只有洁净室工作人员和经授权人员方可进入，并且进出洁净室要进行登记。进入洁净室的人员，不能患传染病、皮肤病，包括隐性传染病；体表有伤口、感冒、咳嗽、腹泻者不宜进入洁净室不携带个人物品进入生产区，不在生产区吃东西工作前洗干净手，不涂抹化妆品，上岗时不佩戴饰物、手表。2015年06月24日微生物知识培训48养成良好的习惯洁净室内随时保证手的清洁，注意消毒。手在消毒以后，不再接触与工作无关的物品，不裸手直接接触药品。工作时不要快速走动，操作的动作要轻、幅度要小，讲话要少、声音要细，避免不必要的走动和动作，不要频繁进出洁净室。行走时不要穿过层流罩，不可避免时，应离层流罩外一米以外。休息时，若站着，手臂沿身体下垂，不要两臂交叉；若坐着，把手放在膝盖上，不要两臂交叉或双腿交叉。2015年06月24日微生物知识培训492015年06月24日微生物知识培训50空气过滤净化空调系统等除尘、除油、除水，维持洁净室间压差。控温控湿维持房间适宜温湿度定期熏蒸消毒小区域紫外消毒悬浮粒子检测浮游菌、沉降菌、表面微生物监测2015年06月24日微生物知识培训51物料物料领取领取合格的物料，走相应的通道。物料传入脱去外包装，除尘消毒。物料存储分类存放，按条件存储。物料使用防混淆，用清洁容器具。工艺用水纯化水和注射用水的质量标准支管的高度或长度不能高于或长于管径的六倍。注射用水储存可采用80℃以上保温或65℃以上保温循环。与药品直接接触的注射用水采用0.22微米过滤对工艺用水进行消毒处理2015年06月24日微生物知识培训52纯化水的消毒方法化学消毒剂方法膜过滤法：适用于水系统的连续循环处理紫外线照射法：适用于需要特殊处理的水，一般在末端之前。这种方法因处理过的水无臭无味，而优于化学消毒剂方法；因不产生微生物移居滤器的现象，而优于膜滤器。2015年06月24日微生物知识培训532015年06月24日微生物知识培训54厂房设备洁净室（区）的内表面应平整光滑、无裂缝、接口严密、无颗粒脱落、防霉、防静电、避免眩光并能耐受清洗和消毒。墙壁与地面的交界处宜成弧形或采取其他措施，以减少灰尘积聚和便于清洁。洁净区所用的各种器具、容器、设备、工具、台、椅、清洁工具等均应选用无脱落物、易清洗、易消毒、不生锈、不长霉的材质，不宜使用竹、木、陶瓷、铁等材质。不宜使用不易清洗、凹陷或凸出的架、柜和设备。在操作岗位中，我们一定要做到：一平厂房各处平整。二净玻璃、门窗净、地面通道净。三见轴见光、沟见底、设备见本色。四无无油垢、无积水、无杂物、无垃圾2015年06月24日微生物知识培训552015年06月24日微生物知识培训56微生态制剂2015年06月24日微生物知识培训572015年06月24日微生物知识培训58其他同类药品2015年06月24日微生物知识培训59人体肠道正常菌群微生物及其代谢产物又促进肠黏膜免疫功能的完善和影响、参与人体的多种代谢功能。人体肠道内有益菌的种类和数量的多少，在一定程度上可以反应出人体的健康状态。体质强壮者普通人老年人&体质差者70%50%10%肠道菌群种类厌氧菌兼性厌氧菌需氧菌类杆菌双歧杆菌99%2015年06月24日60微生物知识培训肠道菌群数量约重1000g大约有30个属

400~500种总体数量＞1014是人体总细胞10多倍1g1000g(约80%)20g200g20g10g20g2015年06月24日61微生物知识培训肠道正常菌群生理功能抗衰老营养免疫生物拮抗抗肿瘤2015年06月24日62微生物知识培训通过肠黏膜紧密结合构成菌膜屏障；通过占位效应、营养竞争及其所分泌的各种代谢产物（如酸性代谢产物，降低肠道pH，起到广谱抗菌的作用。）和细菌素等抑制条件致病菌的过度生长以及外来致病菌的入侵，减少有毒物质的生成，改善肠功能。抗衰老营养免疫生物拮抗抗肿瘤2015年06月24日63微生物知识培训益生菌利用本身所特有的某些酶类(如半乳糖苷酶等)补充人体在消化酶上的不足，帮助分解上消化道未被充分水解吸收的营养物质，有利于人体进一步吸收利用各种营养物质，增加人体必需的维生素(如维生素B,维生素K)、氨基酸、微量元素、某些无机盐类(如钙、磷、铁、等)的吸收和利用。双歧杆菌还具有将胆醇转化成类胆固醇的作用，因此可降低血清胆固醇和甘油三酯，具有改善脂质代谢紊乱的作用。抗衰老营养免疫生物拮抗抗肿瘤2015年06月24日64微生物知识培训活化肠黏膜内的相关淋巴组织，使sIgA生物合成增加，增强巨噬细胞吞噬活性等非特异性防御作用。发挥免疫佐剂作用，活化肠道黏膜内的相关淋巴组织诱导T、B淋巴细胞和巨噬细胞产生细胞因子，通过淋巴细胞再循环而活化全身免疫系统，增强机体特异性和非特异性免疫功能。抗衰老营养免疫生物拮抗